福定碱的抗胆碱酯酶作用

福定碱的抗胆碱酯酶作用 福定碱的抗胆碱酯酶作用 李春德’问敬初(军事医学科学院毒糟药轴研究所北京lO08GO) 摄募福定碱殪凡真睦疆喊酯酶(thE)的抑制是假性chE的55386倍.对假性ChE的作用有显着的 种属差异.它对真性chE的抑制强度由强至弱是人.狗.家兔,猫,大鼠和小鼠;对假性chE的作用强 度依次是家兔,大鼠.狗.猫.小鼠和人.体内给药对脑和血液ChE都有明显的抑制作用,抑制chE 的活力可自动嵌复.但所需时间较长. 关键词福定碱胆碱醇薛腰碱酯酶抒制剂 福定碱(fordine)是本所徐择邻等”‘1985年 从石杉科华南马尾杉PhIegmeri~trusfordine (Baker)Chlng中分离得到的一种新的生物 碱.我们以前的实验结果已初步明,福定碱 具有轻强曲拟胆碱作用.浙江医学研究院等单 位从石杉科另一种植物千层塔中也分离出一个 理化性质,药理作用与福定碱相同的化台物, 并命名为石杉碱甲.’本文福定碱对人及 不同动物血液和脑组织胆碱酯酶(ChE)作用 的异同. 材料和方法 一 ,材料 1.动物小鼠,大鼠和棠兔均系本院实验 动物场繁殖饲养J猫和掏系购自我国北方杂种 动物,雌雄不拘,自由食水. 2.药品器材福定碱和催醒宁(对照药) 由本所药物合成室和植化室供给,澳化乙酰胆 瓣为上海试剂三厂产品(化学纯),其余化学试 剂均系北京化工三厂产品(化学纯).分光光 度计为沪产751型,比色渡长为51Ohm. =,方法 1.酶源血浆,将肝素抗凝的垒血以3300 r/rain离心1O分钟,取上清液即为血浆J红细 胞悬液:垒血经离心弃血浆后加入1O倍体积的 等渗NaC1溶浪稀释,混匀并(1:1)0.3ml,延脑匀浆.1ml,血浆0.4mlt ?家兔红细胞悬液(1:i)o.4mI,延脑匀浆0.08 ml大脑皮层匀浆0.15ml,血浆0.3m}?猫 红细胞悬液(1?0.8)0.4ml,血浆0.15mlt狗 红细胞最液(1I)0.2mI,血浆o.Iral. 3.ChE活力测定甩比色法蒯定ChE活力. 首先把酶源,底物(0.O?mol/LACh0.5m1) 和pH7.3的磷酸盐缓冲疆三者的混合液(总反 应量I.0m1)在37?恒温水浴中孵温3O分钟, 其间每隔5分钟摇荡一次.酶与底物作用30分 钟时立即加人碱羟胺溶液(以等体积的2tool/ L盐酸羟胺和3.5mol/L氢氧化钠i鼙液混台液) 2,0ml终止反应,混匀,静置5分钟后加2tool/ L盐酸2.0ml进行酸化,最后加入0.197mol/L 三氯化铁溶液3m!显色.然后,棍匀,过谴, 用分光光度计铡光密度 路果 一 ,体外试验 1对血浆ChE活力的抑翎作用抑制ChE ‘现在工怍单位军事医学科举院情报所 活力的强度,以不加抑制药物时酶活力为对 照,以剩余酶话力的[Logit(P)]对药物克分予 浓魔(tool/L)的负对教傣图,求出抑制酶括 力50对的药物浓度(剂量,耶为PI. 福定碱对人及不同动物血浆ChE(又称假 性Chg)的PIo值见襄l,抑制强度由弱到强依 次为家兔,大鼠狗,猫,小鼠和人.催醒宁 (--种l己知的chE挪制荆)对人及不同动物假 性C活力的摊制作用未见噼显的种属差异. 表l福定碱和催醒宁对假性ChE的抑制强虞 2.对红细胞和脑AChE括力的抑制作用 棍定碱对A及毋同动物红细胞和(或)脑AChE (叉称真性ChE)活力均PI值见表2.结果表 鼹,福定碱对人爰不同动物红细胞真性ChE活 力均有较强的抑制作用,其抑制强度由强到辩 依次为,人,狗,瘃兔,描,太鼠和小鼠.-它对小 鼠全脑家兔延琏和大脑皮屠真性ChE播力也 景有较强的掷错孛簪甩. 袭2福定碱雅醒宁对不同酶源真性 chE的抑制强度 上述结果显示,福定碱对不同动物及人真 性cE的选择性作用相当强,尤其对人红细胞 真性ChE的作用比对假性ChE的强得多(圈一). - ~Kmol/L】 图一福定碱对人红细咆和血浆chE 活力的抑制作用 二,体内试验 1.对小鼠ChE活力的抑制作用培小鼠腹 腔注射(iP)不同剂量的福定碱后3O分钟,立即 取血和脑溯定其ChE活力.褒3结果表明,小鼠 给福定碱(p)后30分钟脑和红细胞Chg活力都 存一定的抑制作用,其作用强度与卉I量有关. 但它对小鼠血浆ChE活力没有明显的抑耕作 用,这与体外.戚验结果是一致的. 表3福定碱和值醒宁对小鼠脑和 血液chE的抑制作用 剂量 药|曲—— (ag/tg)脑 ChE}舌力抑制率(嘶) 红细胞血襞 福定醚0.12.7士a O.520.6?1.B 1.O26.8?2.4 催醒宁0.52t.量?1.6 1.03p.3?2.9 17.??0.8 27.3?O.8 09.2?1.7 17.6?1.O 19.5?1.I 1.5?I.4 1.O?1.0 0.2?8.0 l5.口?S.8 B2.??1.0 ?5(下同) 2.对家兔ChE话力的抑制怍用实验日的 旨在了解福定碱出现药理反应剂量与chE话力 抑制之间的关系.在用八道生理仪观察家兔静 脉注射(iv)福定碱的药理作用l小时后,立即 取血和脑测定ChE活力(表4). 表4福定碱和催醒宁对家兔脑和 血液chE的抑制作用 剂置 l自一 (s/ks)延脑 ChE嚣力抑制率(嘶) 大脑皮层缸细胞血浆 福定碱lO 50 250 翟醒宁600 中国中药杂志1991年第1e卷第2期 皇 ?”柏” 1B08 l3’O 5lld 5”=j 179? 船勰0 表{结果表明,福定碱(10~g/kg,iv)对京 兔脑和血液ChE括力无明显的抑制作用,但此 剂量已引起部分(2/4)动物出现自发肌电50 ~g/kg时可见脑和血液ChE活力受到明显抑制, 该剂量组家兔约在给药后5分钟出现脑电去同 步化反应和自发肌电;给0.25mg/kg后1分钟 即可见脑电持续去同步化反应与高额,高幅的 肌电,呼吸浅快(后变慢),血流下降,但血 压,脉压差,心电,心率等生理指标未见明显 变化.表明浚药在体内的作用时间较长.棠兔 在给催醒宁(O.5mg/kg)后l小肘脑和血液ChE 活力均已接近正常对照水平,表明它在体内曲 作用时间比福定碱短. 3.对大鼠ChE括力朐抑制作用大鼠给福 定碱1,5mg/kg(o.1个LD.)灌胃(ig)后2小 时,测延脑,红细胞和血浆ChE括力的抑制率 分别为14.6,18.7,40.6;5.0mg/kg(ig) 组分别为25.0,28.7,47.9,催醒宁 0.32mg/kg(0.1个LDo)剂量组分别为8.3”A, d.7,8.8.表明大鼠在给福定碱(0.1个 LDo)2h后,其延脑,红细胞和血浆ChE活力{}li 有显着的抑制,但对照药催醒宁(o.1个LD.) 的作用不明显. 大鼠每天给福定碱(jg)一次,剂量从0.1 个LDo开始,每隔3天递增0.5倍,共给药28 天,此时的累积剂量已达I2,8个LD.,未见 动物死亡.对照组(给催醒宁0.1个LD.开 始,同福定碱)大鼠在给药的后期有部分 动物死亡.在每次给药后的24小时测受试药 组,药物对照组及空白对照组大鼠脑和血液 ChE括力,未发现明显的抑制作用.福定 碱虽然在体内作用时间较长,但它对ChE的作 用在2.JA~时内,并且没有明显的蓄积作用. 4,对ChE括力抑制的速度及可逆性小鼠 在给福定碱(ip)后,于不同时间处死,取脑测 定ChE括力,井计算酶活力的自动恢复率(图 =). 小鼠在给福定碱O,5mg/kg和1-0mg/kg (ip)后5分钟即可测得脑ChE话力已受到抑制, 给药后30分钟脑ChE活力的抑制接近或达到 中国中药杂志1991年第lB卷第2期 时?甘’ 图二福定碱和胜醒宁体内抑制小鼠滴 ChE活力的自动斑复 峰值,但在给药后第8小时脑ChE活力仍有一定 水平的抑制.这些结果提示,福定碱的吸收速 度快,进入中枢的能力强,受抑制的ChE活力 早期恢复较快,后期恢复慢,尤其大剂量(1.0 mg/’kg)组曲恢复更慢.由图二可见催醒宁抑制 的ChE活力恢复相当快,给药后4小时酶活力已 基本恢复正常. 讨论 奉研究以多种动物和人的酶源证明,福定 碱是一种对真性ChE作用较强的抑l剁剂,抑制 的酶话力可自动恢复.它对人真性ChE括力的 选择性抑制作用非常强,面对人假性ChE的作 用非常羁.如福定碱抑制人红细胞真性ChE和 血浆麒性ChE话力50的浓度(I.-)为3,611× 10mol/L(PI5.=7.44j和2.00O×10.tool/L (PI.:2.70).它对候性CllE括力的抑制在 不同酶源上显示了较大曲种属差异,如对人血 浆ChE的作用最弱,仅分别为对家兔血浆ChE (I.:8.198×10tool/L)的1/24390,对大鼠 血浆c?E(I5.=9.170×t0.tool/L)的U2181. 对照药催醒宁对人及不同动物酶源ChE括力均 有较强的抑制作用,未见明显的种属差异. 福定碱对属于以同一种假性ChE为主的动 物及人的艉性ChE括力的抑制作用亦不相同. 如它对以丁酰ChE为主的人,猫,狗血浆ChE括 力的PI.o分别为2,7,5.57和5.58,对以丙酰 ChF为主的小鼠,大鼠和家兔假性ChE活力的 PI.分别为4.23,6.04和7.09.存在选种差 异的原困尚未明了,可能与不周种属间ChE的 结构变异有关.福定碱对人及不同动物真性 ChE活力的抑制无明显的种属差异. 福定碱在相当小的剂量就可引起肉眼可见 的肌颤和自发肌电,该剂量下未见ChE活力的 抑制.这可能提示,福定碱除了直接作用于ChE 外,可能还有其它方面的药理活性,尚值得进 一 步研究.虽然它在体内对ChE的作用时间较 长,但在体外试验系统发现,它与ChE的结合 并非十分牢周,很窖易被洗脱….这可能提示, 它在体内形成的药物一酶复台物在解离后又可 重新结合,而在体外实验体系中药物一酶复合物 解离后药物即被洗去 参考文献 (1]棘择邻等.解放军医学杂志lgB5:lO(4):263 (2]刘磊森等.化学1080J”(10)t1035 (3]官泽辉等.军事医学科学院院刊1980j10【6)451 1989年8月23日收稿 干姜及其主要成分的抗凝作用 许青媛于利森张小利蒜瑞明陈春梅(陕西省中医药研究院西安 710003) 干姜为传统的温里药之一,具有温中散 寒,回阳通脉,燥湿消痰之功效.用于脘腹冷 痛,肢冷脉微,虚寒崩漏”‘.其水提渡及醚提 液能促进血液循环,末梢血管收缩,反射性兴 奋血管运动中枢,通过交感神经兴奋,使血压 上升.’.为瑰察其促进血液循环同时是否也改 善凝血系统,我们观察了干姜及其挥发油对实 验性血栓形成及凝血系统的影响. 材料 干姜,经鉴定为姜科植物姜Zingiber of/i~inafeRose.(鉴定人为本院生药研究室 权宜淑,西北植物所生药标本室审椿)的干燥 根茎.千姜挥发油,为千姜粗粉以石油醚(30 — 60.)冷浸2敬,每次3天,合并石油醚,回收 石油醚,得淡黄色油状物,临用时用阿拉伯胶 配成乳荆J千姜水提物,经石油醚提取后的残 渣,加水煮沸30分钟,倒出水提液,残渣再加水 煮沸30分钟,合并两次水提液,浓缩成100 浓度.凝血酶为上海华山医院生化室提取的市 售品.仪器为BT,87吨型实验性俸内血栓形成 掼f定仪,由包头医学院心血管研究室村造. 方法与结果 一 ,对实验性血栓形成的影响 112? 选Wistar种大鼠70只,体重190?20g,雌 雄各半,随机分成6组.正常组给以等窖积的 5阿拉伯胶水溶液,干姜水提物组灌胃10,20 g/kg(相当于LD.的1/10一l/5).干姜挥发 油组灌胃0.751.5ml/kg(相当于LDo的1/10 — 1/5).给药i小时后,腹腔注射乌拉坦1.0 g/kg,按Htadove法稍加改良,剥离左顼总动 脉长15ram,将体内血拴测定仪的刺激电极和 温度探头钩于动脉血管,用1.5mA直流电刺激 5分钟,当动脉内因血栓形成堵塞血流时,血 管远端温度降低,从刺激开始至温度突降所需 时间称为堵塞时间(OT),以OT长短判断药效 指标.肝素组静注100U/kg,给药40分钟后, 按同法测定血栓形成的时间.由表1可见,肝 素~ooU/kg剂量时,能明显延长实验性血拴形 成的时间(P<0.001).干姜水提物组在10, 20g/kg剂量下,均使实验性血栓形成延迟,与 对照组相比显着延长.干姜挥发油组在0.75, 1.5ml/kg剂量下,均使实验性血栓形成延 迟,OT值比对照明显延长.结果表明干姜有 预防血拴形成的作用. =对凝血功能的影响 与实验性体内血栓形成同步进行,在测定 血拴形成时间之后,取血坝定血浆凝血酶原肘 ‘为国家自然科学基盘资助课题N03a60B3B 中国中药杂志1091年第16f-第2期