HPLC法测定牛黄消炎片中大黄素与大黄酚的含量

HPLC法测定牛黄消炎片中大黄素与大黄酚的含量 HPLC法测定牛黄消炎片中大黄素与大黄 酚的含量 中国药事2008年第22卷第3期247 HPLC法测定牛黄消炎 董丽萍,刘传玲,姚尚辰,于 中国药品生物制品检定所) 片中大黄素与大黄酚的含量 勇,宋吉连(山东省威海市药品检验所,威海264200; 摘要:建立牛黄消炎片中大黄素,大黄酚的含量测定方法.采用高效液相色谱法,KromasilC色谱 柱,流动相为甲醇一0.1磷酸(80:20),流速为0.8mL?rain,检测波长:254nm.大黄素对照品的线 性范围0.04,0.8/xg,r一0.9999,平均回收率为99.O6%o,RSD=0.61;大黄酚对照品的线性范围 0.0196~0.392/~g,r=0.9999,平均回收率为1'05.89,RSD=0.67.本法快速,灵敏,准确. 关键词:HPIC;牛黄消炎片;大黄素;大黄酚 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1002—7777(2008)03—0247—03 DeterminationofEmodinandChrysophanolinNiuhuangXiaoyanTabletsbyHPLC DongLiping,LiuChuanling,YaoShangchen,YuYongandSongJilian(WeihaiInstituteofDr ug Control,ShandongProvince,Weihai264200;NationalInstitutefortheControlofPharmace uticaland BiologicalProduts) ABSTRACTAHPICmethodwasestablishedfordeterminationofemodinandchrysophanol inNiuhuang XiaoyanTablets.Themobilephasewasconsistedofmethanol一0.1H3PO4(80:2O).Theflowratewas 0.8mI?min,thedeterminationwavelengthwas254nm.Thestandardcureofemodinreferenc ewas linearovertherangeof0.04,0.8/,g.r一0.9999,theaveragerecoverywas99.06,RSD一0.61.the standardcureofchrysophanolreferencewaslinearovertherangeof0.0196,0.392~g,r一0.9999,the averagerecoverywas105.890A,RSD一0.67.ConclusionThemethodiSrapid,sensitiveandaccurate. KEYWORDSHPLC;NiuhuangXiaoyanTablets;emodin;chrysophanol 牛黄消炎片由牛黄,珍珠母,大黄,雄黄等七 味药组成,具有清热解毒,消肿止痛之功效,用于 咽喉肿痛,疔,痈,疮疖等.该处方中的大黄,显 微特征[有时不明显.本文参考有关文献[1_6_,采 用高效液相色谱法测定牛黄消炎片中大黄素和大黄 酚的含量,分离度好,回收率高,在一定程度上能 有效控制牛黄消炎片的质量. 1仪器与试药 Agillent1100型组合式全自动高效液相色谱 仪,METTLERTOLEDOAG135电子天平.大黄 素,大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所,供 含量测定用,批号分别为0756—200110,0796— 200208),牛黄消炎片为市售品(药都制药集团, 批号:060907;哈药集团世一堂,批号:0603316; 作者简介:董丽萍,大学本科,主管药师;Tel:(0631)5281272 哈尔滨华羽集团,批号:20060801).甲醇为色谱 纯,水为超纯水,其余试剂均为纯. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:KromasilCl8(4.6ram×250mm, 5tim),流动相:甲醇一0.1磷酸(80:20),流速 0.8mI?min,检测波长:254nm,柱温:室温, 进样量:10ttL. 2.2对照品溶液的制备 精密称取大黄素,大黄酚对照品10mg, 9.8mg,分别置于50mL,100mI量瓶中,加甲醇 至刻度,然后精密量取大黄素,大黄酚溶液各10 mI,置于50mL量瓶中,加甲醇制得每1mL中含 大黄素40/,g,大黄酚19.6/,g的对照品混合溶液. 248中国药事2008年第22卷第3期 2.3供试品溶液的制备 取本品20片,去包衣,精密称定,求得平均 重量,取相当于5片的平均片重,精密称定,置 50mI锥形瓶中,加甲醇25mi,称定重量,加热 回流30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足失重 量,滤过,取滤液10mI,置50mI圆底烧瓶中, 挥去甲醇,加2.5mol?I.的硫酸溶液10mI, 超声处理5min,再加氯仿10mI,加热流1h, 冷却,移至分液漏斗中.分取氯仿层.酸液用氯仿 提取2次,每次约8mI,合并氯仿液,以无水硫 酸钠脱水,氯仿液移至100mI锥形瓶中,挥去氯 仿,残渣加甲醇溶解.定容至10mI量瓶中,即得 供试品溶液. 2.4阴性对照溶液的制备 取不含大黄的本品6味药约0.25g.依2.3法 制得阴性对照溶液. 2.5空白对照试验 取上述对照品溶液,供试品溶液及阴性对照品 溶液,照2.1项色谱条件,各进样10ftI,得到高 效液相色谱,见图1.图谱明彳此色条件下大 黄素,大黄酚与其他成分有较好分离.s;性对照图 谱与对照品色谱相同位置无干扰.理.板数按大 黄酚峰计算不低于3000.分离度符合曩卜 01020mlr u}uumlr a.对照品;b.样品;C.阴性对照. 图1牛黄消炎片HPIC色谱图 2.6曲线的制备 精密吸取对照品溶液1,5,12,15,20ffI进 样,按2.1项色谱条件测定峰面积.以峰面积为纵 坐标,对照品大黄素,大黄酚浓度(g?mI) 为横坐标计算,分别得到回归方程为: l黄素一2.481214358×10X一7.739007727 r一0.9999 y大黄酚一8.95512516×l0.1.039431955×10 r一0.9999 线性范围:大黄素为0.04,0.8pg;大黄酚为 0.0196~0.392pg. 2.7精密度试验 取对照品溶液,重复进样5次,每次10ffL, 测得大黄素峰面积的RSD为0.23,大黄酚峰面 积的RSD为0.10. 2.8稳定性试验 取牛黄炎片样品溶液(批号为060907),在 0,0.5,1一7,9h分别进样10ffL,记录峰面 积,大黄素蜂面积的RSD为0.35(一6),大黄酚峰面积的RSD为0.60(===6),可见供试 品溶液在9h_J,i定. 2.9重忡.L-t,z 取牛茸消?片(批号为060907)平行样品5 份,按2.3试品溶液制备法制得5份供试品溶 液,按样r测定法测定,测得供试品中大黄酚平均 含量为36l_97ftg?g,RSD=0.30;大黄素平 均含量为87.67pg?g,RSD=0.29.表明本 法重现性好. 2.10回收率试验 采用加样回收法,分别精密称取已知含量的牛 黄消炎片(批号为060907,大黄酚含量为 361.97fig?g,大黄素含量为387.67fig?g)供 试品,精密称定,置50mI锥形瓶中,分别精密加 入2.2中对照品混合溶液5mI,精密加入甲醇 20mI,按2.3项下制备供试品溶液,各取10ffL 进样,记录色谱图,计算回收率,见表1,表2. (下转第250页) 一 懈一眺一?呲呲 型艟表一妻耋m川 一曲一?耨I 中l?里一口孵一增一措掐埔措掐椭一黜惹一 250中国药事2008年第22卷第3期 2.5线性关系考察 精密吸取血竭素高氯酸盐标准溶液0.25, 0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mI,分置于10mI量 密吸取 瓶中,配成一系列对照品溶液.分别精 20p.L注入HPLC色谱仪,以进样浓度为横坐标, 以峰面积积分值为纵坐标,计算,回归方程: y一1.87323×10X一5.9298×10r=O.9995 表明血竭素高氯酸盐在0.0888,0.8880mg?mL. 浓度范围内呈良好的线性关系. 2.6精密度试验 精密吸取同--~Ict供试品溶液,分别重复进样5 次,测得峰面积平均值的RSD为0.70. 2.7重复性试验 取同一批号样品,取样6份,按上述方法制备供 试品溶液,测定,结果平均含量的RSD为1.91. 2.8稳定性试验 取同一份供试品溶液,分别在0,2,4,8, 12小时进样测定,结果表明供试品溶液在12小时 内稳定,RSD为1.22. 2.9阴性对照试验 按上述色谱条件,分别取对照品溶液,样品溶 液及阴性样品溶液各20ffL,注入色谱仪.测定, 阴性样品在血竭素高氯酸盐出峰处无干扰峰出现, 表明本法可行.见图1. 2.10回收率试验 精密称取已知含量的样品9份,分3组加入不 同体积的血竭素高氯酸盐对照品溶液(相当于样品 含量的5O,100,150),按上述方法测其含 量,计算回收率,平均回收率为97.48,RSD= 2.74 2.1l样品测定 按上述色谱条件测定3批样品含量,结果见表1. 246810'2'41et/rain a.对照品;b.样品;c.阴性对照;1.血竭素高氯酸盐. 图1伤科八厘散HPLC色谱图 表1样品含量测定结果(n=3) 3讨论 实验结果表明法专属性强,简单易行,阴性 无干扰,可满足伤科八厘散中的血竭素高氯酸盐的 含量测定要求.在供试品溶液制备中,比较了振摇 3,5,10min的提取效果,结果表明振摇3min已 提取完全. 参考文献: [13JZ部药品标准[s3.WS3一B-1125. [23中国药典[s].一部,2005:96. [3]刑建国,王双伞,管慧,等.复方血竭止痛搽剂质量标准的 研究[J].新疆医科大学,2001,(2):146. [4吴平,杜青云.虹竭的化学成分与临床应_}{j研究进展EJ]. 海峡药学杂志,2000,(2):151. 场场场尔毋:.鲁{孽垮场々缘扬琢尔尔?场缘乎乎纺乎纺自 (3c接第248页) 2.11样品测定 取3批样品,依2.3项分别测定结果. 表3样品测定结果(一3) 厂家及批号大黄素含量大黄酚含量 —— !些:坚:! 药都制药集团(060907)387.67361.97 哈药集团世一堂(0603316)426.53360.92 哈尔滨华羽集团(20060801)541.39459.09 3讨论 从精密度,重现性,稳定性及回收率的实验表 明,本方法灵敏,快捷,准确,可用于牛黄消炎片 中大黄素与大黄酚的测定. 参考文献: [1]中国药典[s].一部,2005:384,17. E2]姜晓峰,甄永苏.大黄逆转肿瘤细胞多药抗药性作用rJ]. 药学,1999,34(3):164. [3]刘东平.HPIC法测定大败毒胶囊中大黄素和大黄酚的含量 l_J].现代中药研究与实践,2005,19(3):35. [4]鲍恩泉,管水英,蒋永梅.黄连上清片中大黄素和大黄酚的 含量l_J:.安徽医药,2002,6(4):60. [5]李淑孟.郭增军.HPIC法测定三黄片中大黄素和大黄酚及 黄芩苷的含量l_J].中成药,2001,23(6):445. [6]罗文毓.江萍.大黄中五种蒽醌衍生物的HPLC测定EJ]. 药物分析杂志,1989,9(5):259.