气血康口服液质量标准研究

气血康口服液质量研究 2009年第3O卷第9期云南中医中药杂志61 气血康口服液质量标准研究 康绍建,陈阳友,杜利云,杨文芬. (1.云南省食品药品检验所,云南昆明650011;2.云南九洲医院,云南昆明650225; 3.云南白药集团文山七花有限责任公司,云南文山663000) 摘要:目的:建立气血康口服液质量标准.方法:定性鉴 别采用薄层色谱法;含量测定采用高效液相色谱法.结果:薄 层色谱鉴别(1):原标准为人参皂苷Rg的鉴别,新标准增加人 参皂苷Rb,三七皂苷R1及黄芪甲苷的鉴别,经验证未见干扰; 薄层色谱鉴别(2)为新增项目,粉葛薄层色谱鉴别以葛根素为 对照,经验证未见干扰;含量测定色谱条件:采用汉邦(4.6× 250mm,5Wn)C18色谱柱,流动相:乙腈一水(19:81);检测波长 为203nm;柱温3O?;流速1n1L/min.人参皂苷Rgl进样量在 0.678,10.17gg范围内有良好的线性关系;回归方程y一 279.47x一27.716(r一1.000),人参皂苷Rg1的平均回收率为 97.54,RSD一2.37.结论:薄层色谱鉴别和含量测定方法 操作简便,准确,重现性好,可用于控制气血康口服液质量. 关键词:气血康口服液;薄层色谱鉴别;HPLC. 中图分类号:R286.0文献标识码:A 文章编号:1007—2349(2009)09—0061一O3 气血康口服液(原名为复方三七口服液)具有抗衰老,扶 正培本,益气强心,健脾固本,滋阴润燥,生津止咳;并有提高 机体免疫力,升高白细胞和血色素的作用.原为提高国家药 品标准行动计划品种,后确认为2010年版《中国药典》收载品 种.根据国家药品标准提高行动计划任务要求:鉴别:增加 葛根,黄芪,人参,三七的TLC鉴别;含量测定:增加三七的含 量测定[1;本次标准修订的薄层色谱鉴别,新增薄层色谱鉴 别项及新增含量测定均符合要求,可作为质量控制指标. 1仪器与试药 高效液相色谱仪:岛津2010A,色谱柱:汉邦(4.6× 250mm,5m)C18色谱柱;液相溶剂用水为纯净水经0.45m 微孔滤膜滤过,乙腈为色谱纯,其他均为纯;人参皂苷 Rg对照品(1lO7O3—200726)含量测定用,按97.7计,人参 皂苷Rb1对照品(110704—200420),三七皂苷R】对照品 (110745—200415)),黄芪甲苷对照品(0781—200109),葛根 素对照品(752—200108)均购于中国药品生物制品检定所;气 血康口服液:由云南白药集团文山七花有限责任公司提供(批 号:20080701,20080702,20080703);气血康口服液薄层色谱 鉴别空白阴性试样(缺三七,人参;缺黄芪;缺葛根)和含量测 定空白阴性试样(缺三七,人参):均由云南白药集团文山七花 有限责任公司提供. 2实验方法及结果 2.1薄层色谱鉴别[1]取本品20rnI,置蒸发皿中,水浴蒸至 近干,加乙醇25mi温浸,滤过,滤液蒸干,残渣加水25mL使 溶解,移人分液漏斗中,用正丁醇提取3次,每次10mL(勿剧 烈振摇以免乳化),合并正丁醇液,用水洗2次,每次10mL,弃 去水液,加氨试液25mL振摇提取,弃去氨试液,正丁醇液蒸 干,残渣加甲醇1n使溶解,作为供试品溶液.同法制得缺 三七,人参和缺黄芪的阴性对照样品;另取人参皂苷Rg,人 参皂苷Rbt,三七皂苷R及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每 lmL各含lmg的混合溶液,作为对照品溶液.照薄层色谱法 (附录?B)试验,吸取上述溶液各1,3L,分别点于同一高效 硅胶H薄层板上,以三氯甲烷一甲醇一水(13:7:2)10?以 下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1O 硫酸乙醇溶液,在105?加热至斑点显色清晰.供试品色谱 中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.置紫 外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应 的位置上,显相同颜色的荧光斑点.色谱图见图1,图2. l23456 1:Rl,Rg1,Rbi,黄芪甲苷混合对照品2:阴性样品(缺三七,人参药材) 3:阴性样品(缺黄芪药材)4,5,6:样品 图1日光下薄层色谱图 l23456 1:R1,Rgl,Rbl,黄芪甲苷混合对照品2:阴性样品(缺三七,人参药材) 3:阴性样品(缺黄芪药材)4,5,6:样品 图2紫外光灯(365nm)下薄层色谱图 62云南中医中药杂志2009年第3O卷第9期 2.2薄层色谱鉴别l2]取本品20mL,用乙酸乙酯提取3次, 每次20mI,合并乙酸乙酯提取液置蒸发皿中蒸干,残渣加甲 醇1mL使溶解,作为供试品溶液.同法制得缺葛根的阴性对 照样品;另取葛根素对照品,加甲醇制成lmL含1.5mg的溶 液,作为对照品溶液.照薄层色谱法(附录?B)试验,吸取上 述溶液各1L,3L,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯 甲烷,甲醇一水(7:2.5:0.25)为展开剂,展开,取出,晾干. 置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱 相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点.色谱图见图3. l2345 1,2,3:样品4:阴性样品(缺粉葛)5:葛根素对照品 图3粉葛薄层色谱鉴别 2.2气血康口服液的含量测定 2.2.1系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂;流动相:乙腈,水(19:81);检测波长:203nm;理论塔板数 按人参皂苷Rg峰计算,应不低于3000. 2.2.2对照品溶液及供试品溶液的制备对照品溶液制备 取人参皂苷Rg对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL 含人参皂苷Rg对照品0.7mg溶液,摇匀,即得. 供试品溶液制备取本品约30mL,混匀,滤过,精密量取 10mL于分液漏斗中,用水饱和正丁醇10mI,10mI,10mL提 取3次,合并正丁醇液,用氨试液5mI,5mI洗涤2次,收集正 丁醇液水浴蒸干,残渣用适量甲醇溶解,转移至10mI量瓶 中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45Fm微孔滤膜滤过,即得. 2.2.3测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10ffL,注入高效液相色谱仪,测定,即得.色谱图见图4和图5. ?-n 图4人参皂苷Rg1对照品 图5气血康口服液供试品 2.2.3阴性对照试验阴性对照样品溶液的制备取处方中 除三七,人参外的其他药味,按处方剂量及制法和工艺要求制 备缺三七,人参阴性对照样品溶液.照试验所得方法进行测 定,结果表明,在与人参皂苷Rg对照品相同的保留时间位 置,未见干扰峰出现,表明处方中其他药材和辅料对人参皂苷 Rg的测定无干扰.与供试品溶液对照,未见明显峰缺失. 见液相色谱图6. ?-.- 图6气血康口服液阴性对照(缺三七,人参) 2.2.4线性关系考察精密称取人参皂苷Rg对照品 6.78mg,置10mL量瓶中,加流动相溶液溶解并稀释至刻度, 摇匀,吸取对照品溶液1,2,5,J0,15F1进样按上述色谱条件测 定峰面积.以峰面积积分值(mAuXs)为纵坐标,进样量(g) 为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程:Y=279.47x一 27.716,r一1.结果表明人参皂苷Rg进样量在0.678ttg~ 10.17tLg范围内有良好的线性关系.符合要求. 2.2.5精密度试验精密吸取人参皂苷Rg对照品溶液 (O.6829mg/mI)各10t~L,按试验所得方法重复进样5次,测 定峰面积值.各次测得的峰面积值分别是2683159,2682968, 2686880,2641316,2639333,平均值为2666731,RSD为 0.91,符合要求. 2.2.6重复性试验取批号为20080701的气血康口服液6 份,按试验所得方法试验,测得样品峰面积并计算含量,试验 结果表明:RSD为0.72,符合要求. 2.2.7稳定性试验取对照品溶液及供试品溶液,分别于0, 1,2,4,6,8h测定6次,以峰面积计算RSD值,对照品溶液峰 面积RSD为1.81,供试品溶液峰面积RSD为1.82;结果 表明对照品及供试品溶液在8h内稳定. 2.2.8加样回收率试验采取全程加样法.取已知含量的供 试品(批号:20080701,人参皂苷Rgl含量0.6267mg/mL)6份, 每份5mL,精密加入人参皂苷Rg对照品溶液(0.5082mg/mL) 2009年第30卷第9期云南中医中药杂志63 HPLC法测定壮骨健膝颗粒中士的宁的含量 米晓兰 (天津中生乳胶有限公司,天津300308) 摘要:目的:建立一种简便,快速的高效液相色谱法测 定壮骨健膝颗粒的指标成分士的宁的含量.方法:采用色谱 枉为KromasilC18柱,甲醇一1冰醋酸溶液一三乙胺 (23:77:0.4)为流动相,流速为1.0mI/rain,柱温为室温,检 测波长为260nm.结果:在浓度为30.5/ag~122.0tzg/mL范 围内具有良好的线性关系,A一21029C--157590(r一0.9998, n一5),方法回收率为101.7,RSD为0.67.结论:该方法 简单,精确,灵敏度高,重现性好,可用于壮骨健膝颗粒的质量 控制. 关键词:壮骨健膝颗粒;士的宁;高效液相色谱;含量测定 中图分类号:R927.2文献标识码:A 文章编号:1O07—2349(2009)09--0063—02 壮骨健膝颗粒由桑寄生,川I牛膝,白芍,马钱子粉等药材 配伍组成.主要作用为补肝.肾,强筋骨,祛风湿,活血.马钱 子中的士的宁为其有效成分],但毒性剧烈,其含量高低是引 起马钱子中毒的主要原因,所以选择士的宁作为含量控制的 指标,采用高效液相色谱法测定壮骨健膝颗粒中士的宁的含 量,该方法可靠,灵敏,快速. 1仪器与试药 1.1仪器LC一10ATvp液相色谱仪,SPD一10AvpUV— VIS检测器(日本岛津);ODSC18柱(5m,200mm×4.6mm, 北京迪马公司),微量进样器(50L,上海高鸽工贸有限公司), ANASTAR色谱数据处理系统(Suntex);电子分析天平(JL京 赛多利斯天平有限公司),微孔滤膜(O.45gm,有机相). 1.2试药士的宁化学对照品(中国药品生物制品检定所, 批号11O705—200306);甲醇(禹王集团,批号20070206072,色 谱纯);氨水(上海久亿化学试剂有限公司,批号:20070101,分 析纯);氯仿(上海试剂总厂,批号20050217,分析纯);冰醋酸 (中国上海试剂总厂,批号2004022,分析纯);甲醇(中国上海 试剂总厂,批号20050217,分析纯);壮骨健膝颗粒(批号 20061201,20061203,20061204). 2方法与结果 2.1色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇一 1冰醋酸溶液一三乙胺(23:77:0.4)为流动相;流速 1.0mI/min;温度为室温;检测波长为260nm. 2.2对照品溶液的制备精密称取士的宁化学对照品约 6mg,置10mI容量瓶中,加氯仿适量使溶解并稀释到刻度,摇 匀摇匀作为储备液.精密移取0.5mL于10mL容量瓶中,用 甲醇稀释至刻度,摇匀,即得. 2.3供试品溶液的制备精密称定本品粉末约5g,放入具塞 锥形瓶内,加氢氧化钠2mL,放置30min,精密加入氯仿 18mL,密塞称重,水浴回流2h,放冷,称重,用氯仿补足重量, 提取液过少量无水硫酸钠的滤纸,取续滤液,精密移取续滤液 5mL于10mL容量瓶中,用甲醇定容,摇匀,用0.45gm微孔滤 膜过滤,取续滤液,即得. 各5mL,按试验所得方法试验,试验结果表明,本方法回收率 在95,1o5之间,平均回收率为97.54%,RSD为2.37%, 符合要求. 2.2.9样品含量测定取气血康VI服液3批样品,按试验所 得方法试验,测定人参皂苷Rg含量,每批3次.结果见表1. 表1样品的含量测定结果(n-3) 3讨论 原部颁标准中药成方制剂第十三册wS3,B一2573—97 中无[含量测定]项,根据气血康口服液的处方,选择方中的三 七,人参中的有效成分人参皂苷Rg为含量测定指标.最初 拟选择三七皂苷R,人参皂苷Rg,Re,Rb作为含量测定指 标成分,通过试验发现,在15cmCs柱上,用乙腈一水的不同 梯度洗脱均难以使这几种成分完全分离;在25cmCs柱上,用 乙腈一水(0--35min,19:81;35—55min,29:71;55—70min, 29:71;7O一100min,40:60)梯度洗脱可以将几种成分分开, 但人参皂Rb出峰时间在80min右左,这样不适用大生产中 产品质量控制,且处方中三七,人参,黄芪均含类似物质,测定 时相互干扰大,供试品溶液中三七皂苷R,人参皂苷Re含量 低,若作控制产品质量的指标也起不了太大的现实意义.因 此结合以上这些实际情况,最终放弃进行多组分测定,选择耗 时短,分离较好的人参皂苷Rg为气血康口服液含量测定指 标性成分.对气血康口服液中人参皂苷Rg含量测定的分析 方法验证结果表明,该测定方法简便,准确,可行. 参考文献: Eli国家药典委员会.中国药典[M].一部.北京:化学工业出版社, 2005:附录l14,?6. [2]中华药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制 剂EM].第十三册.北京:化学工业出版社,1997:141. (收稿日期:2009—04—21)