糖化血红蛋白(HbA1c)测定-标准操作程序

糖化血红蛋白(HbA1c)测定-操作程序 文件编号: 糖化血红蛋白(HbA1c)版本/状态:A/1 三级文件 第2页 共4页 测定标准操作程序 生效日期: 目的:糖化血红蛋白(HbA1c)测定标准。 范围:适用于糖化血红蛋白(HbA1c)测定的标准操作。 职责:生化部检验人员对本规程的实施负责。 规程: 1 测定方法:采用免疫抑制比浊法，定量测定血清中血清糖化血红蛋白(HbA1c)的含量。 2 测定原理 标本中的HbA1c与anti- HbA1c抗体发生反应，形成可溶性的抗原-抗体复合物。因为在HBA1C分子上只有一个特异性的HbA1c抗体的结合位点，所以不能形成凝集反应。过量的抗HbA1c抗体与试剂中的多半抗原反应形成不可溶的抗体-多半抗原复合物，可以通过浊度进行检测，然后在另外一个通道中检测血红蛋白的浓度。 3 标本 3.1标本收集: 毛细血管血及肝素/EDTA抗凝血浆，处理方法见标本准备。 稳定性:15,25? 3天 2-8? 7天 -20? 6月 3.2标本准备: 3.2.1毛细血管血: 使用一次性的毛细血管采取毛细血管血液，将该血液与溶血剂进行1:100倍配比(例如20ul毛细血管血液配比2000ul溶血剂)。小心混匀后使用。当血液从红色变为棕榈色后即可使用(大约1-2分钟)。 溶血后的稳定时间:2-8? 24小时 -20? 6月 再使用前将溶血剂放入室温稳定15分钟。 3.2.2 EDTA/肝素抗凝血: 将抗凝全血混匀避免形成泡沫。取血液10ul，加入溶血剂1000ul。当血液从红色变为棕榈色后即可使用(大约1-2分钟)。 溶血后的稳定时间: 15-25? 4小时 2-8? 24小时 -20? 6个月 再使用前将溶血剂放入室温稳定15分钟。 4 试剂 4.1试剂 来源:ROCHE配套 试剂(详见试剂)。 贮存条件及稳定性:未打开试剂盒:2,8?储存至效期末 R1:打开后机上稳定28天 R2:打开后机上稳定28天 准备:直接使用。 4.2 校准物 文件编号: 糖化血红蛋白(HbA1c)版本/状态:A/1 三级文件 第3页 共4页 测定标准操作程序 生效日期: 来源:ROCHE配套校准物, 符合WHO标准，具体如下: S1:生理盐水 S2:定标液3a-d 贮存条件:15-25? 8小时 2-8? 2天 -20? 3月 定标液复溶后，如果不再使用，应该立即进行冰冻。 准备:打开小瓶的时候要小心，避免损失干粉，准确加入2.0ml蒸馏水或者去离子水。小心混匀，避免形成泡沫，使用前稳定30分钟。 定标频率:A试剂批号更换后 B 由质控结果决定 4.3 质控物 来源:罗氏糖化血红蛋白专用质控品 其它适合的质控品 贮存条件:置2-8?冰箱至有效期。 准备:直接使用。 质控间隔时间及限制:应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。 5 上机操作 见GS200全自动生化仪操作维护保养程序。 6 参考范围 公式1:2.9-4.6% 公式2:4.8-6.0% 公式参见注意事项。 7 性能指标 X本法线性范围为血液0.2g/dl , 定标液的最高浓度，不准确度允许范围?7%， 不精密度CV=4.3%，灵敏度0.2g/dl。 8 注意事项 8.1血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。 8.2仅应用于体外诊断。 8.3 计算公式: 公式1:糖化血红蛋白的浓度以%形式报告。 %HBA1C=HbA1c(g/dl)?Hb(g/dl) × 100 公式2:经DCCT研究与HPLC相关好。 %HBA1C= 0.82 × HbA1c(g/d)?Hb(g/dl) × 100 + 2.76 9抗干扰能力: 9.1标准:回收率在90,,110,之间。 9.2黄疸:黄胆指数达到50时不会有明显干扰。(直接和间接胆红素浓度约为50mg/dl) 9.3乳糜:乳糜指数达到800时不会有明显干扰。(血红素浓度约300mg/dl) 9.4 RF<750IU/ml，Vc<50mg/dl时不会有干扰。 文件编号: 糖化血红蛋白(HbA1c)版本/状态:A/1 三级文件 第3页 共4页 测定标准操作程序 生效日期: 10 临床意义 HbA1c是由Rahbar等人首先提出的，在糖尿病患者血液中发现的一种特殊的血红蛋白成份。它是由血红蛋白β链的N末端氨基酸的氨基与糖结合形成糖化血红蛋白，这种结合为非酶促反应。在红细胞的整个生命周期中，均以此种糖化血红蛋白形式存在，并且与血糖的浓度及红细胞的寿命有关。在病人的近期病程中(大约6,8周)，糖化血红蛋白的浓度与病人的平均血糖浓度密切相关，且不受临时血糖浓度波动的影响，因此，对于糖尿病患者来说，较于血糖及尿糖浓度，糖化血红蛋白浓度更能提供一种可信的信息。