茶叶咖啡因测定

茶叶咖啡因测定 实验一 反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量 一(实验目的 1. 熟悉液相色谱仪的基本构造和操作方法 2. 学会利用外标法对物质进行色谱定量 二(仪器与试药 仪器: 高效液相色谱仪(日本岛津10AVP型)、溶剂过滤器、样品溶液过滤器、微量进样器 试药:甲醇、乙腈、超纯水、咖啡因对照品 三、色谱条件 色谱柱:C18(250×4.6，5um) 流动相:甲醇-乙腈-水=45:10:45 (v/v) 器及检测波长:紫外检测器 280nm 流速:0.6ml/min 四、实验操作 1( 对照品溶液的配制:准确称取咖啡因对照品适量，用乙腈:水(1:1)混合溶剂配制成1mg/mL 咖啡因储备液;分别移取10μL、20μL、30μL、40μL咖啡因储备液，用超纯水定容至5mL，配制成浓度为2μg/mL、4μg / mL、6μg /mL、8 μg/mL的一系列对照品溶液，备用。 2. 样品溶液的配制:准确称取 0.035g 茶叶, 加乙腈:水(1:1)混合溶剂8mL，超声提取10min，用超纯水定容至10mL，过滤后并稀释20倍，备用。 3. 调用或创建咖啡因测定方法并运行方法 4. 测定:待基线平稳后，分别吸取25μL对照品溶液和样品溶液进样。每份溶液重复进样三次。 五、数据处理及计算 以对照品溶液峰面积与对应含量绘制工作曲线，根据样品溶液峰面积在曲线上查出其进样时含量，并计算得到茶叶中咖啡因的含量。 六、思考 1(外标法与内标法有何不同, 2. 如果测定可乐中咖啡因，样品应该如何处理, 附: 岛津10AVP型高效液相色谱仪操作 一、开机 1(打开计算机。 2(开启高效液相色谱仪各部件电源开关(脱气机?A泵?B泵?检测器?柱温箱?主控器)。 3(待高效液相色谱仪各部件自检完毕，在计算机上启动化学工作站ClassVP 并点击Instrument ，输入用户名和密码，点击确定。 二、实验参数的设置 在Method下，进行操作: 1(单击溶剂瓶图标，设置所用溶剂瓶中溶剂量后，点击OK;单击高压泵图标，设置 -17泵流速0.6mL?min，梯度洗脱溶剂B(水)0%，最高柱压设为2.0×10 Pa。 2(单击色谱柱图标，设置柱温箱温度为25?。 3(单击检测器图标，设置检测波长为280nm，，数据采集时间7min。 四、运行样品 1(打开Purge阀。 2(运行Instrument菜单下System On命令启动系统(或单击各图标的on图标启动系统)。 3(待废液管中无气泡流出，关闭Purge阀。 4(待基线稳定之后，单击single run, 进行样品信息编辑。 5. 用微量进样器进样后，扳动手动进样阀至Inject位置，仪器自动开始纪录。 6(待测物出峰完全后，按F8停止采集数据。 五、实验数据处理 1(定性、定量分析参数的设定 (1)一级校正的建立 ?在Data Analysis界面下，点击File菜单下的Load Signal，调用低浓度标样的实验结果。 ?优化谱图:打开Graphics菜单，选择Signal Options选项，进入Signal Option编辑框，在Range选择中选择Use Range，输入适当的参数。 ?优化积分:在Data Analysis 界面下，单击Integration菜单，选择Integration Event，选择适当的参数，编辑积分项目。 在积分事件表中，输入合适的积分参数，然后单击积分事件表左上角带对号的图标。 ?建立一级校正表:单击Calibration菜单，选择New Calibration Table，选择默认参数，单击OK。 ?在校正表中输入化合物名称及浓度。在输入浓度之后，相应化合物的校正曲线会显现出来。 ?单击OK键。 (2)二级校正表的建立 ?调用第二个标样色谱图。 ?按照一级校正表建立过程中所涉及的，优化谱图，优化积分参数。 ?单击Calibration菜单，选择Add Level，编辑二级校正表，单击OK。 ?在校正表中，输入第二个标样的浓度。输入浓度后，相应化合物的校正曲线会显现出来。 ?单击OK键，完成二级校正表的编辑。 (3)校正表参数及报告的设定 ?校正表参数设定。单击Calibration菜单，选择Calibration Setting，在Calibration Setting 编辑框中输入浓度单位、时间窗口、校正曲线类型。 ?报告的设定。单击Report菜单，选择Specify Report，进入Specify Report编辑框，输入打印目的地，选择定量方法ESTD。 2(未知样品的定性、定量分析 (1)调用未知样品数据文件。 (2)优化谱图显示，优化积分参数。 (3)点击报告图标，显示定性、定量分析结果。 (4)选择Report菜单下Print Report命令，打印定量结果。