前列腺特异抗原PSA酶联免疫分析试剂盒的研制

前列腺特异抗原PSA酶联免疫试剂盒的研制 第 13 卷 第 3 期 V o .l 13 N o. 3 同位素 . 20002000 年 8 月A ug Jo u rna l o f Iso top e s 前列腺特异抗原 酶联 PSA 免疫分析试剂盒的研制 崔素珍, 王玉肖, 黄文林, 刘一兵, 陈健 ( ) 中国原子能科学研究院同位素研究所, 北京 102413 摘要: 一株 单抗用于固相包被, 另一株单抗与辣根过氧化物酶偶联制备抗 酶标记物, 以四 P SA P SA () () 甲基联苯胺 TM B 为底物, 采用二步法, 建立了 P SA 酶联免疫分析试剂盒 EL ISA 制备。本方法 的 灵 敏 度 为 012 ΛgƒL , 批 内 变 异 系 数 < 513% , 批 间 变 异 系 数 < 614% , 回 收 率 为 9616%, 10515% , 特异性鉴定显示与其他肿瘤标志物无明显交叉反应。正常参考值< 410 ΛgL 。本法所制试 ƒ () 剂盒与 2试剂盒 , . 对照, 两者相关方程为 = 01993- 0116, 相关系 P SA EL ISA M ax im B io tech Incy x ()数 = 01932 = 48。 该方法具有简便、快速和准确的特点, 适于临床检测和科研应用。rn () () () 关键词: 前列腺特异性抗原 ; 酶联免疫分析法 ; 前列腺癌 P SA EL ISA PC a + () 中图分类号: 730145; 9819 文章编号: 100027512 20000320147205 R R 文献标识码: A () 前列腺特异性抗原 2是由前列腺上皮细胞产生的糖蛋白, , P ro sta tesp ec if ic A n t igen P SA 1 相对分子量为 33 。人在正常情况下, 的血液浓度很低; 当前列腺发生病变时, 大 kD P SA P SA 量进入血液, 引起血液 浓度升高。前列腺增生症及前列腺癌是中老年男性的常见病, 尤其P SA 是前列腺癌更是威胁 50 岁以上男性生命的恶性肿瘤。 近年来, 国内外学者对前列腺癌的研究越来越深入, 最重要的进展是对 的确认, 已被认为是目前前列腺癌较好的肿瘤标志 P SA P SA 2 物。血清 的测定有利于对前列腺癌的诊断、疗效观察、预后判断。国内外已广泛应用血P SA 清 免疫检测法对前列腺癌进行早期诊断和疗效评价。 本文拟采用从精浆中提取纯化的 P SA 和抗 单抗, 研制 2试剂盒。 P SA P SA P SA EL ISA 材料和方法1 111 试剂和仪器 () 前列腺特异抗原 参照文献 1提取纯化; 包被和标记用单抗由本室单抗组提供; 辣P SA ()根 过氧化物酶、四甲基联苯胺 、尿素过氧化氢均购自 公司; 酶标板购自 TM B S igm a Co sta r 公司; 2商品药盒购自酶标仪为奥地利 公司产品。临床血, ; P SA EL ISA M ax im B io tech In cSL T 收稿日期: 2000205216; 修回日期: 2000206219 ( ) ( ) 作者简介: 崔素珍 1963, , 女 汉族, 山西人, 副研究员, 核医学专业 ( ) 清标本取自: 100 例健康男性 23, 63 岁, 经体检排除前列腺疾病; 38 例良性前列腺疾病患者 ( ) ( )48, 72 岁; 10 例经临床确诊为前列腺癌的患者 58, 80 岁。 血清标本均由医院检验科提 供。 112 实验方法 3制备 的酶标记物。 辣根过氧化物11211 酶标记物的制备 采用改良高碘酸钠氧化法 P SA 酶与抗 单抗用量均为 1 , 酶结合物混合液用等体积饱和硫酸铵沉淀, 沉淀物溶于少许P SA m g 0102 ƒ14 磷酸盐缓冲液中, 经相同缓冲液透析过夜后, 加入等体积甘油于- 20 ?保 7m o lL pH 存备用。 11212 固相抗体的制备 向聚苯乙烯微量滴定板孔中加入含 包被单抗的 916 碳酸 P SA pH () 缓冲液 200 ΛL ƒ孔, 置 4 ?冰箱内过夜, 37 ?封闭 2 h 后, 酶标板可用于免疫反应。 11213 品的配制 将纯化的 抗原标定后依次稀释, 配制成 0, 50 ƒ的系列标准 P SA ΛgL 品。 11214 底物溶液和终止剂 将 和 分别溶于 柠檬酸缓冲液中, 使其浓度分 5. 0 TM B H 2O 2 pH 别为 016、112 使用时以体积比 1?1 配制即为底物溶液。终止剂为 2 溶ƒ, ƒmm o lL m o lL H 2 SO 4 液。 11215 采用二步法加样程序。 取已包被了抗体的微量滴定板条做双2分析程序 P SA EL ISA ( 孔, 每孔加 样 100 ΛL , 再 加 100 ΛL 温 育 液 摇 匀, 置 37 ?温 育 2 h; 弃 反 应 液, 用 洗 涤 液 含 ) 0105% 220洗 3 次, 加酶标记物 200 ƒ孔, 37 ?温育 2 ; 弃反应液, 洗板 5 次, 加底物 Tw een ΛL h 溶液 200 孔, 避光显色 30 ; 以 2 溶液 50 孔终止显色, 于 450 处测 ƒƒƒΛL m inm o lL H 2 SO 4 ΛL nm 定其光密度 。 绘制标准曲线, 并计算血样 含量。ODP SA 113 方法学比较 () 用本法与公司的 2试剂盒检测同一批标本 = 48, 比较相关 M ax im B io tech P SA EL ISA n 性。 2 结果 211 方法学鉴定 21111 标准曲线及灵敏度 酶联 P SA 免疫分析曲线示于图 1。同时测定 20 个 θ 零标准的 含量, 以 + 2计算得其 P SA xs 分析灵敏度为 012 。ƒΛgL 21112 精密度 重复测定三份含有不 同浓度 的人血清标本, 观察批间、P SA 批内变异, 结果列于 1。 表 1 - 试剂盒的批内与批间变异 PA SEL ISA θ- 1- 1 〃〃 CV % ƒƒƒ xΛgL sΛgL 样 品 批内 批间 批内 批间 批内 批间 310 13 11 12 14 12 30025A 817 914 013 014 219 319 B 3212 3216 117 211 513 614 C 注: 批内 n= 22, 批间 n = 7 21113 准确性 取三份不同 浓度的血清样品分别加入一定量的 标准品, 测定 P SA P SA P SA 的回收率, 结果列于表 2。由表 2 可知, 本法回收率为 9616%, 10515% , 说明本法准确性较好。 表 2 - 回收实验结果 PSA EL ISA - 1- 1含量预期值〃 含量测定值〃 回收率% ƒƒƒ P SA ΛgL P SA ΛgL 316 18 15 3105 818 815 9616 3317 3510 10318 P SA 含量较高的人血清, 进行倍比稀释。测定结果列于表 3。经计算两 取 21114 稀释试验 样品的稀释相关系数分别为 01996 和 01990。 - 1ƒ表 3 样品倍比稀释后其 含量 ΛgL PSA - 1 P SA 含量Λg〃L ƒ稀释倍数 样 品 1 样品 2 1 4315 11 24 2 2511 1517 1516 715 4 815 410 8 414 116 16 ( ) 21115 特异性 用零标准品对高浓度的 A F P、C EA 、PA P 进行系列稀释 10, 1 000 ΛgƒL , 并作为样品在本系统中测定, 结果显示 和 均无任何交叉, 在浓度低于 1 000A F P C EA PA P 时亦无交叉反应。ƒΛgL ( ) 21116 “弯钩”效应 配制一系列高浓度 样品 浓度为 2118, 350 ƒ进行测定, 未见 P SA ΛgL “弯钩”效应。 212 正常参考值 θ 测定了 100 例健康男性血样, 以 + 2为血清 含量的正常参考值上限。 均值为 215xs P SA ƒ标准差 017 ƒ正常参考值上限为 319 ƒ与目前国际上大多数方法采用的正常, , , ΛgL ΛgL ΛgL 2() 接近。值 410 ƒ ΛgL 213 临床病理值 经测定, 38 例良性前列腺疾病患者的血清 含量为 2215〒1215 例前列腺癌 ƒ; 10 P SA ΛgL 患者血清 含量为 8213〒6517 ƒ。两组分别与正常组进行了比较, 其 含量明显升 P SA ΛgL P SA ()高, 统计学分析表明病理值与正常值之间有非常显著差异 < 01001。P 214 与进口 2药盒的比较 P SA EL ISA 分别以公司的 2药盒和本药盒测定 48 例患者血样 浓度,M ax im B io tech P SA EL ISA P SA 并进行相关性比较。 两者的相关方程为 = 01993- 0116, 相关系数 = 01932。 y x r 讨论3 是目前应用较广泛的诊断前列腺癌的血清肿瘤标志物, 虽然其对于良、恶性前列腺P SA 4 () 疾病的鉴别仍有待商讨, 但近年来衍生出的 密度 和血清中游离 与总 P SA P SA D P SA P SA 5 含量的比值等测定法, 大大提高了 的特异性。 文献 6 曾对正常男性血清 在不同 P SA P SA 年龄组中的分布进行了分析, 结果显示年龄大于 50 岁的男性血清 含量有上升趋势。因此P SA 对 50 岁以上男性定期检测血清 含量可及早发现病变。 这对于前列腺癌的早期诊断、监P SA 测、随访均具有重要的临床意义。 目前国内 的应用越来越广泛, 但大多使用的是进口试剂盒, 价格昂贵。本工作研制的P SA 2原料均为本室自制, 降低了成本, 利于推广。 研究结果表明, 本试剂盒的准确性、 P SA EL ISA 精密度、重复性、稳定性均符合质量控制要求, 适于临床检测和科研应用。 参考文献: 21 , , . [ . W ang M C V a lenzue la L A M u rp h y GPP u r if ica t io n o f a H um an P ro sta tesp ec if ic A n t igen J Inve st () U ro l, 1979, 17 2: 159. 2 . 2: O e ste r ling J EP ro sta tesp ec if ic A n t igenA C r it ica l A sse ssm en t o f th e M o st U sefu l T um o r M a rk e r fo r [. , 1991, 145: 907, 923.A deno ca rc inom a o f th e P ro sta te J J U ro l 3 郭春祥, 郭锡琼 1 介绍一种简单、快速、高效的辣根过氧化物酶标记抗体的过碘酸钠法 [] 1 上海免疫学 J () 杂志, 1993, 3 2: 97, 1001 4 周国强, 丁明霞, 周青莲 1及 测定对前列腺癌的诊断价值 [] 1 中华泌尿外科杂志, 1998, 19 P SA P SA D J () 9: 537, 5391 () 5 2. : , , K im P e t te r so nF ree and Com p lexed P ro sta tesp ec if ic A n t igen P SA in V it ro S tab ilityEp itop e M ap and D eve lopm en t o f Imm uno f luo rom e t r ic A ssay s fo r Sp ec if ic and Sen sit ive D e tec t io n o f F ree P SA and 22, 1 4881[. , 1995, 41: 1 480P SA Α1 an t ich ym o t ryp sin Com p lex J C h in C h em ( ) 6 崔素珍, 王玉肖, 刘一兵 1 前列腺特异抗原免疫放射分析及临床应用 [] 1 同位素, 1998, 11 3: 149,J 1521 - The E sta bl ishm en t of an En zym el in ked - Imm un o sorben t A ssa y f or Pro sta tespec if ic An t igen 2222,, , , CU I Su zh en gW A N G Y u x iao HU A N G W en lin L IU Y ib in CH EN J ian (), , 102413, D ep a r tm en t of I sotop eC h ina I ns t itu te of A tom ic E ne rgy B e ij ing C h ina ( )22: . A bstra c tT h e tw o step a ssay is b a sed o n en zym elin k ed imm u no so rb en t a ssay EL ISA 2, , U sin g tw o an t iP SA m o no c lo n a l an t ibo d ie so n e o f th em is co a ted o n th e m ic ro t ite r p la te (). 2th e o th e r is lab e led w ith ho r se rad ish p e ro x ida se H R PO TM B H 2O 2 so lu t io n is u sed a s th e . 0. 2 ƒ2. su b st ra te o f H R POT h e sen sit iv ity o f th e a ssay is ΛgLT h e in t raa ssay CV s an d th e 3% 4% 23 5. an d 6. re sp ec t ive ly. T h e an a ly t ica l in te ra ssay CV s o f sam p le s a re low e r th an 96. 6% 105. 5%. 2100 reco ve r ie s a re ran ged f rom to T h e refe ren ce cu to ff va lu e f rom h ea lth y (4. 0 2ƒ. , m en is ΛgLT h e co r re la t io n co eff ic ien t com p a r in g w ith P SA EL ISA M ax im B io tech ) (). 0. 932 = 48. , . In cis n T h is a ssay is a rap idsen sit ive an d p rec ise m e tho dIt is su itab le fo r .c lin ica l an d re sea rch app lica t io n ( ) ( ) : 22; ;Key word sp ro st tesp ec if ic an t igen P SA en zym elin k ed imm u no so rb en t a ssay EL ISA ()p ro sta t ic can ce r PC a 专利简讯: 临床介入射线防护装置 【公告日】991124【分类号】A 61B 00610【公告号】CN 2349990Y 【申请号】9824594813【申请日】981216【申请人】武汉市江汉射线防护技术开发中心 【摘要】本实用新型涉及一种临床介入射线防护装置, 包括诊断床头防护部分和诊断床侧 防护部分, 特征是所述诊断床头防护部分由主防护屏和升降防护屏组成, 它们都由金属框架和 内嵌的两层钢板及一层铅板构成, 在升降防护屏下挂有一铅橡皮软帘, 升降防护屏通过升降机 构与主防护屏铰接, 所述诊断床侧防护部分是由悬挂在诊断床边的铅橡皮软帘构成。该装置能 有效保护医护人员, 使医护人员在临床介入操作时不穿戴任何防护器材。 《同位素》编辑部摘自《科技信息》2000 年第 2 期