【doc】液相色谱-串级质谱联用法测定蜂王浆中氯霉素残留量

【doc】液相色谱-串级质谱联用法测定蜂王浆中氯霉素残留量 液相色谱-串级质谱联用法测定蜂王浆中氯 霉素残留量 誊量测试 液相色谱一串级质谱联用法测定蜂王浆中 氯霉素残留量 吴建军郭卫荣/上海市计量测试技术研究院 液相色谱一串级质谱联用仪作为一种新兴的色质联用技术,具有极高的灵敏度, 现广泛应用于动物源性食品中痕量氯霉素的定性与定量测定.该文采用液相色谱一串 级质谱联用法不需要使用内标,而直接对蜂王浆中低于ppb级的氯霉素残留进行定性 定量.蜂王浆样品在(O.1,2)ug/I水平A.N收率达~1J80%~90%,重现性良好. 关键词 液相色谱一串级质谱联用仪;氯霉素;蜂王浆 1引言 氯霉素(Chloramphenico1)是一种广谱抗生素,具有 良好的抗菌和药理特性,价格便宜,曾被广泛应用于 各类家禽,家畜,水生动物(鱼,虾等)及蜜蜂等动 物的各种传染病的防治.但是经过研究明氯霉素对 人有严重的毒副作用.目前,大多数国家对食品中氯 :线形分析主要是用来做微结构研究 2)线形分析 的,为此,不可随意处理样品,如研磨,重压,退火 等,因这些加工有可能改变微结构,改变线形. 3)高低温测量:试样从常温升到高温或降到低 温,由于较大幅度的温度变化会使试样产生热胀冷缩 现象,轻度的会使试样表面不平整,严重时会使试样 从试样板上脱落.因此,在制样时需考虑到可能的胀 缩现象.做高温测量时,试样不可压得太紧,留一点 膨胀空间,免得试样掉落;做低温测量时,试样不可 压得太松,此防因冷缩而掉落. 研究工作的要求是多种多样的,本文不可能完全 满足各种要求的所有制样方法;新的丁作会有新的要 求,不一定可以照搬前人使用的方法.这里介绍的是 一 部分过去比较通用的,只能借鉴,对新的情况需研 究新的制作方法. 参考文献 [1]马礼敦.近代x射线多晶体衍射——实验技术与数据分析.北京 化学工业出版社,2004:225—241. 【2]马礼敦.近代x射线多晶体衍射一实验技术与数据分析.北京 化学工业出版社,2004:411—413. [3]JenkinsR,SnyderRL.IntroductiontoX—rayPowderDiffraction.New York:JohnWiley&Sons.1996.244—253. [4]SmithST,SnyderR,BrounellLAdvinX-rayAnal,1979,22:77—87. [5]BhuvaneshNSP,ReibenspiesJH.JApp1.Cryst,2003,36: 1480—1481. 程利芳,杨传铮.物理学中国用户集,第二期,2008. PreparationofthesamplesforX—raypowder difrraetometers MaLidun (TheCenterforAnalysisandMeasurements,FudanUniversity) Abstract:InthispaperthefocusingprincipalofBragg-Brentano diffractometer,thedemandsofthefocusingprincipleforthesamples, thedemandsofpreparationofthesamplesforthephysicalparameters measured,somegeneralmethodsforpreparationofthesampleswere introduced.Somecommentswerediscussedtoo. Keywords:X—ray;powderdiffractometer;samplepreparation 00i上毒计量测试 霉素最高残留量(MRL)做了严格的规定,如欧盟规定氯 霉素为0.1ng/g.氯霉素在食品中的残留问不仅关系到 人类的健康,对国际食品贸易也有着巨大的影响. 食品中氯霉素的残留检测方法主要采用高效液相 色谱(HPLC)fH气相色谱(Gc).近年来,液相色谱/质谱 ftriMS)和气相色谱/质谱(GC/MS)开始用于氯霉素残 留检测,但由于缺乏足够的结构碎片信息,用于确证 还不具说服力.本实验采用LC/MS/MS,测定了蜂王 浆中的氯霉素.通过丰富的母/子离子信息,为阳性 样品确证提供了依据.同时,方法操作简便,免去了 GC的衍生化步骤,灵敏度优于现有文献报道,可完全 满足欧盟和美国FDAfl~3限量要求. 2实验仪器与方法 2.1主要仪器与试剂 液质联用仪:waters2695液相系统~HWatersQuattro PremierXEVAB430三重四极杆串级质谱仪. 氯霉素样品:(99.5%美国Sigma公司) 2.2样品前处理 2.2.1提取称取0.5g试样,精确到0.O1g,置于50ml 具塞离心管中,加人5ml40g/L氯化钠水溶液,于摇床 上快速混合1inin,使试样完全溶解.加人15ml乙酸乙 酯,在摇床上振荡10rain,在3000r/min下离心10rain, 吸取上层乙酸乙酯转人100ml鸡心瓶中,再加人10ml 乙酸乙~1]50ml离心管中充分混匀重复提取二次,合 并上层乙酸乙酯提取液于鸡心瓶中,将鸡心瓶置于旋 转蒸发装置在450(=减压蒸干,加5ml蒸馏水于鸡心瓶 内溶解残渣制成提取液,超声5rain后,制成提取液 (111,待净化. 2.2.2净化依次加入5ml甲醇,5ml水到C18Jl,柱上 活化小柱,然后将提取液(1)加入小柱,用2ml水洗涤浓 缩瓶,将洗涤液加入C18/J,柱上过柱,弃去流出液. 再用5ml甲醇+水(10+90=V+V)淋洗液洗涤C18小 柱,弃去淋洗液,待淋洗液完全流出C18d,柱,用2× 2ml甲醇+水(70+30=V+V)洗脱,真空抽干C184, 柱收集洗脱液于10ml离心管中,(以上步骤控制流速 约1ml/min)最后真空抽干C18小柱,用氮气于40? 吹干洗脱液.向上述吹干的离心管中加人1ml甲醇+水 = 50+50(V+V)定容,充分混匀超声1min后,待测定. 2.3液相色谱条件 色谱柱:InertsilODS一35m,2.1X150ram或相 当;流动相:乙腈+水;柱温:室温;进样量:10LLl. 2.4质谱条件 离子源:电喷雾电离fEsI);监测模式:采用MtlM 多通道反应监测模式;扫描方式:负离子模式; 3结果与讨论 3.1样品提取条件优化 学术论文 曼嚣墨匿娃嚣盟 根据氯霉素易溶于乙酸乙酯,甲醇,乙腈,微溶 于水的性质,选用乙酸乙酯将样品中氯霉素提取.氯 霉素提取多采用样品加无水硫酸钠加乙酸乙酯提取, 脱脂后再用乙酸乙酯萃取,有报道用乙酸乙酯加水提 取可减少水溶性杂质,本实验分别比较了1)0.5g样品 加1g无水硫酸钠加15ml乙酸乙酯;2)0.5g样品加5ml 水加15ml乙酸乙酯;3)用5ml40g/L氯化钠水溶液代 替方法2)中的水;4)0.5gf4品加15ml乙酸乙酯.实 验结果表明方法3)效果好,杂质少,那是由于乙酸乙 酯和水共存条件下提取,样品中的水溶性杂质进入水 层,相当于进行一次液液萃取,氯化钠起到盐析的作 用,减少乙酸乙酯层的水溶性杂质.(图1) 3_2样品净化条件优化 将含1g氯霉素的标准溶液1ml~JI1入空白样品中, 经过提取(1)后,将此溶液移入经活化后的C18d'柱,分 别比较了淋洗效果.由图2可知,当甲醇浓度为70% 时,柱上对氯霉素已经无保留,可以确定洗脱液为70 %甲醇水溶液.同时通过洗脱分布fH1线,可以确定其 净化条件.当甲醇浓度大于10%时,柱上保留的氯霉 素开始洗脱,可以确定淋洗液的浓度为10%的甲醇水 溶液 方法1),2)和4)的实验效果冈 方法3)的实验效果图 图1不同提取条件的比较 国内统一刊号CN31—1424/TB7 学术论文 12O% 1OO% 8O% 60% 40% 2O% O% I2345678 图2萃取效率随萃取剂量的变化曲线 3.3色谱及质谱条件的优化 优化的液相条件:流动相为A(蒸馏水)和B(乙 腈),流速为0.2ml/min.A与B的体积比60:40. 优化的质谱条件:质谱采取负离子选择反应监 皇 0 ? 2000 0 070 1OO % O 黪试 测模式,前级离子m/z=321产生3个主要子离子(m/ z:257.0,194.3152.8)(见图3),因此选择定性离子对 为(321/152.8;321/194.3;321/257.0),定量离子对 为(321/152.8).离子源温度:120?;毛细管电离 电压:一2.3kv;锥孔电压:30V;脱溶剂气温度:350 ?;脱溶剂气:700L/hr;反吹锥孔气:50L/hr. 3.4方法的标准曲线,重现性,回收率及检出限量 3.4.1工作曲线的制作精确称取氯霉素标准品适 量,用流动相稀释成浓度为50g/l的溶液,再定量 稀释成浓度为10.O0,5.00,2.50,1.00,0.50,0.25和 0.10g/1的溶液,分别取l0l注入高效液相色谱 仪,以峰面积对浓度作图,得工作曲线,见图4.本方 法的检出限量为0.1g/l. QuattroPremierXE10-Aug.2007 l1:32:21 l30IJ 3882 15l2 l323,.I17623837f588106.612o.8772209927?65I376080lO0l20140l60180200220240260280300320340360380400 图3氯霉素的主要离子碎片质谱 0020406080 图4氯霉素的工作曲线 ppb 0 3.4.2加标回收率在空白蜂王浆样品中加入f0.1,21 g/l的氯霉素标准溶液1.O0ml,按2.2的提取条件进行 实验,按2.3,2.4所确定的分析条件下分析,得氯霉素 的回收率为80%,93%,对6个样品检测的相对标准偏 差(RSD)均?6.0%.(表1) 表1蜂王浆中氯霉素残留检测的回收率(:6) 8国内统一刊号CN31—1424/TB 参考文献 【1】将定国,杨大进.中国食品卫生杂志,2002,14(2):44—47. [2]胡大晰,李庆才.炯台师范学院(自然科学版),1994 2:45—47. 【3J3方从容.中国食品卫生杂志,2002,14(6):17—19. [4]迂君,马金波.中国食品卫生杂志,2004,14(2):207 Liquidchromatography-CascadeMS determinationofchloramphenicolresiduesin royaljelly WuJianjun,GuoWeirong (ShanghmInstituteofMeasurementandTestingTechnology) Abstract:Liquidchromatography—CascadeMSasanewcolormass spectrometrytechnology,withhighsensitivity,isnowwidelyusedin animal—derivedfoodstraceofchloramphenicolinthequalitativeand quantitative.Inthispaper,liquidchromatography—CascadeMSdonot needtOusetheinternalstandard,butdirectlytOtheroyaljellyinless thanppblevelforchloramphenicolresiduesqualitativeandquantitative analysis.Royaljellysamplesinthe(0.1,2)ug/1levelofrecoveriesto80 to90percentandreproduciblegood. Keywords:liquidchromatography-CascadeMS;chloramphenicol;royaljelly