【doc】超高效液相色谱-串联质谱法检测盐酸洛哌丁胺胶囊中混入诺氟沙星的研究

【doc】超高效液相色谱-串联质谱法检测盐酸洛哌丁胺胶囊中混入诺氟沙星的研究 超高效液相色谱-串联质谱法检测盐酸洛哌 丁胺胶囊中混入诺氟沙星的研究 超高效液相色谱一串联质谱法检测盐酸洛哌丁胺胶囊中混入诺氟沙星的研究 张翠英,徐金玲,王雪芹,安华民(1.河南省食品药品检验所,郑州市450003;2.河南中 医学院,郑州市 450003) 中图分类号R927.2:R975.5文献标识码A文章编号1001—0408(2008)07—0538— 02 摘要目的:建立以超高效液相色谱串联质谱法检测盐酸洛哌丁胺胶囊中混入诺氟 沙星的方法.方法:色谱柱为Cs,流动相为 ,进样量为10ttL;乙腈一0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.3mL?min,柱温为35? 离子源为ESI,毛细管电压为3.0kV, 离子源温度为110?,扫描方式为多反应检测.结果:结合液相色谱保留时间(包括 紫外光谱),准分子离子和二级质谱裂解碎片3方面 信息分析得出5批样品中有2批混入了诺氟沙星.结论:本方法选择性强,灵敏度高, 可用于检测该制剂中是否混入诺氟沙星. 关键词盐酸洛哌丁胺胶囊;诺氟沙星;超高效液相色谱一串联质谱法 UPLC—MSintheDetectionofNorfloxacininLoperamideHydrOchIOrideCapsules ZHANGCui—ying,WANGXue—qin,ANHua— min(He'nanInstituteforFoodandDrugControl,Zhengzhou 450003,China) XUJin—ling(He'nanCollegeofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450003,China) ABSTRACTOBJECTIVE:Todetectwhetherthereismixingofnorfloxacininloperamideh ydrochloridecapsulesbyU— PLC—MS.METH0DS:TheseparationofnorfloxacinwasperformedonC】 8columnwithcolumntemperaturesetat35?,and themobilephasewascomposedofacetronitrileand0.1%formicacid(gradientelution)witha flowrateof0.3mL?min,. Thesamplesizewas10"L.ESIsourcewasappliedwithcapillarytubetensionat3.0kVandions ourcetemperatureatll0?, andscanmodewasmultiplereactionmonitor.RESULTS:Ithasbeenprovedthattherewasnor floxacinin2ofthetotal5 batchesofsamplesbasedonthedataofretentiontimeofRPHPLCincludingultravioletspectr a.thequasi—molecularionand thesecondordermassspectrasplitfragments.CONCLUSION:ThemethodiShighlyselecti veandsensitive,andcanbeused todetectwhethernorfloxacinhasbeenillegallyaddedintoloperamidehydrochloridecapsule s. KEYWORDSLoperamidehydrochloridecapsules;Norfloxacin;UPLC—MS 盐酸洛哌丁胺胶囊是止泻药,用于各种原因引起的急,慢 性腹泻;而诺氟沙星为喹诺酮类抗生素,适用于敏感菌所致的 尿路感染,宫颈炎,前列腺炎,肠道感染等.但诺氟沙星具有如 胃肠道反应,中枢神经系统反应及过敏反应等.有少数厂家,可 能会因为成本原因在盐酸洛哌丁胺胶囊中加入诺氟沙星,如果 患者在不知情时服用该药物,非常容易产生不良反应,甚至危 及生命.为此,需要建立一种合适的方法对此进行检测.诺氟沙 星和盐酸洛哌丁胺多采用高效液相色谱法..'进行含量测定, 少有液一质联用法].本文建立了以超高效液相色谱串联质 谱(UPLC—MS)法分析盐酸洛哌丁胺胶囊中混入诺氟沙星的 定性分析方法,同时对洛哌丁胺和诺氟沙星的裂解方式进行了 解析. 1仪器与试药 UPLC—MS仪,包括Quity二极管阵列检测器(PDA), 电喷雾离子化源(ESI),Masslynx4.1工作站等(美国Waters 公司). 盐酸洛哌丁胺对照品(批号:100300200001)及诺氟沙星 对照品(批号:4509801)均由中国药品生物制品检定所提供; 盐酸洛哌丁胺胶囊(河南省食品药品检验所取自某药厂,规格: 每粒2mg,批号:06031儿,0603112,0507031,060402, 0510071);乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为超纯水. 女主管药师,博士.研究方向:药品与食品研究开发.电话:0371 63388295.Email:zhangcy727@yahoo.corn.cn 538?ChinaPharmacy2008Vo1.19No.7 2方法与结果 2.1色谱条件 超高效液相色谱柱:Cs(50mm×2.1mm,1.7m);流动 相:乙腈一0.1%甲酸溶液,梯度洗脱:0,2min乙腈13%,2, 7min乙腈由13%升至60%;检测波长:200400nm;柱温: 35?;流速:0.3mL?min一;进样量:10L. 2.2质谱条件 离子源:ESI;毛细管电压:3.0kV;离子源温度:110?;脱 溶剂气温度:300?;脱溶剂气流量:600L?h,;锥孔气流量: 50L?h,;扫描方式:多反应检测(MRM),正离子方式.用于 定量分析的离子分别为m/z32@+276(诺氟沙星),478-+266 (洛哌丁胺),定量分析时氩气流量为0.18mL?min-1~锥孔电 压和碰撞能量见1. 表1MRM分析的质谱参数 Tab1Massspectraparametersinmultiplereaction monitoringanalysis 2.3对照品溶液的制备 中国药房2008年第19卷第7期 分别精密称取盐酸洛哌丁胺,诺氟沙星对照品各2.5mg, 置于25mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,得混合对照 品溶液;精密吸取上述混合对照品溶液1mL,置于i00mL容 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,得每1mL各含盐酸洛哌丁胺,诺 氟沙星1g的对照品溶液. 2.4供试品溶液的制备 取样品1粒,将内容物与囊壳置于同一具塞锥形瓶中,精 密加入甲醇20mL,振摇30rain,3500r?min.离心5min, 取上清液作为供试品溶液.根据试验需要用流动相进行适当的 稀释,经0.2m滤膜过滤. 2.5对照品质谱分析 采用正离子检测方式对盐酸洛哌丁胺对照品溶液进行U- PLC,MS和MS—MS分析,保留时间为6.18rnin.对照品的 准分子离子[M+H】峰为m/z478;对m/z478进行子离子扫 描,产生的主要碎片为m/z266,210.推测其质谱裂解途径详 见图1 AB 图1对照品在ESI(+)方式下的质谱裂解 A洛哌丁胺;B.诺氟沙星 Fig1FragmentationofcontrolsubstanceinESI(+) A.1operamide;B.norfloxacin 采用正离子检测方式对诺氟沙星对照品溶液进行UPLC, MS和MS—MS分析,保留时间为1.60rnin.对照品的准分子 离子[M+H】峰为m/z320;对m/z320进行子离子扫描,产 生的主要碎片为m/z302,276,256,233,二级质谱中主要的碎 片离子峰是诺氟沙星的脱水峰302([M+H一18】),脱羧峰 276([M+H一44】)以及脱羧后哌嗪环断裂发生结构重排离 子,较低丰度的离子峰有256([M+H一64】)是脱羧后再丢失 HF分子产生的带电离子([M+H—CO一HF】),233是失去 c2|{NHz的产物离子([M+H—COz—C~I-INH】).推测其质 谱裂解的主要途径详见图1. 2.6供试品的定性检测 在相同的色谱及质谱条件下对5个批次盐酸洛哌丁胺胶 囊的提取溶液进行UPLC,MS和MS—MS分析.结合液相色 谱保留时间(包括紫外光谱),准分子离子和二级质谱裂解碎片 3方面的信息,可以证实5批次的盐酸洛哌丁胺胶囊中,有2个 批次混入了诺氟沙星.根据MRM监测计算诺氟沙星和洛哌丁 胺的含量,结果见表2,图2. 2.7最低检测限考察 取洛哌丁胺和诺氟沙星对照品溶液,以不同比例稀释后测 表2样品含量测定结果 Tab2Resultsofcontentdeterminationofsamples 含量/%含量/% 0246810rain0246810rain AB 图2样品和对照品的多反应监测色谱 A.供试品;B.混合对照品;1诺氟沙星;2.洛哌丁胺 Fig2Multiplereactionmonitoringchromatogramsof sampleandstandard A.testsample;B.mixedcontrolsubstance;1.norfloxacin;2. 1operamide 定,结果洛哌丁胺和诺氟沙星的最低检测限分别为0.2,1ng? mL.(S/N=3). 3讨论 在浓度相等的情况下,甲酸比乙酸更有利于洛哌丁胺和诺 氟沙星药物的离子(质子)化,无论是甲酸还是乙酸,都是浓度 为0.1%时的质谱响应值最高,随着酸浓度的加大,质谱响应 值逐渐下降,因为离子源中离子浓度过高会抑制待测组分的电 离,从而导致离子化效率下降. 笔者应用UPLC—MS技术,建立了快速检测盐酸洛哌丁 胺胶囊中混入诺氟沙星的方法,样品经简单的溶剂提取后即可 上机测定,结果表明5批样品中有2个批次混入了诺氟沙星, 含量分别为每粒0.93,0.79rng.笔者另采用2005年版《中国 药典》二部的方法恻定了诺氟沙星的含量,2个批次含量分别 为每粒0.88,0.78rng,与本文结果基本一致. 参考文献 [1】冯有龙,李玉波,高华,等.谷氨酸诺氟沙星注射液的高 效液相色谱分析[J】.华西药学杂志,2000,15(1):55. [2】傅强,贺浪冲,常春,等.盐酸洛哌丁胺13服液的制 备及稳定性研究[J】.中国药房,2005,16(20):1543. [3】林峰,林海丹,吴映璇,等.LC—MS—MS测定烤鳗中 4种氟喹诺酮药物残留量[J】.分析测试,2004,23 (5):43. [4】国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)[S】. 2005年版.北京:化学工业出版社,2005:641. (收稿日期:2007—04—09修回日期:2007—06—10) 《中国药房》杂志—一10天见一面,欢迎投稿 中国药房2008年第19卷第7期 ,订阅 ChinaPharmacy2008Vo1.19No.7?539?