【word】 寒凝血虚血瘀证贵州小型猪模型的建立

【word】 寒凝血虚血瘀证贵州小型猪模型的建立 寒凝血虚血瘀证贵州小型猪模型的建立 第33卷第5期贵阳中医学院No.5Vo1.33 2011年9月JGCTCMSeptember2011?15? 与空白组比较,为P<0.05;一为P<O.01;与模型组比较,为P<0.05,’为P<O.01. 3结论 经上述对动物实验性的研究证明:盆炎清灌肠剂具有 明显的抗炎和活血化瘀作用.(未完待续) 参考文献 [1]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社, 寒凝血虚血瘀 2O06:300—301. [2]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫 生出版社,2002:185. [3]谢裕华,陈瑞芬.邓铁涛教授自拟灌肠方治疗颅脑损伤44 例[J].新中医,1999,31(05):28. 证贵州小型猪模型的建立 冯麟,吴大梅.,杨志蓉,杨爱国,冯济风,甘世祥 (1.贵日中医学院,贵州贵阳550002;2.成都中医药大学,四Jl1成都610000) 摘要:目的:以中医基本理论为指导,建立贵州小型猪”血虚寒凝血瘀证”模型,探讨当归四逆汤的治疗作用及”血虚寒 凝血瘀证”的发病机制.方法-将贵州小型猪21头随机分成三组,即空白对照组,血瘀模型组,当归四逆汤治疗组,每组7 头.小型猪前腔静脉第一次采血,采血量为总血量的2.5%(占体重的0.15%),次El将小型猪放入O,1?的冰水中 20min,冰冷刺激一天一次,连续4天.第6天前腔静脉第二次采血,采血量为总血量的2.5%(占体重的O.15%),采血次 El将小型猪放入0,1?的冰水中20min,冰冷刺激一天一次,连续4天.观察动物的体征变化;检测血常规,血液流变学, 凝血功能,微循环,超氧化物歧化酶(SOB),血栓素B:(TXB2)和6一酮一前列环素Fl0(6一KeT0一PGF).结果:模型组 动物与对照组动物比较,袁现出明显的血瘀体征(如后肢,臀部红肿青紫,耳唇部青紫,舌青紫,紫暗,脉涩或结代).红细 胞(RBC),血红蛋白(rib)减少(P<<0.001),白细胞(WBC)增加(P<0.05),血小板(PLT)增加(P<0.01),血液粘度和 红细胞压积(HCT)增高(P<0.05,0.001),凝血酶原时间(PT),凝血酶时间(1Tr),激活部分凝血激酶时间(Aerr)延长(P <0.05,O.oo1),纤维蛋白原(Fbg)增加(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)和血栓素B2(TXB2)增加(P<0.05,0.oo1), 6一酮一前列环素F1(6一KeT0一PGFl)稍增加(P>0.05),微循环障碍.脏器组织切片镜检结果明模型组动物肺脏, 肝脏,心脏等水肿,出血,瘀血.治疗组动物与模型组动物比较,红细胞(RBC),血红蛋白(Hb)增加(P<0.05),白细胞 (WBC),血小板(PLT)增加(P<0.05),血液粘度和红细胞压积(HCT)降低(P<0.05),凝血酶原时间(PT),凝血酶时间 (Tr)缩短(P<0.05,0.001),纤维蛋白原(Fbg)降低(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和血栓素B2(TXB:)减少(P< O.05),6一酮一前列环素Fl(6一KeTo—PGFl.)稍降低(P>0.05).微循环障碍得到改善,脏器组织病理改变得到减轻. 结论:失血和冰冷刺激并用可成功复制出”血虚寒凝血瘀证”贵州小型猪模型,符合中医病因病机基本理论和中医证候特 点.当归四逆汤可改善血虚寒凝血瘀证贵州小型猪模型的症状,体征及病理变化.贵州小型猪”血虚寒凝血瘀证模型”是 中医舌诊,脉诊及”证”本质研究理想的人类疾病动物模型. ‘基金项目:贵州省科学技术资助项目:黔科通[(2005)85号] 收稿El期::2011—01—04 ? 16?贵阳中医学院第33卷 关键词:血虚;寒凝;血瘀证;贵州小型猪;动物模型 Doi:10.3969/j.issn.1002—1108.2011.05.08 中图分类号:R一332文献标识码:A文章编号:1002—1108(2011)05—0015—05 血瘀证和活血化瘀法,是祖国医学理论和实践中很重 要的一个组成部分,切合中医理论的动物模型是血瘀证本 质,活血化瘀治法和药效学研究评价的关键.为进一步探 讨血瘀和活血化瘀的理论,深化”血瘀”动物模型的研究, 用贵州小型猪研制中医血虚寒凝血瘀证模型,以达到病理 变化与人类相似,耐受力强,稳定性好,利于动态观察等目 的,创制出更切合中医血瘀证经典概念的,特异性更强,更 符合临床发病机理,更有效经济,重复率高的动物模型,为 中医血瘀证的基础及临床研究和中药药理实验研究提供 理想的动物模型,进而为开发治疗血瘀病证的新药提供必 要条件. 1材料 1.I实验动物贵州小型猪(简称小型猪)2l头,雌雄各 半,体重14kg左右,由贵阳中医学院实验动物研究所提供. 1.2主要仪器及设备见(表1) 表1主要仪器及设备 数码相机SONYDSC一$85 ZM—IIIC型智能化中医脉 象仪 B系列生物显微镜微循环观 测仪 LBY—N6A自动清洗旋转式粘 度计 CSF一820型全自动细胞学计 数分析仪 电热恒温鼓风干燥箱 电热恒温水温箱 721分光光度计 LD4—2A离心机 显微镜 台秤 低温冰箱 电子秤 上海中医大科技发展公司 NO3502/981209麦克奥迪实业 集团有限公司 北京普利生有限公司 日本光电公司 上海跃进医疗器械厂 上海医疗器械七厂 上海第三分析仪厂 北京医用离心机厂 日本奥林匹斯山公司 湘南仪器仪表总厂 Madeinlta.1y 湘南仪器仪表总厂 外科手术器械(手术刀,手术剪,镊子,止血钳,量杯, 量筒,开口器,胃管,50ml及2Oral注射器及针头,棉球,棉 签,试管,试管架);冰块;秒表;纱布;手套;体温计;血清 瓶;滴定管;吸咀等. 1.3试剂(1)超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒:南京建成 生物工程研究所提供;(2)血栓素B(TXB:)试剂盒:北京 东亚生物技术研究所提供;(3)6,酮一前列环素F.(6, KeT0一PGF.)试剂盒:北京东亚生物技术研究所提供. (4)0.9%生理盐水(贵州科伦药业有限公司,批号: B050315—05);(5)肝素钠(上海第一生化药业公司,批号: 050102);(6)3.8%枸橼酸钠;酒精;碘酒;3%戊巴比妥钠; 甲醛. 1.4实验用药当归四逆汤:当归12g,桂枝9g,白芍9g, 细辛3g,木通6g,甘草6g,大枣8枚,共七睐药加蒸馏水 500ml煎煮成25%的药液(1ml含0.4g生药)(购于百合中 西医药房),放入冰箱保存备用. 2方法 2.1实验动物分组将小型猪随机分为三组,每组7只, 分为正常对照组(简称对照组),血瘀模型组(简称模型组) 及当归四逆汤治疗组(简称治疗组). 2.2模型复制方法及治疗小型猪前腔静脉第一次采 血,采血量为总血量的2.5%(占体重的0.15%),次日将 小型猪放入0一lcIC的冰水中20min,冰冷刺激一天一次,连 续4天.第6天前腔静脉第二次采血,采血量为总血量的 2.5%(占体重的0.15%),采血次日将小型猪放入0,1? 的冰水中20rain,冰冷刺激一天一次,连续4天.从造模第 一 天,治疗组给予当归四逆汤灌胃(10ml/kg体重),对照 组,模型组分别给予0.9%生理盐水灌胃(10ml/kg体重), 每天一次,连续10天. 2.3观测指标 2.3.1体征观察观察实验中小型猪精神活动状况,饮食 及饮水量,二便,皮毛,鼻的燥湿,体温及死亡情况. 2.3.2血常规检验造模结束后每只小型猪前腔静脉采 血送检(贵阳中医学院第一附属医院中心实验室). 2.3.3血液流变学测定造模结束后每只小型猪前腔静 脉采血2ml送检(贵阳中医学院第一附属医院中心实验 室) 2.3.4凝血象检验凝血酶时间(Tr),凝血酶原时间 (r-r),血浆纤维蛋白原(Fbg):造模后每只小型猪前腔静 脉采血2ml送检(贵阳中医学院第一附属医院中心实验 室). 2.3.5过氧化物歧化酶(SOD),血栓素B(TXB),6一酮 一 前列环素F(6一KeT0一PGF.)的测定:按照试剂盒说 明书进行操作. 2.3.6病理解剖组织学的观察(1)病理解剖检验:观察 心,肝,肺等脏器的病理解剖改变.(2)病理组织学检验: 取心,肝,肺,用10%甲醛固定,常规石腊包埋,组织切片, HE染色后作显微镜观察. 第5期冯麟,吴大梅,杨志蓉等.寒凝血虚血瘀证贵州小型猪模型的建立?17? 2.3.7舌象观察观察实验中小型猪舌象的改变,包括舌3统计学方法 色,舌苔,舌形及湿润度. 2.3.8脉象观测用脉象仪观察各组小型猪尾中动脉脉 象变化. 2.3.9肠系膜微循环观察实验结束时剖开小型猪腹腔, 用显微微循环观测仪观察各组动物肠系膜微循环变化. 采用SPSS13.0统计软件处理数据,计量数据采用(X ?s)表示,组间比较采用t检验;计数资料采用X:检验.P <0.05表示具有统计学意义. 3实验结果 3.1贵州小型猪的体征观察见(表2,表3). 表2各组小型猪体征观察表 表3各组小型猪实验前后体温 变化比较表(n=7,一X?S) 注:与实验前比较:’P<O.O5,P<O.001;与模型组比较:. P>O.05,..P<O. 001;与对照组比较:0P>O.05. 3.2各组小型猪血常规的变化模型组与对照组相比, 红细胞(RBC),血红蛋白(Hb)均减少(P<0.001),白细胞 (wBc)增加(P<0.05),血小板(PLT)明显增加(P< 0.01);治疗组与模型组相比,红细胞(RBC),血红蛋白 (Hb)有所升高(P<0.05),血小板(PLT)降低(P<0.05), 白细胞减少(P<0.05);治疗组与对照组相比,红细胞 (RBC),血红蛋白(Hb),白细胞(WBC),血小板(PLT)均 无显着性差异(P>0.05).(见表4) 表4各组小型猪血常规的变化比较表(?s】 注:模型组与对照组比较:P<O.05,P<0.01,P<0.001;治疗组与模型组比较:P<O.05;治疗组与对照组比较:.P>0.05. 3.3各组小型猪血液流变学的变化(见表4,表5)模型组 与对照组相比,全血低切粘度(Ls),全血高切粘度(HS), 毛细管血浆粘度(PV)升高(P<0.05),全血中切粘度 (MS)升高(P<0.01),红细胞压积(HCT)升高(P<0. 001);治疗组与模型组相比,全血粘度和毛细管血浆粘度 (PV)降低(P<0.05),红细胞压积(HCT)下降(P< 0.001);治疗组与对照组相比,全血粘度,血浆粘度(PV), 红细胞压积(HCT)均无显着性差异(P>O.05). 表5各组小型猪全血粘度的变化比较表(?S) 注:模型组与对照组比较:AAp<O.01,t,p<O.05;治疗组与模型组比较:Ap<O.05;治疗组与对照组比较:P>O.05. ? l8?贵阳中医学院第33卷 注:模型组与对照组比较:?P<O.001,P<O,05;治疗组与模型组比较:’P<O.001,P<O.05;治疗组与对照组比较:P>0.05. 3.4各组小型猪凝血象的变化(见表6) 模型组与对照组相比,凝血酶原时间()延长(P< 0.001),凝血酶时间(1_r)延长(P<0.01),纤维蛋白原 (Fbg)升高(P<0.o1);治疗组与模型组相比,凝血酶原时 间()缩短(P<0.001),凝血酶时间(rr)缩短(P< 0.05),纤维蛋白原(Fbg)降低(P<O.05);治疗组与对照组 相比,凝血酶原时间(PT),凝血酶时间(1-r),纤维蛋白原 (Fbg)均无显着性差异(P>0.05). 表7各组小型猪凝血象的变化比较表(X?S) 注:模型组与对照组比较:??P<0.001,P<0.01;治疗组与模型组比较:P<0.001,P(0.05;治疗组与对照组比较:P> 0.05. 3.5各组小型猪超氧化物歧化酶(SOD),血栓素B: (TXB),6一酮一前列环素F1(6一KeTo—PGF.)的变化 (见表7) 模型组与对照组相比,超氧化物歧化酶(SOD)增加(P <0.05),血栓素B2(TXB2)增加(P<0.05),6一酮一前列 环素F(6一KeTo—PGF)稍增加(P>0.05);治疗组与模 型组相比,超氧化物歧化酶(SOD),血栓索B(TXB)减少 (P<0.05),6一酮一前列环素FI(6一KeTo—PGFl)含量 稍降低,无显着性差异(P>0.05);治疗组与对照组相比, 超氧化物歧化酶(SOD),血栓索B(TXB:),6一酮一前列 环素F(6一KeTo—PGF,)均无显着性差异(P>0.05). 表8各组小型猪SOD,TXB,6一KeTo—PGF的变化比较表(X?SJ 注:模型组与对照组比较:Zxp<0.05,p>0.05;治疗组与模型组比较:P<O.05,P>O.05;治疗组与对照组比较:.P>O.05. 3.6病理解剖组织学的改变?病理解剖观察:对照组 和治疗组小型猪心肝肺等脏器正常,模型组小型猪可见 心,肝,肺等脏器有不同程度的肿胀,瘀血和出血.?病理 组织学观察:光镜下可见对照组小型猪肺,心,肝结构正 常.模型组小型猪可见心肌细胞变性,心肌瘀血,心肌问 质水肿,心外膜水肿,心外膜炎细胞浸润;肺充血,出血,支 气管粘膜变性,坏死,脱落,问质性肺炎;肝细胞水变性,气 球性变性和液化坏死,肝瘀血.治疗组小型猪心,肝,肺等 脏器仅有轻微肿胀,无瘀血和出血. 3.7舌象观察对照组和治疗组的小型猪舌色淡红,苔 薄白,舌形态无异常,活动自如,舌面燥湿适中.模型组可 见舌色青紫,或黑,或绛,晦暗,苔薄白,舌形有裂痕且舌胖 大.舌态强硬,短缩等. 3.8脉象观测对照组和治疗组的脉象主要为促脉.模 型组的有结,代,涩脉和细脉.促脉的脉图特征主要有脉 率快,脉波周期短,类似数脉;但与数脉不同的是有不规律 的歇止.涩脉的脉图特征主要有脉波曲线的幅度低平,上 升和下降的速度都很缓慢,并可出现顿挫;结脉的脉图特 征主要有脉搏有不规律的歇止,脉率缓慢,脉波周期类似 常脉或长于常脉;代脉的脉图特征主要有脉搏的歇止十分 规律,到一定的至数,就歇止一次,而且歇止的时间较长. 3.9肠系膜微循环观察观察到对照组和治疗组小型猪 肠系膜微小动脉口径正常,血流速度快,微小静脉口径正 常,流速快,毛细血管开放数目正常,未见血细胞凝集.模 第33卷第5期 2011年9月 贵阳中医学院 JGC1’CM No.5Vo1.33 September2011?19? 型组小型猪肠系膜有明显的微循环血流变慢,微小静脉扩 张,血细胞聚集程度增高以及微血管周围的渗出,毛细血 管开放数目明显减少. 4讨论 用失血和冰冷刺激的方法可成功复制血虚寒凝血瘀 证动物模型.本模型以中医基础理论为指导,复制方法尽 量和人体自然发病原因相似,符合中医病因病机理论,其 病因病机与临床较为相似,较以往采用单一的因素造成的 血瘀证更能接近血瘀证的发病过程,与用药,手术方法建 立的模型相比,没有化学药品对人体的毒害作用和没有手 术创伤的损害,亦更接近于临床,方法简单容易复制,并可 根据研究的药物不同,调整虚和寒的程度.应用现代先进 的技术仪器,从不同层次,不同角度进行系统研究,具有较 高的重复性和可靠性,具有较强的实用性和较高的科学 性,此外,还应用了中药反证法,可应用研制开发各种 新药. 贵州小型猪反应均衡,可随时采取各种所需量较多的 体液作检测,便于动态观察整个病程变化过程,尤其可观 察”舌象”和”脉象”,是常用动物难以实现的.在小型猪身 上观察到血瘀证的舌象和脉象,充实和验证了血瘀证的基 础理论,血虚寒凝血瘀证小型猪模型的建立,实现了非创 伤性的舌象和脉象诊断.贵州小型猪血虚寒凝血瘀证模 型是中医舌诊,脉诊及”证”本质研究较为理想的实验动物 模型. 当归四逆汤能明显改善大鼠和小型猪的血虚寒凝血 瘀诸证.本研究为开发研制治疗血瘀证新药提供一个最 佳平台,可为我省苗药等民族药研发作一定贡献. 贵阳地区寻常型银屑病患者生活 质量指数的调查研究术 贾敏,黄莉宁,贺爱娟,唐挺 (贵阳中医学院第一附属医院皮肤科,贵州贵阳550002) 摘要:目的:探讨贵阳地区寻常型银屑病对患者生活质量的影响,以及其与年龄,性别,婚姻,病程,职业,文化程度,皮 损面积和每月治疗费用之间的关系.方法:采用Finlay等提出的皮肤病生活质量指数(DLQI)对寻常型银屑病患者在生 理,心理,日常活动,穿衣,社交娱乐,运动,工作学习,家庭,性生活,治疗等10个方面生活质量进行评价.结果:贵阳地区 寻常型银屑病明显影响该病患者的生活质量.结论:评价和治疗该病时应考虑到患者的自身感受及性别等因素的影响. 关键词:贵阳地区;寻常型银屑病;DLQI;调查 Doi:10.3969/j.issn.1002—1108.2011.O5.O9 中图分类号:R758.63文献标识码:B文章编号:1002—1108(2011)05—0019—03 长期以来,疾病防治的评价多采用发病率,病死率,生 存率等概念;痊愈,好转,无效等评价指标在测量个体和人 群的健康状况方面起了很大的作用,但是,随着社会的发 展,人们对健康需求的提高,上述健康测量指标已经不能 完全表达健康的全部内涵.人们不仅仅注重生命的数量 及生存时间的长短,也注重生命的质量.WHO对健康的 解释是:”健康不仅仅是没有疾病和病痛,而且还包括身 体,心理和社会方面的完好状态”,在此强调了心理及社会 行为功能的重要性J. 皮肤科医生主要根据患者的临床症状对银屑病进行 临床评价,从而确定治疗.但是,由于银屑病多发病 机理不明,易反复发作,对患者的生理,心理和社会交往等 方面都产生不同程度的影响.按照生物一心理一社会医 学模式,对疾病的评价和治疗应该考虑到患者本人的切身 感受,通过对患者生活质量的测量,可以使医生更好了解 疾病对患者产生的影响,从而对疾病作出全面正确的评 价.此外,已有研究表明银屑病对患者的生理,心理,社会 生活都有不同程度的影响,使患者的生活质量降低口J,但 尚不清楚贵阳地区银屑病患者生活质量状况. 为了解贵阳地区寻常型银屑病患者与健康有关的生 活质量状况,根据我国城乡居民实际情况我们参照Fin- lay等提出的皮肤病生活质量指数问卷(DLQI),采用问 卷方法对银屑病患者的生活质量进行调查.笔者于2008 年1月,2008年12月,采用DLQI问卷对贵阳地区的351 ‘基金项目:贵州省中医药管理局2007年科研项目立项资助课题 收稿日期:2010—11—25