邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响

邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响 邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠 睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响 第4期朱正平等邻苯二甲酸荦乙基己基酯甜原代培辞太鼠睾丸L?lig细咆荤酮合 成的影一向.249 h染毒结束岳吸去100l培养液,1Ju人5g/L的 MTT熔液25.继续培养4h,吸去上清.加入150 l/孔甲皿砜.振荡I【)rain后,酶标仪490处测 定^值 l7Leydig细胞分泌睾酮测定各剂量IMEHt染 毒24h后.吸培养上清置一20保存用放射免 疫试剂盒(北京北方乍物技术研究所提供+试剂盒批 内变异CV(10%.批问变异CV(】5%)删定培养上 清中睾酮含量操作严格按照试剂盒说明进行 1.8l{T.PCR 1.8.I兽RNA的抽提将Leydig细胞按10/L接 种到6孔板.染毒结束后吸尽}清,每孔加入lml Tripure裂解细胞.经氯仿抽提及异阿醇沉淀后用 75%乙醇洗涤,沉淀物(总RNA)T燥后溶于焦碳酸 二乙酯(DEPC)溶液中.紫外分光光度计260nill处 f914定RN^浓度,统?稀释后备用. 1.8.2Rr—PCFI夏应以抽提出的RNA为进 行反转录.反转录后的产物eDNA为模板进行扩增 SL,tR和JB一f引物由上海博砸生物技术有限公司 台成PCR反应伴系为.I-DNAl,引物释0.2l, IOxbuffer3txl,P,'gCl:l8cINTPs0.25p.I,raq聚 合酶025l,加双茉水23.3ttl,总体积3Ol,94 预变性2rain后.进行25个循环..循环条件:StAR (563bp194?30s.62545s,72.?Inlin;.ac. tin(300bp)94?30s,60045s,72?Iillin:所 有循环结束后721:延伸7min.PCR产物经2%琼 脂糖电泳分析.在Bar]dscan凝胶电泳分析系统中删 定灰度StARmRNA表达水平以S.tAR/j8的比 率表示所有实验至少重复3次 l9统计学分祈所有数据均用SPSS】】.0统i-r软 件进行数据分析,各组之间比较采用单因素方差分 析法.以P<o05作为着检验水准. 2结果 2.1细胞纯度鉴定结果图I为大鼠Leydig细胞 3-13HSD染色图.i胞纯度为(9()8?0.09Ij%(n= 10) 2.2IMEHP对Leydig细胞线粒体活性的影响由 图2可见,随MEHP染毒剂量升高.ydig细胞还原 Mlrr的能力逐渐增强.250p.mol/L达峰值,与对照 组比较差异有屁着性(P<0们):当MEHP剂量继 续升高,Leydig细胞还原Mrr的能力开蛄下降. 1000.u.mol/L组降低至与对照组相比有显着性差异 的水平(P<0.0】] 23MEI-IP对Leydig细胞睾酮合成的影响由图3 .-??? ?_ ?一 I,I?' 图lLeydig细胞3BHSD染色l×1cxx)1 一 ]e),lig抱;?:其他蛔胞 FigureISlainingfor313-HSD'一『1L-'di一-(elhc×1000 一:ldcell:?:OIh,:rIel1 0.12 l 0.08 O脚 O_删 02 062.512525050010o0 h?Bm扎) 囤2ME1TP对Ivlig细胞妓柱体活性的响 与时照组lo?】',LMEHP比轭.…,.<00I igl…2Eflbcisof",IEHl-)11Ihemil,lLImndfiaactivit~of1he (1JlitureLILe}!ligells finpar~ithIhe?l…I…P'0btnmlI,1EHI'…<(}0I 25 20 量埔 芒10 6 0 0曲5125250500i000 ?tl,L 囤3MEHP时leydig细胞睾嗣合成的响 与对照组?p.m--…HI'I比较.}#:<c10l FiH3Effects【'rMIHPt】nthe【…s【rIInPlr'v1llI-sIth ruhure(】Levdigt?1 Cumpar~dilhI?Ollli1I_|『I0…IIlIMEtIP1.}:P(00I 可见.MEHP染毒24h后.无论是蛙础状态还是hCG 刺激状态下,Leydig细胞睾酮分泌量住中低剂量组 随着染毒剂量的增加而上升,荇庄明显的剂嚣胀赖 关系,并在500pmml/L时达峰值,与对照组相比差 j #I 一J ?卜.???? ?E "-_-____L_!j