hplc法测定注射用肌苷的含量

hplc法测定注射用肌苷的含量 HPLC法测定注射用肌苷的含量 【摘要】  目的  用高效液相色谱法测定注射用 肌苷的含量。方法  采用Kromasil C18柱,5μm 4.6mm ×250mm)～以甲醇-水,10:90,作流动相～在248nm紫外 波长检测。结果  肌苷在4.23，63.48μg/ml范围内 有良好的线性关系,r=0.9999)。低、中、高3个浓度的平 均回收率,n=2,分别为101.4%、101.8%、101.1%～RSD为 0.46%。结论  该法简便、快速、准确～可作为测定注 射用肌苷中肌苷的含量。     【关键词】  注射用肌苷,高 效液相色谱法,含量测定      【Abstract】  Objective  A high-performance liquid chromatography (HPLC) was established for the determination of inosine contents in injection.  Methods  Impurity in the inosine injection could be separated on Kromasil C18 colnmn (5μm 4.6mm×250mm) using methanol-water (10:90) as mobile phase and UV detector at 248nm.  Results  The linear range was 4.23，63.48μg/ml(r=0.9999).Average recovery in the lower,moderate and higher inosine concentration groups was respectively 101.4%,101.8% and 101.1%(n=2) with RSD of 0.46%.  Conclusion  The method is simple,rapid and accurate.     【Key words】  inosine injection;HPLC;concentration determination      肌苷为微生物发酵制得的辅酶类药 物～有改善机体代谢作用～临床用于各种类型的肝脏疾患、 心脏疾患、白细胞和血小板减少症、中心视网膜炎及视神   经萎缩等。有关标准规定  ,1,～注射用肌苷 含量测定采用紫外分光光度法～该方法操作复杂、费时且专 属性差。为了有效地分离降解产物～准确测定注射用肌苷含 量～本文采用高效液相色谱法,HPLC,测定注射用肌苷中肌 苷含量～获得满意结果。     1  仪器与试药     高效液相色谱仪:DIONEX P680 HPLC PUMP泵,DIONEX UVD170U紫外检测仪,Chromeleon Server Monitor工作站。     肌苷对照品,含量99.2%～中国药品生物制品检定所,～注射用肌苷分别为山西,规格:0.3g批号20060101,2006126,,海南,规格:0.2g批号20051201,。甲醇为色谱纯～试验用水为重蒸馏水。     2  色谱条件     色谱柱:Kromasil C18(5μm 4.6mm×250mm);流动相:甲醇-水,10:90,,检测波长为248nm,流速1.0ml/min,柱温为25?,进样量20μl。     3  线性关系的考察     3.1  对照品储备液的制备  精密称取对照品10.58mg～置100ml量瓶中～加水溶解并稀释至刻度～摇匀。     3.2  标准曲线的绘制  精密吸取对照品储备液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0、15.0ml～分别置25ml量瓶中～加水稀释至刻度～摇匀～分别进样20μl～依法测定。以各溶液的浓度为横坐标～以峰面积为纵坐标～绘制工作标准曲线～肌苷的线性回归方程为Y=0.726X+0.068,r=0.9999,n=6),在4.23，63.48μg/ml浓度范围内呈现良好的线性关系。     4  精密度试验     取含量测定项下肌苷对照品溶液20μl注入液相色谱仪～重复进样5次～测定峰面积～结果肌 苷峰面积的RSD为0.14%,n=5)～表明本法精密度良好。     5  重复性试验     按供试品溶液制备方法处理同一批号样品5份～测得肌苷的平均含量为105.5%～RSD为1.3%,n=5)～表明本法重复性良好。     6  回收率试验     精密称取已知含量的样品适量,约相当于肌苷50mg,～分别精密加入肌苷对照品约40mg、50mg、60mg,置100ml量瓶中～加水溶解并稀释至刻度～摇匀。精密量取2ml～置100ml量瓶中～加水稀释至刻度～摇匀。按样品含量测定相下方法测定并计算回收率～结果见表1。     7  稳定性试验     取含量测定项下肌苷对照品溶液20μl分别于0、2、4、6、8、12、24h测定～测得肌苷HPLC峰面积为0.9%～表明溶液在24h内稳定。  表1  回收率测定结果     8  样品测定 1     8.1  对照品溶液的制备  取“3.1”项下对照品储备液5ml置25ml量瓶中～加水稀释至刻度～摇匀～即得对照品溶液。     8.2  供试品溶液的制备  取装量差异项下的内容物～混合均匀～精密称取适量,约相当于肌苷0.1g,～置100ml量瓶中～加水约70ml～充分振摇使肌苷溶解～用水稀释至刻度～摇匀～滤过～精密量取2ml～置100ml量瓶中～加水稀释至刻度～摇匀。     8.3  含量测定  精密量取“8.2”项下供试品溶液20μl注入液相色谱仪～记录色谱图～同法测定对照品溶液～按外标法以峰面积计算其含量。结果见表2。表2  样品测定结果     9  讨论     9.1  检测波长的选择  由于肌苷在酸性和高温条件下易分解为次黄嘌呤～且次黄嘌呤在249nm的波长处有最大吸收～肌苷的最大吸收波长为248nm,2,～故选择248nm作为检测波长。     9.2  流动相的选择  参考文献,3,～并经过实验～选择了甲醇-水,10:90,为流动相～能将杂质,降解产物,与肌苷分离～且分离效果较好～保留时间合适。     【参考文献】     1  国家食品药品监督管理局.标准,试行,YBH12992004.     2  李金屏.肌苷及制剂质量标准修订起草说明.2005年版药典增修订情况介绍.     3  国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社～2005～二部:205.