不同抑制剂对整肠生菌增殖影响的研究

不同抑制剂对整肠生菌增殖影响的研究第16卷第4期.16.4重庆师范学院(自然科学版)JoL廿o姆qiI茸1cheG瑚(Nm蚰Sci~i’eEdifort)1999年l2月Deel9990不同抑制剂对整肠生茵增殖影响的研究刘天贵.胡尚勘(重庆师l函4o0047)Q7,Jz/R7』羹:蔓坠堕堕健霉季,4霉褂中田分类号:Q939.12文献标识码:A文章编号:1001—89O5(i999)o4一OO44—04随着对人体正常菌群的研究不断深入,微生态学的崛起徽生态及其制剂已成为人们瞩目和关注的生命科学的新领域,特别是微生态制剂的研究从30年代日本日黑氏的表飞鸣(双歧杆菌活菌剂)用于治疗腹泻,提出1占菌制剂整肠疗法以来,陆续出现了多种活菌制剂,如”乳酶生”,”促菌生”,三株口服液”以及双叉乳制剂.在正常情况下,人体内的微生物与宿主间,微生物之间组成了一个微妙和协调的整体,相互依存,相互铺约,并在各种因素的影响下,维持着动态平衡和共生生活,构成了生态平衡.这平衡并非静止的,它绐终是一个动态平衡.一旦条件发生变化,就会出现失衡.整肠生菌剂有调节微生态平衡,治疗肠炎,腹泻等多种作用,它的消长受到多种因素的影响.本研究旨在探讨部分抑翩剂对整肠生菌增殖的影响,为更好地利用该菌剂及其在治疗作用与机制方面的研究提供科学依据.1材料和1.1材料(1)菌种及来源整肠生菌(BaeillusLid~hrais),由重庆师范学院应用微生物研究室提供(该菌种是通过鉴定已正式投人使用的菌种).(2)培养基牛肉青,蛋白胨,lxhC1,琼脂的质量分数分别为0.3%,1%,0.596和2%,pI-I7.水浴锅,超静工作台以及玻璃器皿等.1.2方法(1)缓冲液的配制(pH6.0的磷酸缓冲液的配制):准确称取KI-hPO44.0g和KI-~)41.0g于500mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,115”C灭菌10证n.(2)各种浓度抗菌素抑制剂的配制:精确称取0.25g和0.05g链霉素(无菌操作)分别用p}.0的无菌磷酸缓冲液定容于两个25mL容量瓶中,即得l0g/L和2g/L的链霉素液各25rr然后再分别用磷酸缓冲液稀释成为0.2g/0.3g/L0.5g/lg/2g/k3g/Ln4g/L,5g/L,6g/7g/L和0.05g/L,0.07g/0.09g/L,0.1g/0.15g/L.用同样方法把青霉素,头孢唑啉钠配成同样质量浓度.同样将苯酚配成0.1%,0.5%,1.0%,2.0%,3.0%,4.0%的不同体积分数.(3)将牛肉膏蛋白胨培养基配成pH值为4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,等7种不同的固体和液体培养基,121?菌30rain后冷到45?时,分别加人上述青霉素,链霉素,头孢唑啉钠各l5种质量浓度和苯酚5种体积分数共计700种处理.(4)接种培养在700种处理的培养基中分别接种1.1×l个菌体,混匀后,固体倒平板培养,液体试管培养,卵?培养24h,然后观察计算菌数】.(5)分析测试方法固体平板培养和试管液体培养后,用光电菌落计数器平板菌落计数法计算浯苗数和用显微镜直接计数法计数总菌数.2结果分析(1)不同抑制剂在固体琼脂平板上对菌落增殖的影响,结果见表l,表2.表1不同浓度的抗菌素对整肠生菌在平板上增殖的影响7.0重庆师范学院(自然科学版)弟16卷表2不同体积分数苯酚对整肠生菌在平板上增殖的影响DH7.0从表1,表2可以看出,当链霉素质量浓度在O.5g/L或以上时,整肠生菌已经被抑铜不能增殖(看不见菌落)了,而青霉素质量浓度在O.5g/L时无作用.当青霉素在1g/L或以上时,即能抑制该菌增殖.头孢唑啉钠在0.5g/L或以上时,也能抑制该菌增殖.苯酚在0.4%以下均无抑制作用.(2)不同浓度抑制剂在液体培养基中对整肠生菌增殖的影响,结果见表3,表4.表3不同质量浓度的抗菌素对整肠生菌在液体培养基中增殖的影响pH7.0时,对整肠生菌有抑制作用,没有增殖.而青霉素质量浓度在2a/L或者以上时,对该菌有抑制作用,增长量为零.同样苯酚体积分数在4%以下对该菌无抑制作用.这一结果与固体平板抑制试验相一致.(3)不同抑制在不同pH条件下对整肠生菌增殖的影响,结果见表5.从表5可看出,在州4.5,6.5间,几种抑制剂都有明显作用,说明pH不同时,对抑铜剂的作用有一定影响,但它们之间变化幅度不很大.而在7.5以上会减弱抑制作用,这可能是由于几种抑制剂在较高和较低pH条件下不太稳定的原故.而在pH7.0以下时,可能是l??第4期刊无贵莓:不同抑制刺对整肠生苗增殖影响的研究47由于该菌代谢产物中有一种偏碱的物质可使oH略有升高,此时如果培养基本身pH在70以下,抑制仍有作用.但如果培养基本身pH过高就会造成抑制剂作用减弱.表5不同抑制剂与不同oH条件下对整肠生菌增殖的影响3结论综上所述,研究结果表明整肠生菌的增殖明显地受到青霉素和头孢唑啉钠的抑制影响,在青霉素质量浓度为lg/L和头孢唑啉钠质量浓度为3g/L以上时对整肠生菌抑制作用明显较大,特别在适合的pH和其他条件下对整肠生菌有明显抑制作用.这对该菌的生产和使用以及治疗机制方面的研究,提供了理论依据.参考文献:[1]郝士海.现代细菌学培养基和生化试剂[M].北京:中国科学技术出版社,1992_.121.[2]周德庆.擞生物学实验手册[M].上海:上海科学技术出版社,1986.572.[3jIv~HAELj,HEz脉】r.Lak~atm’yE~rcisesnM盘dm[M]NewY吐.1977.243,247皿硷EctdInhibi~rVariationsontheGdEacillusUchenifom~sI_IUTian-gzd,HUn孵q(De0t.ofl~dam,,a?蚺ingTeadmsCollege,(1~agqing,400047)Abstract:mpaper?the面?dBacillusLichenifi:xmis?出eit,,hiN~xva6atia~幻.b—rainadeartmdetwandingoftherelatla~ipbetweenBacillusLidj】isandff,e耽ofphysicsand~stry.1l1eshamflaatinhibiti~nGnflaegoshofBacillusLidaenihmlsisobvicuswhenthept-Iis7.O,thedemityof删)h.spis0.5g/kthed甘1sidp廿cill-岫iS1g/Landthedensityofsa’er:ccx~cinis0.5g/L.1l1ispttrhdesasicer~fick~sisforusingtheprel~rationofthein—hibitcrofBadUus”chenifcnnis.Key~ords:BacillusLid1enifctrnis~in}1ibi自;丑口耐h(责任蝙样许文昌)