hep-2型细胞灵长类肝组织复合片检测抗核抗体的应用

hep-2型细胞灵长类肝组织复合片检测抗核抗体的应用 Hep-2型细胞灵长类肝组织复合片检测抗 核抗体的应用 ; 【关键词】  复合片; 【摘要】 目的  探讨用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)时复合抗原片的应用价值。 方法  分别用3种抗原片(Hep-2型细胞/灵长类肝组织复合片,Hep-2型细胞片,鼠肝匀浆片)检测抗核抗体,比较检出率和特异性。 结果  复合抗原片的检出率高、特异性好。 结论  运用Hep-2型细胞/灵长类肝组织复合抗原片检测ANA,有利于对自身免疫性疾病的初步筛选和判断。; 关键词  复合片 抗核抗体; 在自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、皮肌炎、硬皮病患者的血清中常存在自身抗体;间接免疫荧光法(IIF)是检测细胞内抗原自身抗体的“金”。其检测用的抗原片一般为组织培养细胞、器官冰冻切片、鼠肝匀浆片等,现将用Hep-2型细胞/灵长类肝组织复合抗原片检测抗核抗体(ANA)的临床应用情况如下。 ; 1 材料与方法; 1.1 血清标本 患者组:来自我院2003年1月~2004年10月住院和门诊患者,共计65例。其中SLE38例,皮肌炎9例,硬皮病9例,SS7例,混合组织结缔病2例,所有患者均符合美国风湿病学会制定的诊断标准。正常对照组30例,均为健康体检者。; 1.2 试剂和仪器 Olympus BH-2型荧光多功能显微镜,ANA复 合抗原片和抗可溶性抽提抗原抗体(ENA)的检测试剂为德国欧蒙公司提供,抗双链DNA检测试剂为福建兰波生物工程公司提供。; 1.3 应用免疫斑点法检测ENA(标本1?100稀释) 检测针对平滑肌抗原(SM),U1核糖核蛋白抗原(RNP),干燥综合征(SSA,SSB)的RO、LA抗原,硬皮病70000抗原(SCL-70)和多发性肌炎抗原(JO-1)的抗体。按操作说明书进行,免疫金斑点渗滤法检测抗双链DNA,按操作说明书进行。; 1.4 IIF法检测ANA(标本1?100稀释) 方法:(1)用Hep-2型细胞/灵长类肝组织复合片作为抗原片,(2)用HEP-2型细胞作为抗原片(万孚公司提供),(3)用鼠肝匀浆片作为抗原片(自制)。采取间接免疫荧光法检测。以出现特异性荧光为ANA结果阳性,反之为ANA结果阴性;阳性结果标本同时进行ENA、抗双链DNA的检测,进行特异性自身抗体检测。; 2 结果 ; 95例血清标本ANA检出情况见表1。; 表1 95例血清标本ANA检出情况(略); 3 讨论; 3.1 间接免疫荧光法(IIF) 此法是检测细胞内抗原自身抗体的“金标准”,检测用的抗原片一般为组织培养细胞、器官冰冻切片、鼠肝匀浆片等,现在大部分已被Hep-2型细胞代替,然而还有非常少的一部分ANA,有时不能用Hep-2型细胞检测到,但却能用肝组织和其他器官的组织切片检测到 [1] ,因此,对ANA的正确检测必须使用Hep-2细胞/灵长类肝组织复合片联合测定,从表1中可知,联合检测提高了ANA的阳性检测率。; 3.2 联合片的运用有 利于对阴性结果的判断 在实际检测中,阴性结果Hep-2型细胞有时会出现绿色微弱荧光,此时,肝组织片不发荧光,只会出现非特异性的杂光。有报道,Hep-2型细胞法检测ANA敏感性高,但特异性低于肝组织切片法 [2] 。在阳性结果的最终滴度检测中肝组织片要先于Hep-2型细胞不出现荧光。因此,联合片的运用更加有利于最终滴度及阴性结果判断。; 3.3 联合片的运用有利于将某些自身抗体预先区分 [1]  在实际检测中抗SM、抗U1-NRNP、抗双链DNA等的荧光模式,在Hep-2型细胞和肝组织上有相同的荧光强度;而抗SS-A、抗SS-B等的荧光模式,在Hep-2型细胞上的荧光强度强于肝组织的强度,虽然最终的区分需要进一步检测,但两种不同基质的联合使用显示出的荧光模式对下一步的检测提供了有利选择。; 参考文献; 1 马东来,张少静.自身抗体及其免疫荧光模式.北京:科学技术出版社,2001,37-38.; 2 刘海青.不同抗原底物检测抗核抗体的结果比较.上海医学检验杂志,2001,16(1):31-32.