抗神经元抗体对副肿瘤综合征早期诊断的临床意义

抗神经元抗体对副肿瘤综合征早期诊断的临床意义 抗神经元抗体对副肿瘤综合征早期诊断的 临床意义 第33卷第1期第97页 2004年2月 华中科技大学(医学版)Vo1.33No,1P.97 JHuazhongUnivSciTech[HealthSci]Feb,2004 抗神经元抗体对副肿瘤综合征早期诊断的临床意义 谢俊丽崔天盆王小梅王涛. 华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科神经内科,武汉430022 摘要目的探讨抗神经元抗体抗一Hu,抗一Yo,抗一Ri抗体的检测与副肿瘤综合征早期诊断的关系.方法采用 蛋白免疫印迹分析(WesternBlot)法对12例确诊为副肿瘤综合症(PNS)的患者血清及32例非PNS血清进行检测. 结果12例确诊患者血清中检测到一项或多项抗体阳性;PNS患者血清中抗一Hu,抗一Yo,抗一Ri抗体的阳性率高于非 PNS对照组,差异有极显着性意义(P<O.01);正常对照组血清抗一Hu,抗一Yo,抗一融抗体全部为阴性.结论抗神 经元抗体抗一Hu,抗一Yo,抗一Ri抗体可作为PNS早期诊断及确诊的指标 关键词抗神经元抗体;副肿瘤综合征;早期诊断 中圈法分类号R730.43 ClinicalSignificanceofAnti—neuronalAntibodiesintheEarlyDiagnosis OfParaneOplasticNeurologicalSyndromes XieJunli,CuiTianpen,WangXiaomeietal DepartmentofClinicalLaboratory,UnionHospital,TongjiMedicalCollege, HuazhongUniversityofS(ienceandTechnology,Wuhan430022 Abstract0bjectiveTodiscusstherelationshipbetweenthedetectionofanti-neuronalantibodi es (Hu,Yo,Ri)andearlydiagnosisofparaneoplasticneurologicalsyndromes(PNS).MethodsUsingthe albumenimmunityanalysis(WesternBlot)method,theserumofpatientswithPNS(including12patients withPNS,32patientswithnon-PNS,wasdetected.Resuits0neormorepositiveantibodiesweredetec— tedintheserumof12patientswithPNSoffinaldiagnosis.Therewasstatisticallysignificantdifferencein thepositiverateoftheanti-HU,anti-Yo,anti— RibetweenPNSgroupandnon-PNSgroup(allP<0.01). Alltheserainthenormalgroupwerenegativeforanti— neuronalantibodies.ConclusionTheanti—neuronal antibodies(Hu,Yo,Ri)mightbetheindicatorsofearlydiagnosisandfinaldiagnosisofPNS. Keywordsanti-neuronalantibody;paraneoplasticneurologicalsyndromes;earlydiagnosis 肿瘤细胞表达Hu,Yo或Ri抗原,能诱导体 内产生特定的自身抗体抗一Hu,Yo,Ri抗体,这 些抗体的作用局限于神经系统,并导致神经紊乱引 起副肿瘤综合症.副肿瘤综合征(paraneoplastic neurologicalsyndromes,PNS)自1965年提出以 来在临床已越来越多地被发现,其神经症状可表现 为Lamber-Eaton综合征,运动神经元病,亚急性 小脑变性,颅神经麻痹等.患者多为慢性隐匿或亚 急性起病,症状进行性加重.96.2的患者均在出 现神经系统症状后才被诊断为PNS,继而寻找肿 谢俊丽,女,1973年生,技师 瘤.血清中高滴度的神经系统自身抗体如抗一Hu抗 体,抗一Yo抗体,抗一Ri抗体等被认为是副肿瘤综 合征的特异性标志[1].目前,国内外对以上几种自 身抗体的检测报道较少.我室采用蛋白免疫印迹分 析法(WesternBlot)对1999年5月,2003年6 月本院收治的l2例确诊为PNS及32例非PNS病 例进行以上几种抗体的血清学检测,以探讨其临床 意义. 1资料与方法 1.1对象 PNS患者组:12例,其中小细胞肺癌(small ? 98?华中科技大学(医学版)2004年2月第33卷第1期 celllungcancer,SCLC)5例,乳腺癌2例,卵巢 癌2例,肝癌2例,嗜铬细胞瘤1例,患者经过纤 支镜检,病理学检查或核磁共振检查并被临床证实 前已有副肿瘤综合征中的神经系统症状出现. 其它疾患对照组:12例,其中系统性红斑狼 疮5例,皮肌炎1例,类风湿性关节炎1例,肺结 核2例,前列腺癌3例.已经病理或影像学确诊, 且无神经系统症状及相关主诉. 正常对照组:20例,均为健康体检者,男, 女各10例,年龄16,60岁,平均(40.2?12.0) 岁. 1.2方法 1.2.1标本采集:抽取静脉血3,5ml,4000r/ min离心15min后取上清.24h内常温下检测, 若48h检测需贮存在2,8?,超过48h血清需 一 20?保存. 1.2.2WesternBlot法:取自灵长类小脑的抗原 经电泳分离后附着在硝化纤维膜带上.每条带用 1.5ml的磷酸盐缓冲液洗15min后,加入1:50 稀释的血清1.5ml,室温振摇1h,振摇洗涤3次 后加1:10磷酸盐缓冲液稀释的碱性磷酸酶标记的 羊抗人IgG二抗1.5ml,室温振摇1h,再振摇洗 涤3次,拍干后加显色剂显色10min,用流水冲 洗,判断结果.试剂选用德国欧蒙公司产品. 1.2.3WesternBlot结果判断:所有试验条带同 时有2种标志带出现(如图1中A1,A2处)示为 实验成功.抗一Hu抗体阳性:在38kD(1kD一 0.9921ku)处(如图1中A3)有强的条带出现 (约1mm宽)方可判断为阳性,A3上方或下方允 许出现的蛋白质条带,暂无文献报道与抗一Hu有 关.抗一Yo抗体阳性:在62kD(如图1中A4)处 有较强的染色条带出现,亦可在34kD处出现中度 显色的条带都可判断为抗一Yo抗体阳性.抗一Ri抗 体阳性:只有在80kD(如图1中A5)与55kD (如图1中A6)处同时有两条较强的条带出现时, 才可判断为抗一Ri抗体阳性. 1.2.4统计学处理:所有资料应用SAS6.22版 软件进行检验. 2结果 12例PNS患者血清中,每例都有1项或多项 抗神经元抗体阳性见表1.其它疾病对照组血清中 抗神经元抗体只有1例为阳性,正常对照组血清中 抗神经元抗体全部为阴性.PNS患者抗神经元抗 体阳性率明显高于非PNS患者(P<0.01). 图1WesternBlot结果判断图 表1PNS患者与非PNS患者抗神经元抗体表达 阳性例数的比较 3讨论 Hu的靶抗原存在于中枢及外围神经系统的所 有神经元,也存在于相关肿瘤细胞中,是相对分子 量介于35,40kD的一组蛋白.Ri的靶抗原局限 于中枢神经系统的神经元,在细胞核中含量高,在 细胞质中也有表达.Ri抗原与55kD及80kD两 种神经元蛋白相关.抗-Hu抗体主要见于类瘤性感 觉神经病及类瘤性脑脊髓炎,阳性提示伴有副肿瘤 综合征的肿瘤存在,大多数早期SCLC患者的血清 可检测到此抗体.抗一Ri抗体主要见于大脑,脑 干,脊髓功能紊乱,为乳腺癌或SCLC的标志之 一 .本实验中12例PNS患者中5例SCLC患者都 是在确诊前因出现神经系统阳性体征而筛查抗一 Hu,抗一Ri,抗一Yo抗体,进而结合其它检查手段 找到原发病灶,得以确诊.在PNS患者中,抗一 Hu,抗一Ri等抗体对SCLC敏感性好,特异性高, 与文献报道相符[2].本室还在2例PNS并确诊为 肝癌的患者血清中检测到抗一Ri抗体,提示抗-Ri 谢俊丽等.抗神经元抗体对副肿瘤综合征早期诊断的临床意义?99? 抗体可能与肝癌引起的PNS相关..正常人体内未 发现抗一Hu与抗-Ri抗体. Yo抗原蛋白相对分子量为34kD及62kD. Yo的靶抗原为小脑的普肯耶细胞质,抗一Yo抗体 也称为普肯耶细胞质抗体.抗一Yo抗体多见于女 性,该抗体对诊断副瘤性小脑变性合并卵巢癌及乳 腺癌高度特异. 大多数PNS是由肿瘤抗原和神经系统表达的 蛋白发生自身交叉免疫反应所致[3],主要见于 SCLC,乳腺癌,卵巢癌等恶性肿瘤,在癌症患者 中的发病率变化很大.约1/2的患者出现神经系统 症状时,原发性癌肿尚处于可根治阶段[1],因而临 床早期诊断对于及时发现和治疗原发性肿瘤至关重 要.然而目前还缺乏统一的,经过科学论证的诊断 标准.查2003年5月以前我国的医学文献数据库, 只有少数几篇相关报道,且对于抗神经元抗体的检 测方法局限于间接免疫荧光法及亲合免疫细胞组织 化学法,不能明确或确定分子量[4].我室用免疫印 迹法检测抗神经元抗体,能明确各特异性条带的分 子量,从而区分各型抗体,这些抗体对PNS的特 异性强,敏感性高,能更好结合临床进一步诊断 PNS. 总之,抗神经元抗体对PNS早期诊断具有重 要意义,临床上对高度怀疑为PNS的患者在鉴别 诊断与确诊时,应重视血清中抗神经元抗体的检 测. 参考文献 1陈健华,刘秀琴,郭玉璞等.北京协和医院1990, 2000年副肿瘤综合征住院病例.中风与神经疾病 杂志,2002,19(2):96 2SaizA,DalmauJ,ButlerMHeta1.Anti-amphiphysin Iantibodiesinpatientswithparaneoplasticneurological disordersassociatedwithsmallcelllungcarcinoma.J NeurolNeurosurgPsychiatry,1999,66:214 3FerrorI.Pathologyofparaneoplasticsyndromesofthe centralandperipheralnervousandmuscle.RevNeurol, 2002,31:1228 4王刚,陈吝鸣,祝延等.特异性神经元抗体对小细 胞肺癌早期诊断价值的初步研究.安徽医科大学, 2002,37(5):338 (2003—08—25收稿) (上接第9O页) 3王本祥.现代中药药理学.天津:天津科学技术出版7 社,1996.890 4夏腊梅,伍杰雄.川芎嗪对大鼠心肌线粒体损伤的保护 作用.中国药房,2002,13(7):4008 5CamposY,HuertasR,BautistaJeta1.Musclecarni- tinedeficiencyandlipidstoragemyopathyinpatients withmitochondrialmyopathy.MuscleNerve,1993, 16:7789 6钱名垄,杨保津,顾文华等.丹参有效成分的研究I: 丹参酮A磺酸钠和次甲丹参醌的化学结构.化学, 1978,36(3):199 王文俊,吴咸中,姚智等.大黄素,丹参素对单核细 胞分泌炎性细胞因子的调节.中国免疫学杂志,1995, 11(6):370 1wabeT,HaradaT,TsudoTeta1.Tumornecrosis factor-alphapromotesproliferationofendometriotic stromalcellbyinducinginter-leukin-8geneandprotein expression.JEndoerinolMetab,2000,85:8248 RyanIP,TsengJF,SchriockEDeta1.Interleukin-8 concentrationsareelevatedinperitonealfluidofwomen withendometriosis.FertilSertil,1995,63:929 (2003—07-08收稿)