硝酸甘油耐受性机制探讨及卡维地洛的预防作用

硝酸甘油耐受性机制探讨及卡维地洛的预防作用 啪 【 ??论著与临床报道??硝酸甘油耐受性机制探讨及卡维地洛的预防作用南京军区福州总医院魏文树„盖晓波魏炜明曹昭奎刘锝钧【摘要】目的研究硝酸甘油 连续应用耐受性的形成机制及卡维地洛对 耐受性的预防作用。大鼠 ??妇皮下注射每日攻连用日引致耐受。测定耐受性形成前、后舌静脉注射 对鼠尾客积的作用作为硝酸甘油效应及耐受的指标同时检洲耐受性形成后有关组磬【的氧自由基?? 。、亚硝酸盐 、总硝酸盐 、超氧化物歧化酶 活力和丙二醛 。结果大鼠连用 后再静注 对鼠尾客积的增加作用明显减弱主动脉和心脏组织及血浆中?? 。和 都明显升高除血浆 。一水平升高外其余组织 水平都明显降低主动脉、肝脏和红细胞中的 含量增高 活力降低卡维地洛能有效预防 连续应用耐受性的形成完全或部分防止上进检测指标的变化。结论 连续应用期间耐受性的形成与?? 。一水平升高引起一氧化氪 氧化灭活有关 卡维地洛通过抗氧化、清除?? 等作用而有效预防或减轻 连用过程中耐受性的形成。【关键词】硝酸甘油酎受性氧自由基 一氧化 【文献标识码】【文章编号】——一氪卡维地洛【中圈分类号】 。 。 。 “ “ 【 】 。 ?? ” 龇 ?? 一 。 四 “ ?? ? 一 ?眦 、 。 眦 。 【 竹 】 “ 硝酸酯类药物耐受性早在其应用于临床的初期就已被认识 但直到上世纪年代才引起人们的重视并开始广泛研究。现认为硝酸酯类耐受性形成是多因素作用的结果其中包括神经体液反向调节、血浆容量扩张、体内琉基耗竭和 的转化形成障碍及效用降低等但精确的机制仍未清楚。 。年 等发现硝酸甘油 引起耐受性同时伴有血管组织中氧自由基?? 产物增加提出?? 一增加引起硝酸酯类药物的效应分子 氧化灭活是耐受性形成的关键。?? 产物增加的假说已得到一些实验支持。叫 。但也有报道硝酸酯类耐受性形成期间?? 。一并不增加维生素 也不能防止耐受性的形成 连续应用引起血管组织中?? 。暂时性升高对 耐受性形成的影响不大 。由于耐南京军区福州总医院药理科南京军区福州总医院心内科南京军医福州总医院肝胆外科受性严重影响硝酸酯类的应用和疗效若不妥善处理还有可能引起血管内皮功能失调所以必须深入研究。实验材料与方法实验动物 大鼠体重士雄性只 雌性只购自中英合资上海西普尔一必凯实验动物有限公司合格证号 沪动合证宇号。药物和试剂硝酸甘油注射液广卅明兴制药厂批号卡维地涪德国曼海姆 生产上海罗氏制药有限公司分装批号 工一肾上腺紊 、考马斯亮兰一 、硫代巴比妥酸 、盐酸羟胺、亚硝酸钠和其它各种主要试剂均为纯或试剂纯。 万方数据主要仪器 一分光光度计美国 一 高速冷冻离心机美国 电子天平瑞士 一型可调高速分散器江苏省荣华仪器制造有限公司 低温冰箱一 本。 实验大鼠随机分为对照组、 连用组、 连用卡维地洛预防组。 连用剂量为 ?? 皮下注射 每天次连用天 卡维地洛于 前给予 ?? 叫灌胃每天次连用天。鼠尾容积在首次 前基础容积和最后趺 后耐受性形成后容积各测定次。随后大鼠断头取血肝索抗凝分离血浆和红细胞 剖取心脏、主动脉和肝脏以冰冷的生理盐水洗净揩干分别量取血浆、称取心脏和主动脉组织立即测定??一、亚硝酸盐 一、总硝酸盐 冰水浴操作。 ?用生理盐水洗涤离心次后与其它剩余组织样率臀 低温冰箱保存待测超氧化物歧化酶 和丙二醛 。实验分批进行结果合并处理。 鼠尾容积测定仿照尾容积测血压法测定大鼠舌静脉注射硝酸甘油后的尾容积变化。自制大鼠尾容积测定装置双层麦氏浴皿内充填环形橡胶使之容积减少到 左右底部出水管口与刻度毛细管相连大鼠戊巴比妥钠麻醉鼠尾装入到确定的部位 恒温水浴灌流维持鼠尾温度 压力阻断尾静脉同流记录舌静脉注射硝酸甘油 ?? 一后 内尾容积变化值。 含量测定。叫… 一含量测定采用 试剂法对检测样品以不同方法处理后再与 试剂反应所测 水平分别代 。一、 和?? 。一。检测样品制备匀浆分离上请直接与 试剂反应后测定 通常 一可代表 水平样品中加入还原剂将 。还原为 。后再测定 一 一可反映体内 来源和被氧化灭活的程度样品中加入羟胺羟胺可与 。一反应生成亚硝酸盐由于羟胺在 范围内若没有?? 存在时其自氧化形成亚硝酸盐的速 率很低具有反应灵敏、特异和操作简便等优点“ 所以加入羟胺后所测得 。可间接反映样晶中??的水平。血浆亚硝酸盐测定肝索抗凝血 离心 取上清 加人亚沸水 和 磷酸钾缓冲掖 混匀置于?水搭中 取出加人 。 充分混匀后 离心商 取上清液 与 试剂 混匀室温下反应血 后测定 的值。以 盐酸羟胺 代瞢亚沸水其余步骤相同测出的值间接代表样品中?? 。一的含量。参照改良微盘法测定血浆 一。主动脉和心脏组织中亚硝酸盐测定称取主动脉或心脏组织 剪碎加人 冰冷的 缓冲液 制备 匀浆。取匀浆 加入亚沸水 。旋涡 混匀后置于 水浴中 取出后立即加人 。 旋涡混匀静置 离心 取上清液和 液各 混匀室温下 后测定 一的 值厨上法测定??和 。 丙二醛测定采用 比色法。称取血管、肝脏以塑堡墼蔓蓥查塑笙璺鲞塑塑 缓冲液 制各组织匀浆红细胞制备“溶血匀浆。取匀浆 与十二烷基硫酸钠 置于 刻度离心管内混匀静置 后加入 一 和 硫代巴比妥酸 并剧烈振摇然 剧烈振摇 离心分离后将试管加塞置于沸水中加热 冷却后加入正丁醇 正丁醇相在 处测定 的 值…。超氧化物歧化酶活力测定 活力测定采用肾上腺素自氧化法“…略加改进。取上述制备的组织匀浆 用冰冷 液 加至 混匀?下静置抽提 随后× ?离心 。取上清液 、 碳酸盐缓冲液 和 ??。肾匕腺索 组成反应体系。对照管以亚沸水代替上 水浴 取出后立即加入 叫盐酸 终止反应“ 时于 处测清液。? 定值。测定红细胞 活力时将红细胞用生理盐水洗涤离心 ×掌 次取压积红细胞 加入预冷亚沸水 抽提溶血 加人预冷的乙醇氯仿 混合渡 旋涡震荡 后在下× 离心 取上清 测定 活力。蛋白质定量采用考马斯亮蓝一测定法。统计学处理实验数据由 处理用土 表示组间比较采用 检验由 程序完成自身前后对照采用配对 检验。结果硝酸甘油连用对鼠尾容积的影响及卡维地洛的作用 连续应用后其增加鼠尾容积的作用明显减弱表明耐受性已经形成„卡维地洛能有效预防耐受性的出现 对鼠尾容积的增加作用无明显降低表。表 建用后?皇窖积变化囊卡堆地洛的作用 ? 连用前后比较一 与对 组比较洲 与 连用组比较? 硝酸甘油耐受后组织中 。 一和?? ?变化及卡维地洛的作用 连用使主动脉、心脏和血浆中?? 。一都明显升高表明氧化应激增强 主动脉和心脏组织中 一水平下降、 一明显升高而血浆中 。一和 一水平都升高。卡维地洛除了进一步升高血浆 。一外均不同程度地阻止 连续应用所引起的上述变化表。硝酸甘油连续应用后 活力和 的变化及卡维地洛的作用 连续应用后主动脉、肝脏和 中 括力降低而 水平升高卡维地洛有效增强 活力、降低 水平表、表。 万方数据 连用对大鼠组织中 、 和??的影响爰卡维地洛的作用 ?? 一组鍪 ?? 血浆 一与对照组比较。 、一 与 连用组比较 机、”” 表大鼠 连用后缉勰中 活力变化及卡维地洛的作用 士 ?? 蛋白与对照组比较?尸 、一 与 连用组比较 表大鼠 连用后组织中 的变化殛卡堆地洛的作用 土 与对照组比较。 、… 与 连用组比较“ 讨论动物实验和临床资料表明通常硝酸酯娄药应用数天、硝酸甘油连续静脉滴注 即可引起耐受?。因为 扩张容量血管 较明显静注后能引起鼠尾体积增大所以通过容积法测定鼠尾体积变化能够反映硝酸甘油的效应。我们的实验结果表明 连续皮下注射天后其对鼠尾容积的增加作用显著减弱不论是自身的前后对照还是与对照组比较都有非常显著的差别表明耐受性已经形成。这一结果与文献 一通过血压等变化作为效应指标的结果一致说明测定鼠尾容积能够较为准确地反映 对 管的作用强度是评价 耐受性简便有效的方法。卡维地洛预防应用能有效阻止耐受性的形成使 增加尾容积作用接近正常对照水平表。 连用引起耐受后主动脉、心脏和血浆中?? 一都明显升高表明体内出现氧化应激活性氧类产物增加主动脉和心脏组织中 一水平下降、 明显升高而血浆中 和 水平都升高。卡维地洛除了进一步升高血浆 外均不同程度地阻止 连续应用所引起的上述变化表。?? 能与 反应生成过氧亚硝基 、 和 可进一步氧化为 。由于??。与 反应比与 歧化反应的速度快且?? 歧化反应生成的 也能与 反应生成 所以。等活性氧类产物增加能快速灭活 形成 。和 “等产物““。因此上述结果说明 减少另一方面 可能被氧 猥了以下几个问题 。水平降低一方面反映丁 Ф 喽约跎佟,猹柙谔迥诒匦胱 瑟猥,拍芊?永? 苄вΚ猹栊вΨ肿营猹阒軄9? 。一产物增加发生氧化灭活而出现耐受同时表现为检测指标 水平升高。血浆 水平明显升高可能与 连续应用引起血中 来源增加和 代谢产物升高有关加上全部 水平都增高我们认为 耐受的主要原因并非转化生成 的同时过程障碍而是 氧化灭活增强所致。卡维地洛在有效预防 耐受性形成明显降低?? 、升高 、降低 一水平这反映了卡维地洛能阻抑氧化应激、清除?? 一防止氧化损害保护 免受氧化灭活提高 效用。因此卡维地洛预防 耐受性的机制与其抗氧化、清除?? 而提高 的效用有关能防止??。过量导致血管内皮功能失调。 连续应用后血管、肝脏和 中 明显升高 活力降低进一步表明组织中存在氧化应激而脂质过氧化过程增强与上述?? 水平升高的结果一致。卡维地洛能明显降低 、增强 活力表、表。 连用对 抑制作用的机制尚不清楚从理论上看?? 。增加后必然引起 产生增多 可抑制 活力 另一方面„ 本身又能诱导 使之活性增强…。因此 连用对 活力的影响比较复杂因为 一能引起蛋白质酪氨酸残基硝化使之失活所以推测 的氧化产物可能对 有抑制作用。 活性下降也是引起?? 。增加的原因之一。卡维地洛因降低?? 一而阻抑 的形成对 有保护作用。总之我们的结果显示 连续应用可引起耐受耐受性形成机制与氧自由基产物增加引起 效应分子 氧化灭活有关卡维地洛通过抗氧化和清除氧自由基对 产生保护作用提高 效用有效预防 耐受性的形成。为临床应用抗氧化剂防治硝酸酯类耐受性提供了实验根据对提高抗缺血药应用的临床效果有重要意义。 万方数据第二军医大学药学院级学生潦晖、陈斌参与郭分实验工作特此致谢参考文献 魏炜明魏文树苏定冯硝酸醋类药物耐受性问题见苏定冯缨朝玉主永明主编药理学进展北京 人民卫生出版社 ?唧 ?? 。 帅 — 。 【… … 吼 蹦六 。 悯 … 啪 【 一 【 【 】 眦 。 口 … 吼 愀 ? — … 。四 唧 。 删 岫 【 … — 】 盯 ?眦 叭 试四 四 “ 髓 塑堡堡堑 腿 量查塑生整鲞筻塑 … 【 删 。 — 四不 … 。 。 曲… 魔战军坷攻陈瑗自由基医学研究方法第 版北京人比卫生出版社 耵 力 。 … 四 】 一 莫永炎脒瑗周玫等云芝多对脑、肝组织的抗氧化作用研究中国药理学通报魏文树谭建权陈海生云芝多糖对小鼠肝脏超氧化物歧化酶括力和脂质过氧化的影响中国药理学与毒理学杂志 ? 由 .