【doc】生脉超微颗粒对大鼠胃肠黏膜超微结构的影响

【doc】生脉超微颗粒对大鼠胃肠黏膜超微结构的影响 生脉超微颗粒对大鼠胃肠黏膜超微结构的 影响 ChineseJournalofNewDrugs2005,Vo1.14No.7主垦堑垫苤查5年第l4卷第7期 生脉超微颗粒对大鼠胃肠黏膜超微结构的影响 李勇敏,彭淑珍,蔡光先,杨永华,黄江波 (湖南省中医药研究院,长沙410006) [摘要]目的:观察生脉超微颗粒对大鼠胃肠黏膜的影响.方法:将生脉超微颗粒制成水混悬液,连同生脉超 微过滤液及生脉饮汤剂,分别灌胃给予大鼠1月.结果:病理结果显示,给药期大鼠胃贲门,幽门,十二指肠部分 见轻度问质性炎症外,其余肠段未见明显病理改变.电镜结果显示,与空白对照组比较,3给药组大鼠十二指肠 黏膜超微结构异常均有显着性差异,胃黏膜超微结构异常没有显着性差异;灌胃生脉饮汤剂大鼠十二指肠黏膜面 的微柬颗粒直径为0.1,2ILm,而生脉超微颗粒,生脉超微过滤液的粒径为1,2.5m.停药3d后各组胃,十二指 肠黏膜超微结构异常没有显着性差异.结论:停药后未见生脉超微颗粒的微粉长期黏附于胃肠道的趋势. [关键词]生脉超微颗粒;胃肠黏膜;超微结构;微柬颗粒 [中图分类号]11285.5;11289.5[文献标识码]A[文章编 号]1003—3734(20o5)07—0849—04 EffectsofShengmaiultragranuleonultrastructureofrat gastrointestinalmucosa zhen,CAIGuang—xian,YANGYong—hua,H LIYong—min,PENGShu— UANGJiang—bo (HunanAcademyofChineseTraditionalMedicine,Changsha410006,China) [Abstract]Objective:ToinvestigatetheeffectsofShengmaiuhragranuleonultrastructureofratGI mucosa.Methods:Ratswererandomlysupplementedwitheitheraqueoussuspension,filtratesordecoctionof Shengmaiultragranule,respectivelyforonemonth.Results:Thepathologicalstudyshowedthatmildinterstitial enteritisexistedonlyintheeardia,pyloriandduodenuminthecourseofthedosing.Theelectronmicroscope disclosedthatsignificantabnormalitieswerefoundintheultrastruetureoftheduodenalmucosainthree supplementarygroupsincomparisonofthecontrolgroup.Nosignificantabnormalitywasobservedinthe uhrastructureofgastricmucosa.Thediameterofmicroparticleswasaround0.1,2雎montheduodenal mucosaofratssupplementedwiththedecoction,andaround1, 2.5mintheratsfedwithaqueous suspensionandfiltrates.Theuhrastructuresofgastricandduodenalmucosashowednosignificantdifference amongthethreegroupsafterthedietsofShengmaiuhragranuleswereterminatedfor3days.Conclusion:The micropartielesderivedfromShengmaiultragranulemightbeexcretedfromratGItractafterterminationofthe dosing. [Keywords]Shengmaiuhragranule;gastrointestinalmucosa;uhrastructure;mieropartiele 20世纪末期,利用超微粉体技术研制微米中药 已引起科技界的广泛关注,微米中药包括微米中药 材,中药微米提取物,微米中药制剂.”微米中药制 剂”,属细胞级微粉制剂,可能是中药运用形式的又 一 次重大改革.一般认为其粒径应在1,75ptm范 围内,能保持传统中药固有药效学物质基础的粒 度.杜晓敏通过动物实验证明,超细微粉制剂 *基金项目:国家中医药管理局科技教育司(2001BA701A43) 可明显提高原生药材的生物学效应和药效学活性. 蔡光先等经实验研究后指出,人参类药材经超微 粉碎后人参皂苷的浸出明显优于其饮片.杜晓敏 等报道通过实验比较发现,水蛭微米制剂的药效 明显优于水蛭煎剂,普通散剂,且明显改善了气味和 口感.陆付耳报道,在相同剂量时,附桂地黄丸的 细胞级微粉颗粒的药效作用明显优于传统粉碎工艺 --—— 849--—— ,??, 一究一 一研一 一验一 一实” -t^ ChineseJournalofNewDrugs2005,Vo1.1. 4.......... N...... o ....— . — 7 制备的丸剂.微米中药制剂属新型中药制剂,有人 认为其颗粒太小,不利于胃肠排泄,可能会长时间黏 附于肠黏膜,甚至形成息肉,为此,我们就生脉超微 颗粒对大鼠胃肠黏膜的影响进行了研究. 材料与方法 1实验材料 1.1药物与试剂生脉饮汤剂(生脉饮处方:人参 5g,五味子10g,麦冬5g):按传统煎煮方法制备成 1g?mL,.生脉超微颗粒:先将各味药超微粉碎,依 法制备超微饮片,再按处方比例混匀,制粒,实验时 用蒸馏水配成1g?mL浓度的混悬液.生脉超微滤 液:将生脉超微颗粒用6倍100?水浸泡30min,过 滤,将滤液制备成1g?mL浓度,即成生脉超微滤 液. 1.2动物SD系清洁级大鼠,体重80,100g,由上 海西普尔一必凯实验动物有限公司提供,许可证号 SCXK(沪)2003—0002号.实验前动物适应环境1周, 喂饲该公司饲料. 2方法 2.1分组取48只大鼠,雌雄各半,按体重随机分 成4组,每组12只,分别为空白对照组,生脉饮汤剂 组,生脉超微颗粒组,生脉超微滤液组, 2.2给药空白对照组灌胃蒸馏水10mL?kg,生 脉饮汤剂组,生脉超微颗粒组,生脉超微滤液组均灌 胃生药5g?kg(相当于人I临床等效剂量的2倍), 灌胃体积为10mL?kg,,qd,连续30d. 2.3动物处理给药30d后处死动物一半,停药3 d后处理另一半动物. 2.4观察指标胃肠病理切片:处死动物后,取胃 贲门,幽门组织,十二指肠(距幽门8cm处),空肠, 结肠,盲肠,直肠各1cm的组织,用10%甲醛溶液固 定,切片,普通光镜观察. 胃肠黏膜超微结构观察:处死动物后,取胃中部 黏膜,十二指肠黏膜(距幽门6cm处)1cm的组织, 戊二醛固定,切片,染色,电镜观察.电镜分级 如下:?胃黏膜分级:”一”正常,结构形态正常,可 见内质网,线粒体及分泌细胞;”+”异常,黏膜上皮 细胞坏死,胞浆内线粒体水肿,或黏膜上皮有微小溃 疡形成,黏膜细胞间水肿,或黏膜上皮细胞水肿,坏 死,溶解,胞浆内线粒体水肿.?肠黏膜分级:”一” 正常,结构形态正常,可见黏膜表面微绒毛,上皮吸 收细胞和杯状细胞分泌细胞;”+”异常,黏膜面有微 束颗粒,上皮细胞胞浆水肿,上皮下层间质水肿,或 一 850一 ?国堑垫苤查生笙鲞笙!塑 黏膜面有微束颗粒,上皮有微小溃疡形成,上皮细胞 线粒体水肿,或黏膜面有微束颗粒,上皮细胞线粒体 水肿,空泡变,上皮细胞基底下层间质水肿. 肠黏膜表面微粒观察:”一”表面无微粒,微绒毛 排列整齐;”+”表面偶见微束颗粒,微绒毛排列基本 整齐;”++”表面见较多微束颗粒,微绒毛排列不整 齐;”卅”表面见大量微束颗粒,微绒毛排列杂乱. 3统计学方法 对大鼠胃肠组织超微结构的比较用检验, 对大鼠肠黏膜表面微粒的比较用Ridit检验,P< 0.05认为差异有显着性. 结果 1病理切片 结果显示,给药期动物胃贲门,幽门,十二指肠 部分见轻度间质性炎症,空白组2例,生脉汤剂组3 例,生脉超微颗粒组4例,生脉超微滤液组3例,各 组间比较没有明显差异其余脏器如空肠,结肠,盲 肠,直肠未见明显病理改变. 2胃肠黏膜超微结构 动物灌胃生脉系列中药后多数胃,十二指肠黏 膜超微结构有所改变,部分见胃黏膜上皮细胞坏死, 胞浆内线粒体水肿,部分见黏膜上皮有微小溃疡形 成,黏膜细胞问水肿,部分见黏膜上皮细胞水肿,坏 死,溶解,胞浆内线粒体水肿.以及十二指肠黏膜面 有微束颗粒,上皮细胞胞浆水肿,上皮下层问质水 肿,或上皮有微小溃疡形成,上皮细胞线粒体水肿, 或上皮细胞线粒体水肿,空泡变,上皮细胞基底下层 间质水肿.与空白对照组比较,生脉汤剂组,生脉超 微颗粒组,生脉超微滤液组大鼠十二指肠黏膜超微 结构异常有显着性差异,胃黏膜超微结构异常虽没 有显着性差异,但也有一定的改变;停药3d后给药 各组动物与空白对照组比较,胃,十二指肠黏膜超微 结构异常没有显着性差异,见表1. 表1生脉超微颗粒对大鼠胃肠黏膜超微结构的影响 与空白对照组比较.a:P(O05(z值>384 3肠黏膜表面微粒 ChineseJournalofNewDrugs2005,Vo1.1 .. 4......... N....... o ....— . — 7 动物灌胃生脉系列中药后多数十二指肠黏膜可 见大量微束颗粒,其中生脉饮汤剂组大鼠十二指肠 黏膜面的微束颗粒直径一部分约为1,2m,一部 分为100,800131TI,而生脉超微颗粒组,生脉超微滤 液组大鼠十二指肠黏膜微粒的粒径基本上为1, 2.5m,很少见1m以下颗粒.经Ridit检验,与空 白对照组比较,生脉汤剂组和生脉超微颗粒组,生脉 超微滤液组大鼠十二指肠黏膜表面微束颗粒有显着 性差异;停药3d后给药各组动物与空白对照组比 较,十二指肠黏膜表面微束颗粒没有显着性差异,结 !国逝垫苤查生笙!鲞笙!塑 果见表2,大鼠十二指肠黏膜透视电镜图见图1. 表2生脉超微颗粒对大鼠肠黏膜表面微粒的影响 观察期组别n肠黏膜表面微粒检查结果 给药期夺r】 汤剂 超微颗粒 超微滤液 停药期空白 汤剂 超微颗粒 超微滤液 与守白对照组比较.a:P<005( ?和?为给药期空白组,可见4层结构清晰,细胞,线粒体,内质网:? 和?为生脉汤剂,超微颗粒组,可见表面大 量徽束颗粒,』二皮细胞胞浆水肿,问质水肿一?和?为停药期后,l 三脉汤剂,超微颗粒组,偶见上皮细胞内线粒体轻 度水肿,黏膜表面仍见少量小颗粒,绒毛排列不整齐 图I大鼠十指肠黏膜组织透射电镜图 讨论 胃,肠黏膜的超微结构可分为:黏膜上层,一般 为单层柱状结构;固有层,内有紧密排列的大量腺 体;黏膜下层及肌层.小肠是消化和吸收的主要部 位,分为十二指肠,空肠和回肠,各具某些结构特 点.十二指肠黏膜上皮为单层柱状,绒毛部上皮 由吸收细胞,杯状细胞和少量内分泌细胞组成;每个 吸收细胞约有微绒毛1000根,每根长1,1.4m,粗 约80nm,使细胞游离面面积扩大约20倍.小肠腺 的吸收细胞的微绒毛较少而短,故纹状缘薄.微绒 毛表面尚有一层厚0.1,0,5tim的细胞衣,细胞衣 是消化吸收的重要部位.吸收细胞胞质内有丰富的 线粒体和滑面内质网.滑面内质网膜是脂肪吸收与 转运的重要场所.杯状细胞散在于吸收细胞问,分 泌黏液,有润滑和保护作用.吸收细胞释出的乳糜 微粒向中央乳糜管输出.因此,小肠尤其是十二指 肠是机体对物质的重要吸收,消化与转运场所. 目前已证实,大量的生物结构,从核酸,蛋白质, 病毒到细胞器,其线度在1,100nlTl.而”微米中药 制剂”,属细胞级微粉制剂,一般认为其粒径应在 1,75um范围内,二者的粒径相差很大.本实验中 十二指肠黏膜上所附着的微束颗粒其粒径在100, 2500nm,说明其中有部分为中药大分子物质,部分 为微米中药制剂中的小颗粒.这可能是由于:一方 面微米生脉制剂颗粒在加水冲泡时大颗粒溶解成小 颗粒,另一方面水不溶性大颗粒于胃肠道的停留时 间较短,直接排出了体外. 一 8S1一 值一,”,mU一222?一?, ChineseJournalofNewDrugs2005,V..... o .... 1... . .... 1.. 4N,.... o ..— . — 7 近年来,人们发现了纳米给药系统,习惯称为药 物纳米粒,为近年来药剂学领域研究颇为活跃的一 系列新型超微小给药系统的统称,其粒径多在l0, 500am.研究表明:药物或抗原性微粒给药系统可 透过肠道上皮屏障而以整体方式进入血液循环中. 虽然哺乳动物的胃肠道上皮细胞膜对大分子和微粒 物质不能渗透,可经细胞和细胞旁路以及膜上皮细 胞转运而穿过胃肠道,选择性靶向于集合淋巴结等 组织,进入全身循环.一般情况下将纳米药物包 被上一层脂质体(50,100am),被包裹药物可快速 分布于整个胃肠道,减少了药物与胃肠黏膜直接接 触引起的刺激.脂质体的巨大比表面积大大提高了 水不溶性药物的溶出,提高了药物的生物利用度,避 免了水不稳定药物的水解及药物对胃肠道的不良刺 激.但纳米给药过程中是否对胃肠道上皮细胞有 一 定的损伤,目前未见报道. 从本实验结果可见,中药制剂不论是传统汤剂 还是微米中药制剂,均含有大量的大分子物质,进入 胃肠道后停留于肠黏膜上,通过直接渗透,胞饮等吸 收方式被肠黏膜细胞所消化吸收,似与纳米给药系 统有异曲同工的作用.微米中药制剂所含的药物纳 米粒比传统汤剂多得多,因此被胃肠道吸收多,从而 提高了其生物利用度,提高了药效,节省了药材.同 时,胃肠上皮细胞在这种吞噬式的吸收过程中,细胞 必然会有所损伤,这可能是微米生脉制剂组大鼠胃 肠上皮细胞损伤比传统生脉汤剂组较重的原因;但 这种损伤是可逆的,当停药3d后,其中大部分颗粒 主旦堑堕墨查堡笙鲞箜!塑 被吸收或排出体外,上皮细胞的损伤也基本恢复,且 未见颗粒永久黏附于肠黏膜上的趋势. 当然,本实验显示中药制剂在胃肠道的消化吸 收过程对胃肠黏膜超微结构有一定影响,这是否是 中药制剂在体内消化吸收过程的生理现象,有待进 一 步研究.此外,本实验如能结合生物利用度和血 药浓度等研究,对给药时间和停药观察时间进行更 宽的考察,意义更大. [作者简介]李勇敏(1966一),男,副研究员,主要从事中医 基础理论研究和新药开发工作.联系电话:(0731)8719079, E—mail:lym0937@126.c’om. [通讯作者]蔡光先(1951一),男,研究员,博士生导师.联 系电话:(0731)8854261 [参考文献] [1]陆付耳.试论微米中药[j].世界科学技术——中药现代化, 2001,3(1):12—14. [2]杜晓敏.原生药材超细微制剂的药效学研究[J].中草药,1999, 30(9):680—682. [3]蔡光先,杨永华,张水寒,等.微粉化对人参类药材有效成分的 影响[J]中国医药,2001,16(6):26—28. [4]杜晓敏,郭琪,何煜.中成药传统制剂与超细微粉制剂的药效学 比较[j].中成药,2000,22(4):307—308. [5]姚永莉,宋于刚,赵彤,等大鼠脾虚证的胃肠形态学研究[J]. 中国中西医结合脾胃杂志,2000,8(1):8—10 [6]李凤前,陆彬.经胃肠道上皮吸收的微粒给药系统研究概况 [J].国外医学合成药生化药制剂分册,2000,2I(5):307—310. [7]平其能.纳米药物和纳米载体系统[J].中国新药杂志,2002,11 (1):42—46. (接受日期:2004—08—02) 茴三硫对大鼠急性酒精性肝损伤的防治作用 赵洪川,房龙,李靖涛,马安林,王泰龄 (中日友好医院l消化内科,2病理科,北京100029) [摘要]目的:观察茴三硫对大鼠急性酒精性肝损伤动物模型的防治作用.方法:健康雄性Wistar大鼠60只, 随机分为6组.A组(空白对照组)灌胃生理氯化钠溶液20mL?kg,?d;B组(模型组)灌胃等剂量白酒;C,D,E组 (茴三硫小,中,大剂量组)在B组基础上分别预先灌胃茴三硫5,10,20mg?kg,?d,,F组(阳性药对照组)在B组基 础上预先灌胃硫普罗宁100mg?kg,?d,;实验共10d.实验d6和dl1取各组大鼠血液,检测谷丙转氨酶(A),谷 草转氨酶(AST),三酯甘油(TG),胆固醇(CHO),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)和丙二醛(MDA);实验结束时处死动 物,取肝组织,进行HE和Masson染色,光镜检查.结果:在d6和dl1时B组大鼠血清A?,AST,TG和MDA较A组 显着升高,GSH—Px显着降低;C,D,E,F组较B组均有所改善.病理检查发现C,D,E,F组大鼠肝脏脂变,炎症坏死 均有所减轻,前者改善明显.结论:茴三硫对大鼠急性酒精性肝损伤有明显的防治作用. [关键词]茴三硫;急性酒精性肝损伤;肝功能;血脂 [中图分类号]R965.1;R975.5[文献标识码]A[文章编号]1003—3734(2oo5)07—0852—04 ---—— 852---——