诺氟沙星缓释片的质量标准研究

诺氟沙星缓释片的质量研究 第2O卷第1期安徽工程科技学院学报 2005年3月JournalofAnhuiUniversityofTechnologyandScience VolI2O.N0.1 Mat..2005 文章编号:1672—2477(2005)01—0060—04 诺氟沙星缓释片的质量标准研究 方磊 (安徽工程科技学院生化工程系,安徽芜湖241000) 摘要:用紫外分光光度法测定诺氟沙星缓释片的含量,于257nm波长处测定其吸收值,结果显示诺氟沙星在 1,8~g/mL浓度范围内与吸收值线性关系良好,r=0.9999.平均回收率为i00.29,RSD为0.69.用薄层层 析法对有关降解产物进行检查.主斑点无拖尾,主斑点与杂质斑点分离度大,重线性好,所有斑点的R,值均在 0.2,0.8. 关键词:诺氟沙星;紫外分光光度法;含量测定;薄层层析;相关物质 中图分类号:R917文献标识码:A 喹诺酮类又称砒酮酸类或吡啶酮类,是一类较新的合成抗菌药,此类药物与其他抗菌药的作用点不 同,它们以细菌的脱氧核糖核酸为靶,通过抑制使DNA形成超螺旋DNA回旋酶,进而干扰DNA的合 成,造成染色体的不可逆损害,使细菌死亡.此类药物因不受质粒传导耐药性的影响,而与许多抗生素间无 交叉耐药性,因此,疗效显着,临床应用越来越受重视].诺氟沙星是喹诺酮类广谱抗菌药,主要用于治疗 泌尿及胃肠道感染,疗效较好,临床常用剂型为胶囊剂.《中国药典》(1995年版)含量测定使用的是高氯酸 非水滴定法,此法无专属性,广义的碱均可消耗高氯酸而使含量测定结果并非诺氟沙星的真实含量.2000 年版药典含量测定采用了HPLC法,但此法需用高效液相色谱仪.目前,许多医院和基层药检所尚无采用 HPLC法的条件.又因为诺氟沙星分子结构中具有喹诺酮类共轭体系,在紫外光区有特征吸收.本文采用 紫外分光光度法测定诺氟沙星的含量,该法操作简便,快速,准确.采用薄层层析法对诺氟沙星在各种不同 调整流动相,固定相的极性和酸碱性,主斑点能与杂质斑点 条件下的降解产物进行定性鉴别, 分离,重现 性好,所有斑点尺,值均在0.2,0.8. 1材料与 1.1仪器与试剂【2 岛津UV一1600紫外分光光度计,752紫外光栅分光光度计(上海分析仪器厂),uV—l型三用紫外 分析仪,微量注射器(25ttL),TDP型单冲压片机.硅胶H,硅胶GF254,层析缸,羧甲基纤维素钠,诺 氟沙星对照品,卡波姆971PNF,PVPK30,乳糖,碳酸氢钠,氯仿,甲醇,氨水,三乙胺,磷酸氢二钠,醋 酸乙酯,以上试剂均为分析纯. 1.2方法 1.2.1含量测定 (1)标准曲线的制备.精密称取诺氟沙星化学对照品50mg,置250mL容量瓶中,用0.1mol/L的 HC1溶解并稀释至刻度,摇匀,从中分别精密吸取稀释液0.5mL,1.0mL,2.0mL,2.5mL,3.0mL,4.0 mL置100mL容量瓶中,继续稀释,定容,于257nm处测吸光度,并作标准曲线. (2)诺氟沙星缓释片的制备.将诺氟沙星和辅料卡波姆,碳酸氢钠,乳糖,PVP,硬脂酸镁按重量比为 60:lO:l0:16:3:l称取,将诺氟沙星过100目筛与辅料充分混合后,乙醇溶液制软材,过24目筛制 粒,50,60?烘干整粒,加入硬脂酸镁混匀后压片,片重500mg. 收稿日期:2004—09--03 作者简介:方磊(i979一),女,安徽芜湖人,助教. 第1期方磊:诺氟沙星缓释片的质量标准研究?6I’ (3)稳定性试验.取浓度为5ttg/mL的诺氟沙星溶液在0h,1h,2h,4h,8h,12h,24h分别测定吸 收值. (4)含量测定.取自制诺氟沙星20片,研细,精密称取细粉适量(约相当于主药50rag),置250mL容 量瓶中,加入0.1mol/L的HC1溶解并定容,过滤,取续滤液2.5mL,置100mL容量瓶中,用0.1mol/L 的HC1稀释至刻度,摇匀,于257nm处测吸光度,代入标准曲线方程计算含量. (5)回收率.分别精密称取诺氟沙星对照品40mg,50mg,60mg各5份及相应处方量的辅料,置250 mL容量瓶中,用0.1mol/L的HC1溶解并定容,过滤,取续滤液2.5mL,置100mL容量瓶中,加入0.1 mol/L的HC1稀释至刻度,摇匀,于257nm处测吸光度,代入标准曲线方程计算回收率.回收率一(测定 平均值一空白值)/an入量*100%. (6)重复性.取自制040226批号样品,精密称取6份,照含量测定方法测定含量. 1.2.2相关物质检查 采用薄层层析法检查,通过调整固定相和展开剂的酸碱性和极性,使主斑点无拖尾现象,且主斑点和 杂质斑点分离度大,重现性好,所有斑点R,均在0.2,0.8. (1)固定相的选择.诺氟沙星在硅胶H版上无论是酸性还是碱性展开系统,均存在主斑点拖尾 严重的 现象,诺氟沙星为两性物质,以碱性占优,所以我认为应调整硅胶板pH值以减少主斑点被吸附的程度而 又不影响各斑点的分离度,并选用硅胶H作为吸附剂.对不同浓度NaHPO调制的及不同浓度CMC— Na制备的硅胶H铺成的层析板进行正交实验以确定最优薄层板.固定相因素水平见1. (2)展开剂的选择.按文献[4,5]进行展开系统的优选,确认诺氟沙星需要强的洗脱系统.改变氯仿, 甲醇,三乙胺及醋酸乙酯的比例,调整展开剂酸碱性和极性,采用四因素三水平正交法安排实验,寻找最佳 的R,值.展开剂因素水平见表2. 表1固定相因素水平表 因素 水平AB Na2HPO4/CMC—Na/ 表2展开剂因素水平表 (3)薄层板的制备.根据所确定的最佳系统制备薄层板.称取硅胶H(青岛海洋化工厂)20g,加含4 NaHPO与0.2CMC—Na的溶液60mL,研磨均匀后铺板(10cm×20cm)3块,经105?活化1h,置 干燥箱内备用. (4)相关物质检查.供试液:精密称取细粉适量(相当于诺氟沙星25mg),加二氯甲烷一甲醇(1:1)10 mL,过滤,取续滤液,制成每1mL中含2.5mg的溶液作为供试品溶液.对照液:精密吸取上述供试品溶 液0.1mL,置10mL容量瓶中,加二氯甲烷一甲醇稀释至刻度,制成每1mL中含25/tg的溶液作为对照 品溶液. 用微量注射器吸取上述两种溶液各10L,分别点于同一硅胶H薄层板上,以氯仿:甲醇:三乙胺: 醋酸乙酯(15:10:4:2.5)为展开剂,展开后晾干,置紫外灯(365nm)下检视. (5)影响因素试验.按含量测定项下方法与相关物质检查项下方法分别测定于光照,高温,高湿条件下 放置5d,10d后的诺氟沙星含量与相关物质限度,并与当天制备的诺氟沙星片对照,并目测片剂在各种 条件下的外观,测定了在高湿条件下的片剂的增重. (6)薄层层析对相关物质的检查.分别取当天制备的诺氟沙星片及在光照,60?,湿度75,湿度 92.5各种条件下放置各5d和10d的样品进行相关物质检查. 2结果与讨论 2.1标准曲线 求得吸光度A与浓度C的回归方程为C一8.1576A+0.1337(一6),诺氟沙星浓度在1,8ttg/mL .62.安徽工程科技学院学报2005年 2.3回收率测定结果 平均回收率为100.29,RSD为0.69.结果见表4. 2.4重复性测定结果. 重复性测定结果见表5. 表4回收率实验表5重复性(一6) 2.5固定相和展开剂正交实验结果 固定相和展开剂正交实验结果分别见表6和表7. 表6固定相正交实验结果表7展开剂正交实验结果 固定相正交实验影响因素重要性大小为A>B,A:B2为最佳方案.即用4NaHPO和0.29,6CMC — Na配制的薄层板最佳. 展开剂正交实验影响因素重要性大小为D>A>C>B,A.BC3D为最佳方案.即氯仿:甲醇:三乙 胺:醋酸乙酯(15:10:4:2.5)最佳. 2.6影响因素试验测定结果 影响因素试验测定结果见表8. 2.7薄层色谱检测结果 当天样品无杂质斑点.光照,6O?,湿度75,湿度92.5下5d,10d各种条件下均可见杂质斑点. 第l期方磊:诺氟沙星缓释片的质量标准研究-63? 光照,60?条件下有3个杂质斑点,湿度条件下有1个杂质斑点,分别与对照溶液主斑点比较,颜色均浅 于主斑点,且其杂质总量,按斑点的总面积和荧光强度计,未超过3 表8影响因素实验结果 2.8讨论 (1)TLC法虽然具有简便快捷微量的优点,但影响因素比较多,温度,湿度,硅腔板的厚度等均对其有 影响.本实验中湿度大时,板的活度小,展开速度慢.硅胶板厚,易于斑点集中.不扩散,不拖尾.板薄,分离 度大. (2)因为有降解物质的存在,对照品,供试品溶液均需当天配制. (3)如果不调整板的酸碱性,拖尾均很严重,与杂质不能很好分离.改用NazHPO调整板的酸碱性, 拖尾现象明显改善. 参考文献: [1]范柏,袁雯玮 [2]陈坚.诺氟沙 [3]成瑛,周治国 [4]白政忠,关大 [5]陈珏.诺氟沙 [6]中华人民共承 [7]中华人民共承 Determinationofnorfloxacininitstabletanditsstability FANGLei (Dept.ofBio.Engn..AnhuiUniversityofTechnologyandScience.Wuhu241000,China) Abstract:TodeterminethecontentofNorfloxaeininitstabletbyUVspectrophotometry.theassaywas carriedoutatthewavelengthofmaximumabsorptioninhydrochloricacidsolution(0.1mol/L).The quantificationmethodhadlinearrangeofl, 8btg/mLwithacollelationcoefficientof0.9999.Theaver— agerecoverywasi00.29andRSDwas0.69.TherelevantdegradablesubstancesofNorfloxacintablet weredeterminedbyTLC.Theresultindicatedthattheresolutionbetweenmajorspotandotherspots washigh.AlltheR,valueswereamong0.2,0.8.Influentialfactorexperimentsshowedthatthecon— tenthadobviousdeclineunderillumination,hightemperatureorhighhumidity,SOitshouldbepre— servedawayfromheatandlight. Keywords:Norfloxaeintablet;UVspetrophotometry;TLC;degradable;substances