定眩颗粒醇提工艺研究

定眩颗粒醇提工艺研究 实验研究 CHINESEC0MMUNIDOCTos 丛旭东毛春芹赵颖 陆免林(通讯作者) 225500江苏苏中药业集团股份有限公司 (姜堰) 210029南京中医药大学 摘要目的:研究定眩颗粒中部分药物 的醇提工艺,优选提取工艺条件.方法: 采用k(3)正交试验设计,以饮片中天 麻素和丹参酮?A的提取率为考察指标, 同时结合乙醇用量,乙醇浓度,回流时间, 提取次数等考察因素,采用HPLC法测 定,所得的结果进行方差分析,综合两个 指标结果确定最佳工艺.结果:此复方中 丹参,天麻等药物确定的最佳醇提工艺条 件为:加饮片总量15倍量的70%乙醇分 2次回流提取,每次2小时.结论:优选 的工艺稳定,方法可行. 关键词定眩颗粒天麻素丹参酮?A 提取工艺正交试验 doi:10.3969/j.issn.1007—614x.2009. 】6.002 Abstract0bjective:Toestablishthealcohol extractionprocessofsomeChinesemedicine inDingxuanGranules,andchoosethebest extractionprocessconditions.Methods:U— singtheL9(34)oahogonaltestdesign,the extractionratioofgastrodinandtanshinone lIAisusedtobetheinvestigateindex,the alcoholdosage,ethanolconcentration,Time ofbackflowandtheextracttimes,which wereinvestigatedbyHPLC.thentheresults aregoingONvarianceanalysis.Composite thetwoindexresultstoestablishthebest extractingtechniques.Result:Theoptimum extractionconditionobtainediSadding15 timesamountof70%alcoholandextracting for2.0hours(totallyextractingfor2 times).Conclusion:Theextractionmethodis reasonable,procedureisfeasible. KeywordsDingxuangranules;Gastrodin; Tanshinone?A;Extractionprocess:Orthog— onaltest 定眩颗粒醇提工艺研究 定眩颗粒为纯天然中药制剂,该方由 天麻,半夏,丹参,陈皮,葛根等九味药组 成,具有化痰消瘀,熄风定眩之功效,在临 床上用于治疗风痰瘀血痹阻脑络而致眩 晕,耳呜等症.本文以乙醇浓度,乙醇用 量,回流次数及时间等工艺条件为考察因 素,以天麻素,丹参酮?A的含量为考察 指标,对方中天麻,丹参等药物醇提工艺 进行正交优化试验"0J.结果进行方差 分析,以确定各因素的显着性水平,从而 得出天麻,丹参等的最佳醇提工艺参数, 并进行三批验证实验,确定该工艺的可行 性. 仪器与试药 仪器:LC一10ADVP型高效液相色谱 仪;SPD一10AVP紫外检测器;HW一 2000色谱工作站;电子天平(MettlerTole— doAG285);KQ一500E型医用超声清洗 器;水浴锅;旋转蒸发器;自动双重纯水蒸 馏器. 试药:天麻素对照品(中国药品生物 制品检定所,供含量测定用,批号:110807 — 200205);丹参酮?A对照品(中国药品 生物制品检定所,供含量测定用,批号: 110807—200205);甲醇,乙腈为色谱纯; 其余所用试剂均为分析纯,均购自上海化 学试剂有限公司;水为重蒸水(自制). 方法与结果 正交实验设计:采用L.(3)正交 进行正交设计,对乙醇的加醇量,醇浓 度,提取次数,提取时间进行考察,以天麻 素,丹参酮?A含量和醇提浸出物得率为 考察指标,进行提取工艺最佳参数的确 定.按处方配比取处方药材9份,每份按 照正交实验因素水平表操作,加入设计的 乙醇,加热回流,过滤后将所得的滤液减 压浓缩成稠膏,备用.其提取工艺因素水 平设计,见表1. HPLC测定天麻素含量:?色谱条 件:色谱柱:Kromasil100—5C18柱 (250mm×4.6mm,E29481);流动相:乙腈 一 水(3:97);流速:1ml/分;检测波长: 220nm;柱温:30%.?对照品溶液制备: 精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干 燥244,n,t的天麻素对照品适量,加流动 相制成每lml含1mg的溶液,作为对照品 4中国社区医师?医学专业半月刊2009年第16期(第11卷总第217期 储备溶液.?供试品溶液的制备:取 0.8g稠膏,精密称定,置具塞锥形瓶中, 精密加入稀乙醇25ml,称定重量,超声30 分钟,再称定重量,用稀乙醇补足减失的 重量,摇匀,滤过,取续滤液10ml,浓缩近 干,残渣加乙腈:水(3:97)混合溶液稀释 至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得.? 线性关系考察:精密吸取1mml对照品 溶液0.2,0.3,0.4,0.6,0.8,1.0m1分别 置于2ml量瓶中,加乙腈:水(3:97)混合 溶液稀释至刻度,摇匀,使浓度分别为 0.1,0.15,0.2,0.3,0.4,J).5rag/ml.分别 吸取上述各对照品溶液10,进样,按上 述色谱条件测定峰面积值,以峰面积均值 (Y)为纵坐标,进样浓度(x)为横坐标, 绘制曲线.得回归方程Y= 5306517.79X一300708.14,r=0.9985(n = 6).结果表明天麻素进样量在1—5g 范围内呈良好的线性.?样品中天麻素 含量测定:分别精密吸取对照品溶液(浓 度分别为:0.1mg/ml,0.3mg/m1)及各供 试品溶液各l0l注入液相色谱仪,每个 样品平行进样2次,以外标两点法计算, 测定各样品中的天麻素含量.结果见表 2,表3. HPLC测定丹参酮?A含量:?色谱 条件.色谱柱:Kromasil100—5C18柱 (250mm×4.6ram,E29481);流动相:甲醇 一 水(75:25);流速:1ml/分;检测波长: 270nm;柱温:30%.?对照品溶液制备: 精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干 燥24小时的丹参酮?A对照品适量,加 甲醇制成每lml含1mg的溶液,作为对照 品储备溶液.?供试品溶液的制备:取 0.3g稠膏,精密称定,置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇50ml,称定重量,超声30 分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失 的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得.? 线性关系考察:精密吸取1mg/rn1丹参酮 ?A对照品溶液0.01,0.02,0.04,0.06, 0.08,0.1m1分别置于2ml量瓶中,加甲醇 稀释至刻度,摇匀,使浓度分别为0.005, 0.01,0.02,0.03,0.04,0.05rag/ml.分别 吸取上述各对照品溶液10,进样,按上 述色谱条件测定峰面积值,以峰面积均值 的对数值(Y)为纵坐标,进样量的对数值 (x)为横坐标,绘制标准曲线.得回归方 程Y=8463808.22X+16843.29,r= 0.9960(n=6).结果表明丹参酮?A进 误差辜萎曩寅由度均方LF值显着性 c_擐482蓦743i43薹誉l 篝ll袭5i浸出翱方整劈嘶囊i 鍪羹-薹B23.18篱ii_59囊231i翳; 篓c霪圭0竹鬻篓25l39霪l10'37i孽鬟 !;慧誊慧ii—藜 ?洼醛(,2)19oo.li(2'2)00毒l囊 结果表明,A,B对试验结果均有显着 性影响.经直观比较分析,同时结合生产 实际中滤过残留,溶剂回收,降低成本,节 约时间等因素,最终确定最优工艺条件为 AB2C2D3.即加饮片总量l5倍量70% 乙醇分2次回流提取,每次2小时. 最佳醇提工艺条件的验证:取处方量 天麻,丹参,水蛭,半夏,蔓荆子,各3份, 按正交试验得到的最佳醇提工艺条件进 行提取,即加饮片总量为15倍量的70% 乙醇分2次回流提取,每次2小时.合并 3次提取液,过滤,减压回收乙醇,浓缩至 无醇味,取样测定浸膏中天麻素,丹参酮 ?A的含量,浸出物的得率.色谱条件和 供试品溶液的制备方法与醇提正交样品 相同.结果见表6. 由表6可见,三次试验所测得的天麻 素,丹参酮?A及浸出物含量与最佳工艺 所测得的平均含量比较相近,说明该工艺 稳定,可行. 讨论 实验过程中,饮片的品种繁多,质量 差异很大,而且有的饮片中含有的有效成 分很低,不能达到制剂的要求,因此在投 料前必须控制饮片的质量. 在本实验条件下,提取次数和提取时 间对提取无显着影响.其原因可能是由于 较高浓度的热醇渗透性强,极易到达饮片 组织内部而得到较好的提取效果. 天麻素的含量测定,参照2005版《中 国药典》一部天麻项下天麻素的含量测 定方法,实验曾比较了乙腈一0.05%磷酸 溶液(3:97),乙腈一水(3:97),乙腈一水 (4:96),发现乙腈一水(3:97)定容制备 的对照品和供试品在乙腈一水(3:97)的 流动相中基线能达到很好的分离,而且出 峰时间合适,峰形较好,干扰少,测定结果 令人满意,且避免了酸作为流动相对仪器 的影响. 丹参酮?A的含量测定,参照2005 版《中国药典》一部丹参项下丹参酮?A 的含量测定方法,丹参的主要有效成分除 丹参酮?A外,还有水溶性酚酸类,此工 艺对丹酚酸的影响有待于进一步研究. 该复方中采用正交试验法,优选定眩 颗粒醇提工艺,以天麻素和丹参酮?A含 量为指标,采用HPLC法进行含量测定, 结果进行方差分析,最终优选出 A2B2C2D3的制备工艺.然后又将此实 验结果进一步进行综合加权评分分析,所 得结果与原选定的工艺较吻合.最终通 过最佳醇提工艺验证实验也了该工 艺的合理性. 参考文献 1岑信钊.天麻的化学成分与药理作用研究 ,2005,28(10):958—962. 进展.中药材 2刘艾林,李铭源,王一涛,等.丹参药理学活 性物质基础研究现状.中国药学杂志, 2007,42(9). 3苏维辉,彭晓青,任结梅,等.正交试验优选 祛湿颗粒剂制备工艺.医药导报,2008,27 (10):1253—1254. 中国社区医师?医学专业半月刊2009年第16期(第11卷总第217期)5