黄连吴茱萸单煎后配伍沉淀物的化学成分研究

黄连吴茱萸单煎后配伍沉淀物的化学成分研究 黄连吴茱萸单煎后配伍沉淀物的化学成分 研究 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月?515? 黄连吴茱萸单煎后配伍沉淀物的化学成分研究 何丽仙h.,黄忠京,谭倪,林永成 (1.中山大学化学与化学学院天然有机研究室,广东广州510275; 2.大理学院生命科学与化学学院,云南大理671000) 黄连,吴茱萸药对配伍已有悠久的应用历史, 《丹溪心法?火六》中的左金丸(6:1),《太平圣惠 方?治水泻诸方》中的变通丸(又叫茱萸丸,1:1), 《圣济总录?中喝门》中的甘露散(2:1)等,都是通 过改变该药对配伍的比例而来.现代临床应用也证 明,调整黄连,吴茱萸的用量比例,可用于治疗多种 与脾胃功能失调有关的疾病,如胃脘痛,腹痛,呕吐, 呃逆,泄泻,便秘,痢疾,反酸嗳气,痞满等[1].古方中 左金丸,变通丸,甘露散等均采用散剂或丸剂.据文 献报道,黄连与吴茱萸复方煎出液可产生沉淀,且复 方煎出液中黄连生物碱和吴茱萸生物碱的量均有不 同程度的下降,有人认为生物碱量的降低是由 于两药配伍后使生物碱的溶解度下降所致,也有人 认为是两药配伍后黄连生物碱和吴茱萸黄酮类成分 发生化学反应形成沉淀所致[4].沉淀物是否为具有 生理活性的有效成分,这是制剂中应引起注意的问 .本实验对黄连,吴茱萸煎液产生的沉淀进行了研 究,首次从沉淀物中分离得到7个化合物,经鉴定分 别为吴茱萸次碱(evodiamine,I),吴茱萸碱(ru— tacarpine,?),N一甲基一邻氨基苯甲酰胺(?一methy— lanthranylamide,?),吴茱萸酰胺(evodiamide, ?),小檗碱(berberine,V),药根碱(jatrorrhizine, VI)和巴马汀(palmatine,?). 1材料与仪器 黄连为毛茛科植物味连Coptischinens~Franch 的干燥根,吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia,.一 taecarpa(Juss.)Benth的干燥近成熟果实,购自广 州市康柏医药有限公司.熔点用X一4数字显示显微 熔点测定仪测定;旋光度用Perkin—Elmer241旋光 仪测定;核磁共振谱用Mercury--Plus300型核磁共 振仪测定;质谱用ZAB—HS质谱仪测定;红外光谱 用Perkin--Elmer683型红外光谱仪测定;紫外光谱 用日本岛津UV一3150型紫外光谱仪测定;柱色谱 硅胶为青岛海洋化工厂产品;紫外灯显色. 2实验方法 2.1提取和分离:黄连,吴茱萸药材各100g,分别 加水1000mL,加热提取1.5h,滤过,药渣加水800 mL,加热提取1h,滤过,两次滤液合并,滤过并定容 至1800mL.混合黄连与吴茱萸煎液即有大量黄色 沉淀物产生,于100?油浴中加热1h,冷却后补充 损失的水分,滤过,分别用100mL水洗涤沉淀物两 次,干燥得1.8g棕黄色沉淀物.该沉淀物部分溶于 甲醇,乙醇,四氢呋喃,稀酸,二甲基亚砜,不溶于石 油醚,丙酮.部分沉淀不溶于上述任何溶剂. 沉淀物置于索氏提取器,甲醇回流提取至无色, 提取液浓缩后进行硅胶(200~300目)柱色谱分离, CHCl3一MeOH(95:5,90:10,85:15,80:20)梯度 洗脱,每份20mL,TLC检查,展开剂为石油醚一甲 酸乙酯一甲醇(20:10:2),紫外灯显色,合并4,7 份回收溶剂,Me.CO重结晶得化合物I;合并15, 22份回收溶剂,Me.CO重结晶得化合物;合并 25,33份浓缩,硅胶制备TLC分离(展开剂同上), Me.CO一石油醚重结晶得化合物?;5O,62份浓缩 以硅胶制备TLC分离(展开剂同上),MeCO重结 晶得化合物?;8O,124份浓缩反复硅胶制备TLC 分离,展开剂,z一丁醇一水一醋酸(7:1:2);紫外灯 254,365nm显色,得化合物V,?,?. 2.2结构鉴定 化合物I:白色针晶,mp263,264?,MS/ 2:287(M,100),286(M一1),(90).UV2"nm (1oge):212(4.51),234(sh),240(sh),275(3.85), 286(3.89),330(4.46),343(4.53),361(4.43).IR v…KBr(cm):3341,l653,l600,l548,1470,1408, 1327,1229,770,762,727.H—NMR(CDCl3,9O MHz):9.98(1H,brs,N—H),8.28(1H,d,J一8.0 Hz,H一4),7.0—7.8(7H,m,H一1,2,3,9,】0,1】, 收稿日期:2006—12—26 基金项目:中大一星湖医药化工研究中心研究基金(31250,7101008) 作者简介:何丽仙(1966一),女(白族),云南省大理市人,大理学院副教授,1990年毕业于东北师范大学,获得硕士学位,现主要从事有 机化学教学和中草药研究与开发工作.Tel:(O872)2200326E—mail:MLXI218@yahoo.com.cn *通讯作者林永成Tel:(020)84113356E—mail:ceslyc@zsulink,axu.edu.cn ?516?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月 12),4.56(2H,d,J一8.0Hz,H2—7),3.24(2H,t, 一 8.0Hz,H一8),与文献中吴茱萸次碱的数据一 致嘲,因此鉴定化合物I为吴茱萸次碱. 化合物?:无色柱状晶体,mp268,270?, [n]+567..MSm/z(9/6):304(M+1,100),303 (M,70),170(25),169(60),134(60),133(10). UV黧"nm(1oge):224(4.78),267(4.13),281 (4.10),290(4.01).IRv(cm):3230,2937, 2900,1640,1628,1606,1511,1449,1280, 1166,746,724.H—NMR(CDCl3,90MHz):8.92 (1一H,brs,N—H),8.12(1H,d,J一9.0Hz,H一4),7.0 — 7.68(7H,ITI,H一1,2,3,9,10,11,12),6.04(3H, m,H一8,7),2.60(3H,s,N-CH?).以上数据与文献 中吴茱萸碱一致],因此鉴定化合物?为吴茱萸碱. 化合物?:无色柱状结晶,mp142,144?,MS m/z(9/6):150(M,100),133(M—NH—H),105 (M—CONH—H).UV"nm(1oge):216 (4.39),256(3.99),348(3.71).IRv(cm): 3400,3355,3172,2812,1660,1616,1580, 1512,1472,1406,1319,1295,1173,748,637. H—NMR(CDCl3,90MHz):2.91(3H,s,N—CH3), 5.82(2H,brs,NH),6.57(1H,dd,J一8.1,1.8Hz, H一6),6.73(1H,d,J一8.1Hz,H一4),7.30—7.41 (2H,ITI,H一3,5).以上数据与文献中?一甲基一邻氨 基苯甲酰胺一致_7],因此鉴定化合物?为?一甲基一 邻氨基苯甲酰胺. 化合物?:无色晶体,mp189,190?,UV … EtO"nm(1oge):220(4.76),250(3.90),284(3.84), 290(3.83).IRv(cm):3338,3186,1620, 1602,1577,1516,1400,1285,1235,1120,749. MSm/z(%):307(M,10),164(65),143(40),134 (100).H—NMR(CDCl3,90MHz):2.88(3H,s, NCH3),3.07(5H,ITI,NCH3与H一6的重叠峰),3.80 (2H,ITI,H一5),5.50(1H,ITI,NH一14),6.6—6.8(2H, m,H一9,18),6.95—7.48(7H,ITI,H一2,10,11,12, 17,19,9).以上数据与文献中吴茱萸酰胺一致[8],因 此鉴定化合物?为吴茱萸酰胺. 化合物V:黄色针晶,mp146,148?,UV, MS,H—NMR,C—NMR数据与文献中小檗碱一 致],因此鉴定化合物V为小檗碱. 化合物?:橙色柱状晶体(甲醇+氯仿),mp 209210?,UV,MS,H—NMR数据与文献中药根 碱一致嘲,因此鉴定化合物?为药根碱. 化合物?:黄色晶体(甲醇+氯仿),mp210, 212?,UV,H—NMR数据与文献中巴马汀基本一 致m],因此鉴定化合物?为巴马汀. 3结论 实验结果,沉淀物溶于甲醇部分主要由吴茱萸 中的有效成分吴茱萸碱,吴茱萸次碱及黄连中的有 效成分小檗碱,药根碱和巴马汀等组成.说明黄连配 伍吴茱萸会同时降低黄连和吴茱萸生物碱类化合物 的溶解度,至于是否有化学反应发生或有新物质的 生成,则需进一步对不溶于甲醇部分的沉淀物进行 深入的研究,可以肯定的是将沉淀除去必将影响黄 连,吴茱萸药对的药效作用(药理实验也证明沉淀中 不溶于甲醇部分和溶于甲醇部分均有药效作用,将 另文发). References: [1]LiCC,LiuMP.Theclinicalpracticeandpharmacologyof Zuojinwan口].LishenzhenMedMaterMedRes(时珍国医国 药),2000,11(5):471. [2]YeEQ,XuSF.Changeofalkaloidscontentbydifferent proportionofcompatibilitybetweenBhizomaCoptidisand FructusEvodiae[J1.HebeiJTraditChinMed(河北中医), 2000,22(5):397. [3]PengMX,WuYJ,ChengYY.Studyonthesolubility changesofRhizomaCoptidismainchemicalconstituentsin— fluencedbytheproportionofRhizomaCoptidisandFructus Evodiae口].ChinaJChinMaterMed(中国中药杂志), 2003,28(7):629. [41XiuYF,XuDS,FengYS,eta1.Comparisonofcompo— nentsinCoptischinensisprocessedwithvariousquanlityof Evodiarutaecarpa[J1.ChinTraditHerbDrugs(中草药), 2003,34(4):320. r-s]XuYc,WeiLX,ZhouYX,eta1.Determinationofevodi— amineandrutaecarpineinEvodiarutaecarpa(Juss.)benth aftercompatibilitywithCoptischinensisFranch[J1.ChinaJ ChinMaterMed(中国中药杂志),2001,26(12):846. [6]KamikadoT,MurakoshiS,TamuraS,eta1.Structureelu— cidationandsynthesisofalkaloidsisolatedfromfruitsofEvo- diarutaecarpa[J1.ArgicBiolChem,1978,42:1515. [7]TakagiS,AkiyamaT,KinoshitaT,eta1.Minorbasiccon— stituentsofEvodiafruits[J1.ShoyakugakuZasshi,1979, 33:30. [8]ShohN,UmeyamaA,IuchiA.Isolationofanewalkaloid fromEvodiarutaecarpa[J1.JNatProd,1988,51:791. [9]VerpoorteR,SiwonJ,EssenGFAvan,eta1.Studieson Indonesianmedicinalplants.?.AlkaloidsofArcangelisia flava[J1.JNatProd,1982,45:582. [101VerpoorteR,SiwonJ,EssenGFAvan,eta1.Studieson Indonesianmedicinalplants.V.TheAlkaloidsofAnamirta Cocculus[J1.JNatProd,1981,44:221.