调节T细胞

调节T细胞 我们的目的是确定是否数字的CD 4 ~ +CD 25 +[监管 (T)]细胞和基因达的调节性T细胞的功能分子 有关的呼吸道过敏和疾病的严重程度在51个儿科患者 过敏性鼻炎和支气管哮喘和健康对照组47。表面标志 评价流式细胞仪，并决心与实时 聚合酶链反应。儿童过敏性疾病较少 CD 4+CD 25 +细胞(8??41%与949%258%243%??，?<0和05) CD 4+cd25hi细胞(1??68%与132%070%0??68%，<0?01)比 控制科目。数，CD 4 + CD 25+、CD 4 +cd25hi淋巴细胞 较高的儿童持续性过敏性鼻炎和/或中度– 严重的支气管哮喘比那些各自的温和疾病。本 调节性T细胞数量呈正相关的总免疫球蛋白 水平的。基因表达的叉头框小三(Foxp 3)增加 在中度–重度与轻度哮喘(2??38与193060031??， <0?01)。患者的中度–重症支气管哮喘也有增加 基因表达的白细胞介素(一)- 10的患者相比，轻度 哮喘(15??07与3244772??18，<0?01)。抑制功能 调节性T细胞综合征患者更严重的哮喘是主管体外。论 平均，减少数量的T细胞在儿童过敏性气道 疾病可能是一个缺陷的调节性T细胞的人口与表达的增加。 Foxp 3和IL - 10细胞从患者相对严重过敏 病，适应性和功能性T细胞可能产生的反应加重 过敏和疾病的严重性。 过敏性疾病的慢性炎症性疾病的特点 由一个异常的免疫反应无害 环境抗原。他们是由过度生产 大肠杆菌的免疫球蛋白(抗体)对特定过敏原 (原宣传)，如屋尘螨，和 可导致的疾病，包括哮喘，过敏(学士) 鼻炎(受体)和特应性皮炎(广告)[ 1]。分化 CD 4+细胞效应产生Th 2(Th 2)剖面的细胞因子，如白细胞介素(一)- 4，IL - 5， 白细胞介素- 9和13，是最初的事件和关键因素的 发展的过敏反应[ 1 , 2]。触发 免疫反应的过敏原特异性抗体的方法 表面的肥大细胞和嗜碱性粒细胞可导致立即 症状由于释放组胺和其他调解员， 虽然嗜酸性粒细胞性气道炎症有助于 鼻部症状和/或气道高反应性 患者过敏性鼻炎和支气管哮喘[ 1]。持续的 气道炎症和重塑被认为 依据慢性功能性与病理性异常， 以及间歇性发作的临床表现， 过敏性鼻炎和支气管哮喘[ 3]。 作为一个小部分约5–的CD 4 ~ +10% 细胞在添加动物和人类健康， CD 4 + CD 25+调节性T细胞(调节性T细胞)发挥关键作用， 防止器官特异性自身免疫和移植排斥反应 和保持自我容忍[ 4]。这些细胞 表达组成型高水平的一个链的白细胞介素 (一)-2受体(CD 25)和生产 胸腺作为一个功能的成熟细胞 (自然发生的细胞，或ntreg)。调节性T细胞表达的完全 该forkhead-winged螺旋转录因子基因， Foxp 3(叉头框小三)，这似乎是一个大师 基因控制的发展这些细胞–[57]。本 收购监管表型和抑制功能 取决于表达Foxp 3[ 7]。异位表达 Foxp 3在非监管CD 4 + CD 25–细胞转换 在T细胞获得监管职能–[59]。 其他子细胞，称为自适应或诱导调节性T细胞，有 也被称为。这些主要是细胞的人口 诱导体外或体内操纵[11]。自适应 或诱导调节性T细胞在确定过敏性反应的代表 通过CD 4 + CD 25+Foxp 3+细胞产生的天真的传统 CD 4 ~ +细胞(CD 4 + CD 25–Foxp 3–细胞)后 多克隆抗体或抗原特异性刺激[ 12 , 13 ]。所有的标准 这些测量，自适应或诱导调节性T细胞的区分 从天然调节性T细胞[8,13]。 作用调节性T细胞在发病中的过敏性疾病和 过敏没有界定，直到最近。患者谁具体 CD 4 +CD 25 + T细胞缺乏(如那些与免疫失调， 内分泌病，肠病或X -连锁综合征，一 综合征的基因突变造成的Foxp 3)发展严重 湿疹，水平升高，嗜酸性粒细胞增多和食物过敏 [ 14]。调节性T细胞可能阻碍过渡从早期活化 阶段分化的Th 2(Th 2)状态，限制气道 变应性炎症和行为，防止不适当的Th 2 反应环境过敏原[ 15 , 16]。几个独立 线的证据表明，数量或功能 调节性T细胞受损或改变患者的过敏 与健康人相比–[1722]。然而，数据 有关的作用，调节性T细胞在发病机制中的儿科 过敏性疾病是罕见的。 该机制的免疫调节的 调节性T细胞介导的影响其他细胞的活化是一个 积极调查领域和持续的争论和 可能涉及的频谱管理的作用在一些疾病 国家。建议机制包括一个必不可少的作用 细胞因子，细胞–细胞相互作用，修改抗原提呈 细胞的T细胞和幼稚的竞争 细胞特异性的抗原粘附 抗原提呈细胞[23]。候选分子 负责免疫抑制功能的T细胞 包括抑制细胞因子IL - 10和转化生长 因子(因子)-乙，那些对家族与细胞毒性 淋巴细胞相关抗原4(抗原- 4，负 共刺激分子)和糖皮质激素诱导 肿瘤坏死因子受体(抗体)和家庭 相关信号转导。虽然激活CD 4+ 效应细胞也表达抗体和抗原，高度 构水平的这些分子在调节性T细胞使他们 功能相关的T[ 25 , 26 ]。 我们的目的是调查的作用，调节性T细胞在发病机制 小儿过敏性疾病关系的探讨 其中Foxp 3表达，CD 25的表达和调节性T细胞 人口在变应性炎症。我们试图 确定是否数字的T细胞和基因 分子表达的功能相关的CD 4 ~ +T 细胞与过敏性地位和/或疾病的严重性 在儿科患者的过敏性鼻炎或哮喘 哮喘。 研究组 我们招收51儿童过敏性气道疾病，包括 过敏性鼻炎27和24与支气管哮喘。 我们还招收47例，健康对照组 无过敏。表1显示了受试者的人口 特征和药物治疗的历史。 过敏性鼻炎的诊断如果IgE介导 反应引起的鼻痒，打喷嚏流鼻水，水 鼻后的刚度和/或过敏原的敏感性，如 证实了存在抗体的特异性过敏原 在病人的血清。间歇性过敏性鼻炎 定义为症状发生在少于4天 周和4周以内。如果症状比较 多于，过敏性鼻炎被列为持久 [ 27]。鼻炎患者感染和/或炎症， 职业，药物，激素或其他过敏 原因被排除。患者的合并症 哮喘，鼻窦炎，中耳炎或结构异常 也排除了。 支气管哮喘诊断IgE介导的慢性 气道炎症和气道高反应性 导致反复发作的呼气喘息， 呼吸困难，干咳嗽、胸闷，特别 在夜晚或清晨[ 28]。过敏原 宣传是记录在案的存在血清 过敏原特异性抗体。标准化的肺功能 试验是在所有哮喘患者使用 肺活量测量用力呼气容积1 秒(秒钟)。气道高反应性的评价 管理的挑战 吸入甲，如前所述的[ 29]。本 哮喘的严重程度分为轻度间歇性，轻度 持续性，中度持续或严重的持久性[ 28]。我们 分为2组:哮喘患者轻度组 (轻度间歇性+轻度持续性)和温和的–严重 组(中度持续性+严重持续性)。患者 呼吸条件哮喘相似，如细菌 或病毒感染，解剖异常外 体，被排除。慢性鼻炎患者和/或 鼻窦炎或胃食管反流，两者合并症 与过敏性鼻炎，也排除了。 收集血液样本从受试者在 访问门诊和/或当他们 住院治疗的症状加重。明智的 同意获得了所有科目的父母或监护人， 并获得批准的机构审查 董事会。 抗体 下面的人类单克隆抗体细胞表面 分子(流式细胞仪immunocytometry购买 系统，圣若泽，加利福尼亚州，美国):荧光 isothiocyanate-conjugatedCD 25，phycoerythrinconjugated anti-cd69藻红蛋白结合，反— cd122甲藻素，叶绿素蛋白质结合抗CD4， 异硫氰酸荧光素结合小鼠免疫球蛋白 1同型控制，藻红蛋白结合鼠标 免疫球蛋白诱导同型控制和甲藻素叶绿素 蛋白质结合小鼠免疫球蛋白同种G 控制。 流式细胞仪分析 荧光共轭单克隆抗体组 被用来染色细胞表面标记的最佳条件。 对单克隆抗体的浓度和孵育 期间建立的建议 制造商。总之，一个50毫升等分，全血 培养与荧光共轭单克隆 抗体在室温下在黑暗的30分钟。 这是培养50毫升的激活 细胞裂解液(流式细胞仪immunocytometry 系统)为15分钟，洗了两次2毫升 磷酸盐缓冲液含0?1%牛血清 白蛋白和固定的1%甲醛。 fluorocytometry进行流式细胞仪 (流式细胞;流式细胞仪immunocytometry 系统)配备488纳米蓝激光和635-nm 红色激光二极管的多色荧光，除了 forward-scatter和散射测量。激光和 光电倍增管的参数保持不变的所有 实验。所有fluorocytometric随后数据 分析和图形显示使用cellquest专业软件 (公司狄金森immunocytometry系统)。在 每一个分析，我们衡量一个至少20- 000细胞。 制备外周血单个核细胞 肝素静脉全血从每个捐助者 在一个ficoll-plaque密度梯度(膜 溴酚蓝，州，新泽西州，美国)和离心 30分钟，在室温500克。该层 外周血单个核细胞收集， 清洗悬浮在汉克斯平衡盐溶液 (gibco-brl生命技术，希望，医学博士，美国)。 细胞存活率大于95%，所确定的执行 一台盼蓝染色法在光 显微镜。 分离的CD 4 ~ +细胞 人外周血单个核细胞离心 10分钟，在室温和重500克 在RPMI介质(biowhittaker股份有限公司， 沃克斯维尔，医学博士，美国)含有10%热灭活 胎牛血清，40毫摩尔/升谷氨酰胺，100单位/毫升青霉素， 100单位/毫升链霉素和20毫摩尔/升复缓冲溶液 (gibco-brl生命技术)。CD 4 ~ +细胞进行纯化 通过与免疫磁珠阴性选择 珠(所消耗的时间+，CD 8 +，CD 16 +，CD 19 +，CD 36+ 和CD 56+细胞)由使用人淋巴细胞分离 套件(美天旎，门兴，德国)。开始 1–2?107外周血单个核细胞，我们通常 孤立的4?5–5?0?106CD 4 ~ +细胞，与CD 4 ~ +细胞纯度 超过90%。所有的步骤进行的根据 制造商的指示。 中提取核糖核酸，基因合成，第一 实时定量聚合酶链反应(聚合酶链反应) 总RNA提取使用一个分离试剂盒 (genestrips;rnature，尔湾，加州，美国)根据 制造商的协议。总之，孤立子细胞 放入40毫升的裂解液，转移到杂交 管，动摇了60–90分钟和最后冲洗 100毫升的洗涤缓冲液。下一步，50–500毫微克的表达 反转录在一个50毫升反应体积含 CD 4 ~ +调节性T细胞在气道过敏 ?2007英国免疫学会，中华实验和临床病毒学杂志，148 :53–6355 引物(引物;随机，麦迪逊，威斯康星州，美国)， 逆转录酶(上标?;公司股份有限公司， 卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国)和核糖核酸酶抑制剂(rnaseout; 公司)在同一杂交管。引物和 用探针实时聚合酶链反应FoxP 3，IL - 10，转化生长因子-， 抗体和抗原(assays-on-demand购买 基因表达产物;应用生物系统，促进市， 加利福尼亚州，美国)和甘油三磷酸脱氢酶 (型)作为一种内源性控制。 自动检测中英百度 翻译结果(英 > 中)复制结果 结果 特点的研究参与者 如表1所示，研究组中的所有组 年龄和性别相匹配。患者的中度–严重 支气管哮喘有一个相对较高的使用吸入 和/或口服类固醇和b-agonists。肺功能结果 %FE V1和血清总IgE水平显着不同 在支气管哮喘组。患者持续 过敏性鼻炎血清总IgE值显着 高于患者间歇性过敏 鼻炎。 数，CD 4 + CD 25+、CD 4 +细胞在所有cd25hi 患者的过敏性气道疾病 CD 4+cd25hi细胞CD 4 ~ +细胞亚群与高或 明亮的CD 25表面表达和相应地确定了 [ 30]。 儿童过敏性气道疾病有显着 数目减少，CD 4 + CD 25+淋巴细胞 与对照组相比(8?49%?41%与2 9?58%2?43%，<0?05)(图1)。数字的 CD 4+cd25hi细胞也明显降低 患者与对照组相比(1??68%32%0 与1?70%0?68%，<0?01)(图1 B)。 数字的T细胞在气道过敏反应不同 严重程度 儿童持续性过敏性鼻炎有更多的 调节性T细胞比患者间歇性过敏 鼻炎(9??7%与652%251%1??11%，<0?001) (图1)。同样，儿童中重度支气管– 哮喘有更比轻度患者调节性T淋巴细胞 支气管哮喘(10??12%与776%240%164%??， 0?=01)(图1)。 讨论 儿科患者气道过敏了，平均显着， 数目减少，CD 4 + CD 25 +细胞 CD 4+cd25hi细胞。患者更严重的呼吸道过敏 疾病有更多的CD 4 ~ +CD 25 +细胞、CD 4 +cd25hi细胞 相比，患者不太严重的疾病。数字的 CD 4+CD 25 +是呈正相关，与血清总 抗体水平。支气管哮喘患者更严重 疾病有较高的基因表达Foxp 3和IL - 10 比温和疾病患者。抑制增殖 CD 4+ CD 25–细胞通过CD 4 +CD 25 +细胞 患者更严重的哮喘功能主管 在体外。 频率的T细胞在外周血CD 4 ~ +细胞 已成为一个重要的参数描述 人口的T细胞[ 4]。的频率的T 细胞在患者外周血过敏是不一致的 (表2)[17，22]–。这些不同的观察 频率可能与患者的年龄和疾病 现状。然而，之间的关系的一些细胞 细胞和疾病的严重性并没有被强调。我们的 知识，只有石等。报告说，数字的T细胞 增加哮喘恶化[ 20]。这 结果是一致的结果。 疾病的严重程度是与水平的提高 CD 25和cd25hi细胞，与水平几乎相等， 健康受试者(图1)。这种看法似乎是矛盾的 协商一致的，有缺陷的T细胞相关 发病的过敏。我们的研究结果还显示 那一些T细胞与特应性 状态，所确定的测量血清总IgE值，一个 现象并不观察正常人(图3)。我们 推测最初的T细胞fromsubjects相对 严重的疾病包含更少的调节性T细胞和激活效应 细胞在变应性炎症，如最近激活 效应细胞也表达CD 25。我们确认的特点 调节性T细胞CD 69表达低水平的调查 和中等水平的cd122表达T细胞 从患者相对严重的呼吸道过敏。cd122 表达的大约85%的CD 4 ~ +细胞cd25hi， 作为标记为T[ 30]。