健脾复肝丸质量标准研究

健脾复肝丸质量标准研究 2013年 11月第 20卷第 11期 中国中医药信息杂志 ?47? ?中药研究与开发? 健脾复肝丸质量标准研究 郑光明,宋宏安 荆门市中医医院,湖北 荆门 448000摘要:目的 建立健脾复肝丸的质量标准。方法 采用薄层色谱法对当归、白术进行定性鉴别。采用高效液相 色谱法测定阿魏酸含量。色谱柱:TIANHE C18 250 mm×4.6 mm,5 ?m;流动相:乙腈-0.085%磷酸17?83;流速: 1.0 mL/min;柱温:25 ?;检测波长:323 nm。结果 健脾复肝丸中当归、白术的供试品色谱中,在与对照品色谱 相应位置上显相同颜色斑点。阿魏酸对照品在 0.114~1.482 ?g 范围内线性关系良好,平均加样回收率为 98.36%, RSD=1.16%。结论 本方法简便准确、灵敏度高,可用于健脾复肝丸的质量控制。关键词:健脾复肝丸;阿魏酸;薄层色谱法;高效液相色谱法DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2013.11.017中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1005-5304201311-0047-03 Study on Quality Standard of Jianpi Fugan Pills ZHENG Guang-ming, SONG Hong-an Jingmen Hospital of Traditional Chinese Medicine, Jingmen 448000, ChinaAbstract :Objective To establish the quality standard for Jianpi Fugan Pills. Methods Angelicae Sinenis Radix and Atractylodis Macrocephalae Rhizome in the formulation were qualitatively identified by TLC. The content of ferulic acid was analyzed by HPLC. TIANHE C18 column 250 mm×4.6 mm, 5 ?m was used with a mobile phase of acetonitrile-0.085% phosphorous acid 17 ? 83. The content was detected at wavelength of 323 nm. The flow rate was 1.0 mL/min, and temperature was 25 ?. Results The spots in the TLC of Angelicae Sinenis Radix and Atractylodis Macrocephalae Rhizome were in the same chormatograms of control articles. The linear range of ferulic acid was 0.114-1.482 ?g. The average recovery was 98.36% and RSD was 1.16%. Conclusion The method is simple, accurate and highly sensitive, which can be used for quality control of Jianpi Fugan Pills Key words :Jianpi Fugan Pills ;ferulic acid ;TLC ;HPLC健脾复肝丸 浓 缩丸 为本院感染科临床经验 方, 具有疏肝 青皮 175 g,砂仁 145 g,紫草 292 g,虎杖 292 g,丹参 230 g, 理气、健脾和胃功效,用于治疗慢性乙型病毒性肝炎辨证属肝 白芍 219 g, 郁金 219 g,夏枯草 219 g,柴胡 131 g,白术 175 g, 郁气滞者。 本试验对其质量标准进行研究。 本方以白术、 柴胡 法半夏 100 g,赤芍 219 g,山楂焦219 g。 当归、 陈皮、 枳壳、 为君药, 由于 白术 含 量无 标准, 柴 胡 的薄 层色谱 和 高效 液相色 白术烘干80 ?,12 h,粉碎,过筛100 目,其余13 味药常 温 谱在试验中未得到较好重复性, 故选取方中另一主药当归作为 常压下加水浸泡 1 h,加水煎煮提取 3 次,第 1 次 2 h,第 2 次 研究对象。本制剂工艺中未收集当归挥发油, 因 此选 择阿魏 酸 1.5 h,第3 次 1 h,合并煎液,滤过,滤液浓缩得稠膏,取蜂蜜适 含量作为质量控制指标。现报道如下。 量117 ?炼制 成中蜜与稠膏混合均匀,趁热与上细粉混合制成 1 仪器与试药 软材, 经中药制丸机制成每粒 0.3 g 的小蜜丸, 打光, 干燥 LC-2010C HT 高效液相色谱仪日本岛津,包括UV 可变 波 80 ?,12 h,灭菌,分装60 粒每瓶,即得。 长检测器美国惠普;UV-240 紫外分光光度计日本岛津,梅 3 质量标准 特勒-托利多Excellence XP205 分析天平。 3.1 性状白术对照药材 批号 110925-200206 、当归对照药材批 本品为棕褐色至黑褐色的浓缩水蜜丸; 气微,味微辛、 涩。 号120922-200304、 阿魏酸对照品批号110765-200613均来 3.2 薄层色谱 自中国 药品 生物制 品检 定所, 健脾 复 肝丸 鄂 药制字 3.2.1 当归 取健脾复肝丸 5 g 研粉,加乙醚 20 mL,超声处 Z20110548,批号20120224、20120623、20121120及各阴性样 理 15 min, 滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇 1 mL 使溶解,作为供试 品来自本院中药制剂室,所有试剂均为分析纯。 品溶液。取缺当归的健脾复肝丸 5 g,同法制成阴性对照品溶 2 处方与制备 液。另取当归对照药材 1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层 处 方:当归 175 g,陈皮 175 g,枳壳 175 g,黄芪 219 g, 色谱法[2010 年版 《中华人民共和国药典》一部附录?B]试 验,吸取上述3 种溶液各10 ?L,分别点于同一硅胶G 薄层板上, 通讯作者:宋宏安,E-mail:an6945@163 以正己烷- 乙酸乙 酯4?1 为展开剂, 展开,取出,晾干,置紫 外 ?48?Chinese Journal of Information on TCMNov.2013 Vol.20 No.11 光灯365 nm下检视。供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应 3.3.6 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液1、4、 的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照品无干扰。 6、10、12、13 mL,分别置于 20 mL 量瓶中,用甲醇稀释至刻度, 3.2.2 白术 取健脾复肝丸 5 g 研粉,加正己烷 20 mL,超声 摇匀,分别进样10 ?L,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,得回 2 处理 15 min,滤过, 取滤液作为供试品溶液。另取缺白术的健 归方程 Y =69.37X +16.95,r =0.999 7, 阿魏酸在 0.114 ~ 脾复肝丸 5 g、白术对照药材 1 g,同法制成阴性对照品溶液和 1.482 ?g 范围 内线性关系良好。 对照药材溶液。 照薄层色谱法[2010 年版 《中华人民共和国药 3.3.7 精 密度试验 取同一份阿魏酸对照品溶液连续重复进 典》一部附录?B]试验,吸取上述3 种溶 液各20 ?L,分 别点 样6 次,测定峰 面积,RSD=1.25%n=6。 于同一硅胶 G 薄层板,以石油醚60 ~90 ?- 乙酸乙酯20? 3.3.8 稳定性试验及重复性试验 取供试品溶液 批号 0.1 为展开剂展开, 取出,晾干, 喷以 5% 香草醛硫酸溶液,加热 20110623分别于制备后0、2、4、6、8、12 h 重复进样,测得 至斑点显色清晰, 日光 下 检视, 供试品色谱中, 在 与对 照 药材色 阿魏酸峰 面积 积分值的 RSD =2.36%n =6, 明供 试品 溶 液 谱相应位置,显相同颜色斑点,阴性对照品无此特征。 12 h 内稳定。取该批次样品供试溶液 6 份, 分别进样测定,计 3.3 阿魏酸含量测定 算含量RSD=1.23%,表明重复性良好。 3.3.1 色谱条件 色谱柱: TIANHE C18250 mm×4.6 mm,5 ?m ; 3.3.9 加样回收率试验 精密量取同一批次批号20111120 流动相:乙腈-0.085% 磷酸17?83 ;流速:1.0 mL/min ;柱 已知含量的供试品 2 g,共 6 份,按“3.3.3”项下方法制备供 温:25 ?,检 测波长:323 nm;进样量:10 ?L。理论 塔板 数 试品溶液,分别精密加入 “3.2.2” 项下阿魏酸对照品溶液 1 mL, 以阿魏酸计不低于3000。 按上述色谱条件测定,结 果见表 1 。阿魏酸平均加样回收率为 3.3.2 对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量,精 密称定, 98.36%,RSD=1.16%。 表 1 阿魏酸加样回收率试验结果n =6 用甲醇制成每1 mL 含阿魏酸228 ?g 的对照 品溶液。 3.3.3 供试品溶液的制备 取本品 10 g,精密称定, 加 甲醇- 取样量 样品中含 加入量 测得量 回收率 平均回收 RSD 甲酸85?15溶液 50 mL,超 声处理功率 200 W,频率 40 kHz g 量?g ?g ?g % 率% % 25 min,滤过,70 ?水浴蒸干,残渣加水 40 mL 溶解,加盐酸调 2.009 1 203.32 228 431.78 100.20 pH 值2~3,用 乙醚提取5 次, 每次 40 mL,合 并乙醚液,挥干,残 2.004 4 202.85 228 424.74 97.32 渣用甲醇溶解,移至20 mL 容 量瓶中,稀释至刻度,摇匀,即得。 2.001 6 202.56 228 426.23 98.10 98.36 1.16 3.3.4 阴性对照品溶液的制备 取缺当归的阴性对照品 1 g, 2.007 1 203.12 228 425.65 97.60 按“3.3.3”项下方法制备,即得。 2.005 5 202.96 228 427.77 98.60 2.012 0 203.62 228 427.86 98.35 3.3.5 阴性干扰试验 分别取供试品、对照品、阴性对照品 3.3.10 样品含量测定 取 3 个批次20120224、20120623、 溶液 10 ?L,注 入色谱仪,测定,阴性样品在对 照品位置无干 扰 20121120 健脾复肝丸样品, 按“3.3.3 ”项下方法制备供试品 峰。色谱图见图1。溶液, 按 上述色 谱条件及 测定 方法进行 含量 测 定,3 批样 品平 行测定3 次,测 定结果见表2。表 2 样品中阿魏酸含量测定结果?g/g批号 1 2 3 平均值 RSD% 20120224 97.9 96.6 98.1 97.5 0.84 A 20120623 103.4 103.6 101.5 102.8 1.1320121120 100.1 101.0 102.6 101.2 1.25 3.4 其他检查符合丸剂项下有关的各项规定[2010 年版 《中华人民共和 国药典》一部附录?A]。 4 讨论 B 本试验参考文献[1-4] 对色谱条件进行了选择, 通过 比较, 最终选择乙腈-0.085% 磷酸17 ?83 为流动相, 使待测成份分 离效果好,峰型佳,检测波长323 nm 处有最大吸收。选择提 取溶 媒时,对甲 醇、 甲醇-甲酸85 ?15、甲醇-甲酸 90 ?10、甲醇-甲酸95 ?5、 水 饱和乙 酸乙酯 、 水进 行比较, t/min 水提取,乙醚 萃取 乳化现 象严重,干 扰测定,其余 5 种以甲醇- 甲C 酸85 ?15 提取效率最高, 因此, 选择甲醇- 甲酸85 ?15 作为 注:A. 对照品;B. 供试品;C. 阴性对 照 提取溶 剂。结合阿魏 酸的理化性质,进行了初步纯 化,以乙醚 萃 图 1 健脾复肝丸中阿魏酸高效液相色谱图 取 。 通 过对萃 取次 数及超 声提取 时间15 ~45 min 结果进 行比 较, 2013年 11月第 20卷第 11期 中国中医药信息杂志 ?49? HPLC 测定十八味诃子利尿丸中没食子酸含量 才让草 甘南藏族自治州食品药品检验检测所,甘肃 合作 747000摘要: 目的 建 立十八味诃子利尿丸中没食子酸的高效液相色谱含量测定方法。 方法 采用 ODS-2 HYPERSIL C 18 柱250 mm×4.6 mm,5 ?m;流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液7?93;流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm;柱温: 30 ?。 结果 没食子酸对照品进样量在0.063~0.315 ?g范围内有良好的 线性关系,Y?2902.1X-5.95,r=0.999 6, 平均回收率为98.56%,RSD=0.41%n=5。结论 本法灵敏、简便、准确,重复 性好,可用于该制剂的质量控制。关键词:十八味诃子利尿丸;没食子酸;高效液相 色谱法;含量测定DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2013.11.018中图分类 号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1005-5304201311-0049-02 Determination of Gallic Acid in 18 Taste Myrobalan Diuretic Pill by HPLC CAI Rang-cao Institute for Food and Drug Control in Gannan Tibetan Autonomous Prefecture, Hezuo 747000, ChinaAbstract :Objective To establish the method for determination of gallic acid in Shibawei Heziliniao Pill by HPLC. Methods ODS-2 HYPERSIL C column 250 mm×4.6 mm, 5 ?m was used, with mobile phase of 18 methanol-0.1% phosphoric acid solution 7 ?93. The flow rate was 1.0 mL/min, the detection wavelength was 270 nm, and the column temperature was 30 ?. Results Gallic acid showed a good linear relationship within the range of 0.063-0.315 ?g, Y =2902.1X -5.95, r =0.999 6. The average recovery was 98.56%, and RSD was 0.41% n =5. Conclusion The method is sensitive, simple, accurate, reproducible, and can be used for quality control of 18 Taste Myrobalan Diuretic Pill Key words :18 Taste Myrobalan Diuretic Pill ;gallic acid ;HPLC ;content determination十八味诃子利尿丸收载于 《卫生部药品标准? 藏药》 第一 CP-225D 型;KH-250DB 型超声波清洗器昆山禾创超声仪器 册,由诃子、 红花、 豆蔻、 渣 驯膏、 山矾叶、 紫草茸、 藏 茜草、 有 限公司。 余甘子、 姜黄、 小檗皮、 蒺藜、 金礞石、 刺柏膏、 小伞虎耳草、 没 食子酸对照品 批号 110831-200803, 中国药品生物制 巴夏嘎、刀豆、熊胆、人工牛黄组成, 是根据藏医理论和长期 品检定所; 十 八味诃子利尿丸样品由甘南州佛阁藏药有限公司 临床经验, 经反复筛选验证总结出的具有益肾固精、利尿功效 提供,批号 120401、120501、120601、120701、120801;甲醇 的方药,临床主要用于肾病、腰背疼痛、尿频、小便混浊、糖 为色谱纯,水 为纯化水,其余试剂均为分析纯。 [1] 尿病、 遗精等病症 。 原标准中的检验项目只有丸剂的常规项, 2 方法与结果 为了进一步控制制剂质量, 本试验采用高效液相色谱法HPLC 2.1 色谱条件 对十八味 诃子 利尿丸中 君药 诃子的有 效成 分没食子 酸进 行含 色谱柱:ODS-2 HYPERSIL C 柱250 mm×4.6 mm,5 μm; 18 量测定。现报道如下。 流动相: 甲醇-0.1%磷酸溶液7?93; 流速:1.0 mL/min;检 [2] 1 仪器与试药 测波长:270 nm;柱温:30 ? 。LC-20A 高效液相色谱仪:包括 LC-20AT 四元泵,SPD-20A 2.2 对照品溶液的制备 检测器,LC-20A HPLC 系统化学工作站;十万分之一电子天平 精密称定没食子酸对照品 5.25 mg, 置 50 mL 量瓶中,加50% 长治医学院学报,2008,224 :253结果表明,超声提取25 min,萃取5 次,阿魏酸 即可提取完全。 [5-6] 由于当归不同药用部位、 不同产地中阿魏酸含量差别较大 , [3] 石上梅.HPLC 法测定当归康妇胶囊中阿魏酸的含量[J]. 中国药事,2004, 181 :37暂定本制剂每克含阿魏酸不低于87.5 ?g 作为质控标准。 [4] 仲开德,付泽华, 熊文碧.HPLC 测定骨炎灵颗粒中阿魏酸的含量[J]. 成 本试验采用高效液相色谱法测定制剂中阿魏酸含量,回收 率好、重复性好、稳定性好、专属性高,能够更有效控制该制 都中医药大学学报,2009,322 :85[5] 乔明, 向纯明.HPLC 对当归不同药 用部位中阿魏酸含量测定[J]. 中医药 剂的质量。 参考文献: 学刊,2005,2310 :1892[1] 国家药典委员 会. 中华人民共 和国药典:一部[S]. 北京:中国医药科 [6] 李琰, 徐丽珍, 林佳, 等. 不同产地 当归中阿魏酸的含量比较[J]. 中国药 技出版社,2010 :124. 学杂志,2003,3811 :839-840[2] 申强, 陈燕忠, 吕竹芬, 等.HPLC 法 测定祛痹舒肩丸中阿魏酸的含量[J]. 收稿日期:2013-04-22,编辑:陈静