气血康口服液质量标准研究

气血康口服液质量研究 摘要:目的:建立气血康口服液质量标准。方法:定性鉴别采用薄层色谱法;含量测定采用高效液相色谱法。结果:薄层色谱鉴别(1):原标准为人参皂苷Rg₁的鉴别，新标准增加人参皂苷Rb₁、三七皂苷R₁及黄芪甲苷的鉴别，经验证未见干扰;薄层色谱鉴别(2)为新增项目，粉葛薄层色谱鉴别以葛根素为对照，经验证未见干扰;含量测定色谱条件:采用汉邦(4.6×250mm，5μm)G8色谱柱，流动相:乙腈―水(19:81);检测波长为203nm;柱温30?流速1mL,min。人参皂苷Rg₁进样量在0.678μg,10.17μg范围内有良好的线性关系;回归方程y,279.47x―27.716(r=1.000)， 人参皂苷Rg₁的平均回收率为97.54,，RSD=2.37,。结论:薄层色谱鉴别和含量测定方法操作简便，准确，重现性好，可用于控制气血康口服液质量。 关键词:气血康口服液;薄层色谱鉴别;HPLC， 中图分类号:R286.0 文献标识码:A 文章编号:1007―2349(2009)09―0061―03 气血康口服液(原名为复方三七口服液)具有抗衰老，扶正培本，益气强心，健脾固本，滋阴润燥，生津止咳;并有提高机体免疫力，升高白细胞和血色素的作用。原为提高国家药品标准行动计划品种，后确认为2010年版《中国药典》收载品种。根据国家药品标准提高行动计划任务表要求:鉴别:增加葛根、黄芪、人参、三七的TLC鉴别;含量测定:增加三七的含量测定;本次标准修订的薄层色谱鉴别、新增薄层色谱鉴别项及新增含量测定均符合要求，可作为质量控制指标。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪:岛津2010A，色谱柱:汉邦(4.6×250mm，5μm)C₁₈色谱柱;液相溶剂用水为纯净水经0.45,μm微孔滤膜滤过，乙腈为色谱纯，其他均为纯;人参皂苷Rg₁对照品(110703―200726)含量测定用，按97.7,计、人参皂苷Rb₁对照品(110704―200420)、三七皂苷R₁对照品(110745―200415))、黄芪甲苷对照品(0781―200109)、葛根素对照品(752―200108)均购于中国药品生物制品检定所;气血康口服液:由云南白药集团文山七花有限责任公司提供(批号:20080701、20080702、20080703);气血康口服液薄层色谱鉴别空白阴性试样(缺三七、人参;缺黄芪;缺葛根)和含量测定空白阴性试样(缺三七、人参):均由云南白药集团文山七花有限责任公司提供。 2 实验方法及结果 2，1薄层色谱鉴别取本品20mL，置蒸发皿中，水浴蒸至近干，加乙醇25mL温浸，滤过，滤液蒸干，残渣加水25mL使溶解，移入分液漏斗中，用正丁醇提取3次，每次10mL(勿剧烈振摇以免乳化)，合并正丁醇液，用水洗2次，每次10mL，弃去水液，加氨试液25mL振摇提取，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。同法制得缺三七、人参和缺黄芪的阴性对照样品;另取人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、三七皂苷R₁及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为 对照品溶液。照薄层色谱法(附录? B)试验，吸取上述溶液各1,3μL，分别点于同一高效硅胶H薄层板上，以三氯甲烷―甲醇―水(13:7:2)10?以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10,硫酸乙醇溶液，在105?加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。色谱图见图1,图2。 2，2薄层色谱鉴别取本品20mL，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯提取液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。同法制得缺葛根的阴性对照样品;另取葛根素对照品，加甲醇制成1mL含1，5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录?B)试验，吸取上述溶液各1μL,3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷―甲醇―水(7:2.5:0.25)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。色谱图见图3。 2，2气血康口服液的含量测定2，2，1系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈―水(19:81);检测波长:203nm;理论塔板数按人参皂苷Rg₁峰计算，应不低于3000。2，2，2对照品溶液及供试品溶液的制备对照品溶液制备取人参皂苷Rg₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg₁对照品0.7mg溶液，摇匀，即得。 供试品溶液制备取本品约30mL，混匀，滤过，精密量取10mL于分液漏斗中，用水饱和正丁醇10mL、10mL、10mL提取3次，合并正丁醇液，用氨试液5mL、5mL洗涤2次，收集正丁醇液水浴蒸干，残渣用适量甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。2，2，3测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。色谱图见图4和图5。 2，2，3阴性对照试验阴性对照样品溶液的制备取处方中除三七、人参外的其他药味，按处方剂量及制法和工艺要求制备缺三七、人参阴性对照样品溶液。照试验所得方法进行测定，结果表明，在与人参皂苷Rg₁对照品相同的保留时间位置，未见干扰峰出现，表明处方中其他药材和辅料对人参皂苷Rg₁的测定无干扰。与供试品溶液对照，未见明显峰缺失。见液相色谱图6。 2，2，4线性关系考察 精密称取人参皂苷Ra对照品6，78mg，置10mL量瓶中，加流动相溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取对照品溶液1、2、5、10、15μl进样按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值(mAuXs)为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程:y,279.47x一27.716，r,1。结果表明人参皂苷Rg₁进样量在0.678μg,10.17μg范围内有良好的线性关系。符合要求。2，2，5精密度试验精密吸取人参皂苷Rg₁对照品溶液(0.6829mg,mL)各10μL，按试验所得方法重复进样5次，测 定峰面积值。各次测得的峰面积值分别是2683159、2682968、2686880、2641316、2639333，平均值为2666731，RSD为0.91,，符合要求。2，2，6重复性试验取批号为20080701的气血康口服液6份，按试验所得方法试验，测得样品峰面积并计算含量，试验结果表明:RSD为0.72,，符合要求。2，2，7稳定性试验取对照品溶液及供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8h测定6次，以峰面积计算RSD值，对照品溶液峰面积RSD为1.81,，供试品溶液峰面积RSD为1.82,;结果表明对照品及供试品溶液在8h内稳定。2，2，8加样回收率试验采取全程加样法。取已知含量的供试品(批号:20080701，人参皂苷Ra含量0.6267mg,mL)6份，每份5mL,精密加入人参皂苷Rg₁对照品溶液(0.5082mg,mL)各5mL，按试验所得方法试验，试验结果表明，本方法回收率在95,,105,之间，平均回收率为97.54,，RSD为2.37,，符合要求。2，2，9样品含量测定取气血康口服液3批样品，按试验所得方法试验，测定人 参皂苷Rg₁含量，每批3次。结果见表1。 3 讨论 原部颁标准中药成方制剂第十三册WS3--B--2573--97中无[含量测定]项，根据气血康口服液的处方，选择方中的三七、人参中的有效成分人参皂苷Rg₁为含量测定指标。最初拟选择三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁作为含量测定指标成分，通过试验发现，在15cm C₁₈柱上，用乙腈一水的不同梯度洗脱均难以使这几种成分完全分离;在25cm C₁₈柱上，用乙腈―水(0--35min，19:81;35―55min，29:71;55--70min，29:71;70―100min，40:60)梯度洗脱可以将几种成分分开，但人参皂Rb₁:出峰时间在80min右左，这样不适用大生产中--产品质量控制，且处方中三七、人参、黄芪均含类似物质，测定时相互干扰大，供试品溶液中三七皂苷R₁、人参皂苷Re含量低，若作控制产品质量的指标也起不了太大的现实意义。因此结合以上这些实际情况，最终放弃进行多组分测定，选择耗时短、分离较好的人参皂苷Rg,为气血康口服液含量测定指标性成分。对气血康口服液中人参皂苷Rg₁含量测定的分析方法验证结果表明，该测定方法简便、准确、可行。