1例土埋2年半尸体的指甲DNA检验

1例土埋2年半尸体的指甲DNA检验 法律与医学杂志2006年第13卷(第1期)?55? ? 法医学理论与实践? 1例土埋2年半尸体的指甲DNA检验 孙耀东李健 (江苏省盐城市公安局刑事科学技术研究所.224002) 【关键词】指甲;DNA提取;DNA纯化 【中图分类号】D919.2 【文献标识码】B 【文章编号】1007—9297(2006)01—0055—02 在13常检案中,DNA检验人员通常根据尸体的腐 败程度来决定提取那种检材以及采取何种方法得到 足够的遗传信息.据高俊薇等[]报道,当检验腐败尸 体的心血,肌肉等组织无法得到STR分型结果时,拔 取其指甲进行STR分型往往能得到满意的效果.指甲 检验成功率与保存环境有关.土埋1个月以上尸体的 指甲DNA经有机法提取成功率不高.本例在处理一 起土埋2年半,完全白骨化的尸体时,以指甲作为检 验对象.分别以有机法,硅珠法和磁珠法对经Chelex一 100提取后的模板DNA进行纯化浓缩.并对其效果进 行比较. 一 ,样本来源 2005年7月中旬,在距本市某内陆河人海13约 200m河堤上挖出一具尸骨,尸身躯体部分完全白骨 化,仅颅骨尚有少部分头皮,已形成尸蜡.尸骨埋于地 下约6Ocm,周围泥土呈黄褐色,初步判断死亡时间2 年以上(案后证实死亡时间为2年4个月),提取死者 指甲送检. 二,检验 指甲呈黑褐色,质硬,略带弹性,甲根端可明显辨 明. 以洁净的市售细目砂纸反复擦拭指甲甲根两面 至灰白色,1%SDS振荡洗涤2,3遍,再以纯水漂洗2— 3遍.室温下晾干.用手术刀片将甲根部分沿横断面削 成长约O.5cm的薄片约0.2g,置于1.5mlEppendoff管 中,加入150IxlChelex(1O%),60lSDS(20%),601xl DrlT(1mol/1)以及30lPk(10mg/m1),56?水浴消化 12h;按前量补充DTT和Pk,换以37?水浴再消化 12h.沸水煮沸8min,12000r/min高速离心7min.分 3份各取上清液100Ixl,分别以有机法,硅珠法和磁珠 法纯化浓缩,15lTE缓冲液溶解. 采用Promega公司PowerPlex~16System试剂盒, 10l扩增体系,模板DNA用量7.7l.主要仪器: ABI9700扩增仪,ABI3100一Avant基因分析仪. 三,结果 经chelex法提取.未做任何后期处理的样本,分 型失败:经有机法处理的,仪得到AmeI及3个小片段 STR基因座的分型结果:经硅珠法处理的,除Tpox, FGA,PentaE,PentaD及CSFIPO外,得到Amel及其他 11个STR基因座的分型结果;经磁珠法处理的,得到 Amel及全部l5个STR基因座的分型结果,只是相对 荧光强度不均衡(最高的Amel可达1500,而最低的 基因座CSF1PO仅为50左右).结果见图1.取经磁珠 法处理得到的模板,梯度降低模板量扩增,分型结果 尚不及前者;改用ABI公司Profileplus试剂盒检测, 亦未见明显改善. 得到指甲STR分型结果时无死者双亲作对比,分 析过程完全按照标准程序进行,分析阈值设定为40. 后经与当地失踪人员仰某的双亲血样的分型结果比 较,RCP值达99.9998%.可以认定亲子关系. 四,讨论 本例尸骨埋于土中2年有余,埋尸地点靠近水 源,土壤湿度较大,周围土壤属海滩盐碱地,富含Ca, Na~,K+,Mnz+等无机离子和多种矿物质,PH值介于8. 5~9之间,加之埋尸深度较浅,受环境温度影响较大, 至发现时软骨已完全腐败,周身白骨化.采用Chelex 法对去除泥土中的二价金属离子非常有效,但提取得 到的DNA无法去除其他PCR抑制剂.经分别选用有 机法,硅珠法和磁珠法3种最常用的纯化方法对经 Chelex一100提取后STR分型失败的模板DNA进行纯 化浓缩.仅磁珠法获得了较为满意的结果,可能缘于 以下因素:(1)土埋时间较长,指甲中DNA降解严 重,有效片断含量较少,有机法提取过程涉及多次转 移和一次乙醇沉淀等步骤,小片段DNA分子提取效 【作者简介】孙耀东(1975一),男.江苏滨海人,学士,主检法医师,主要从事法医物 证检验工作.l:+86-515-8226600—20453,20163 E—mail:syd20163@yahoo.corn.cn