丹参酮IIA与丹酚酸B在丹参药材中的分布研究

丹参酮IIA与丹酚酸B在丹参药材中的分布研究 丹参酮IIA与丹酚酸B在丹参药材中的分布 研究 现代中药研究与实践2006年第2O卷第2期 ResearchandPracticeofChineseMedicines 药材生产 丹参酮IIA与丹酚酸B在丹参药材中的分布研究 曾令杰,梁晖, (广东省广州白云山和记黄 ,潘永存 陈悦,梁惠瑜 埔中药有限公司,广东广州510515) 摘要:目的对丹参酮IIA与丹酚酸B在丹参药材中的分布规律进行研究,为丹参药材的GAP栽培与采 收加工提供科学依据.方法在丹参药材的采收季节,分别在不同的主产地采集药材样品,按实验需要分成 不同部分,晒干后,以HPIC法测定药材中活性成分丹参酮IIA和丹酚酸B的含量.结果研究明,丹参 酮IIA在皮层含量最高,木质部含量甚微,根的下端含量高于上端,须根的含量高;丹酚酸B在皮层的含量高 于木质部,根下端含量高于上端,同样以须根的含量高.结论脂溶性的丹参酮IIA与水溶性的丹酚酸B的 在丹参根中的分布有一定的规律;这两个成分在丹参根中的横向分布以皮层为高,纵向分布均以根的上端高 于下端,须根含量最高. 关键词:丹参;丹参酮IIA;丹酚酸B;分布;HPIc测定 中图分类号:R282文献标识码:A文章编号:1004—2199(2006)02—0007,03 PrimaryStudyontheDistributionofTanshinoneIIAandSalvianolicacid BinRadixSalviaemiltiorrhizae ZENGLing—jie,LIANGHui,CHENYue.LIANGHui—yu.PANYong—cun (HutchisonWamphoaGuangzhouBaiyunshanChineseMedicineCompany,Guangzhou510515.China) Abstract:ObjectiveForprovideabasisoftheharvestandprocess.tostudythedistributionOfTan— shinoneIIAandSalvanolicacidBfromtherootofSalviamiltiorrhizaBeg.inGAPproductbase.Methods ThesamplesOfmateria1medicawerecollectedfromdifferentareasinthesameharvesttime.andwere dividedintodifferentpartswiththedemandofexperiments.Aftersamplesdrying,theactivecompounds oftanshinoneIIAandsalvianolicacidBweredeterminedbyHPLC.ResultsTheresultssuggestthatthe contentsofthetWOcompoundsarebothmuchhigherinthehairrootandcortex.butitwaslowerinthe downpartandxylem,furthermore,thecontentoftanshinoneIIAismuchhigherinthecortexanditwas traceinthexylem.ConclusionTanshinoneIIAandsalvianolicacidBweredistributedmuchmoreinthe surfaceandinthehairrootthaninthexylemandintheupperpartofRadixSalviaemiltiorrhizae. Keywords:SalviamiltiorrhizaBge.;tanshinoneIIA;salvianolicacidB;distribution;HPLC 丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)为治疗0血管 病的传统中药,具有活血养血和益气作用.临床上 证实丹参具有扩张血管,降血脂及抗动脉粥样硬化, 抑制血小板凝聚及抗血栓形成,及保护心肌,增加冠 脉流量,抗菌消炎,抗肿瘤等作用.其有效成分可以 分为脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类.由于 产地,栽培及采收加工的差别,其质量常常差异大, 从外观形状看,有的主根粗大,分支及须根少;有的 须根多;有的皮层厚等等.这些性状的差异对丹参 收稿日期:2005—01-20 药材质量有无影响?尚没有研究报道.广州自云山 和记黄埔中药有限公司为了建立复方丹参片的原料 药材丹参GAP基地,对丹参主产地的丹参药材进 行了实地调查与样品采集,发现了栽培条件的差别 和丹参药材的形状等方面的差异,并进行了相关研 究.本文首次对丹参酮IIA和丹酚酸B在丹参药材 中的分布进行了报道,为丹参药材的GAP种植,切 制加工及合理入药提供了依据. 1仪器与试药 1.1仪器 Agilentl100系列高效液相色谱仪及工作站, 一 8 Agilent自动进样器,AgilentDAD检测器;ODSC18 色谱柱(10m,250mm×4.6ram);Met—TLER万 分之一及十万分之一电子天平. 1.2材料与试药 对照品丹参酮IIA,丹酚酸B购自中国药品生 物制品检定所,甲醇(色谱醇),美国Tedia公司;水 为双蒸水(自制). 不同来源的丹参药材样品均于2005年2月实 地采集于山东日照,安徽阜阳,河南南阳及洛阳等 地,样品采挖后,分别随机抽取1O株,或分成皮层和 木质部;或将芦头和须根剪下后,再等分为上下两 断,然后分别晒干,粉碎成粉末,阴凉处储存, HPLC分析用. 2方法与结果 2.1丹酚酸B与丹参酮IIA的含量测定 2.1.1色谱条件流动相为甲醇(A)-0.5甲酸 溶液(B)(15:85),流速1.0mL/min,梯度洗脱,洗 脱条件为:0430rain,A线性递增至9O%.检测波 长286nm.. 2.1.2对照品溶液的制备精密称取对照品适量, 置棕色瓶中,加7O甲醇制成含丹酚酸B和丹参酮 IIA的混合对照品溶液,即得(10C以下保存). 2.1.3曲线取混合对照品溶液,分别进样2 ,4,6,8,10tLL,按试验方法项下的色谱条件测定(" 一3),记录色谱图及峰面积.以混合对照品的进样 量(ug)为横坐标,色谱峰的面积为纵坐标,绘制标 准曲线,丹酚酸B:Y一1268.2X一36.26,r一 0.9996,线性范围0.124,0.622ptg和丹参酮 现代中药研究与实践2006年第2O卷第2期 ResearchandPracticeofChineseMedici— n— es IIA:Y一3682.7X一11.12,r一0.9998,线性范围 0.082,0.41g,在考察范围内其进样量与色谱峰 面积均呈良好的线性关系. 2.1.4精密度试验取混合对照品溶液5ffL,重 复进样5次,按上述实验方法项下的色谱条件测定, 其精密度分别为:丹酚酸B与丹参酮IIA的RSD 分别为0.89/6,1.49/6.表明本方法的精密度符合高 效液相色谱法定量分析的要求. 2.1.5重复性实验分别取样品5份,按含量测定 项下制备供试品溶液并测定,其5次测定结果的 RSD分别为:丹酚酸B,3.4;丹参酮IIA.1.7%. 结果表明,本方法的重复性符合要求,适合于样品中 丹酚酸B和丹参酮IIA的提取和HPLC分析. 2.1.6加样回收率实验取已测定含量的供试品 约0.5g,精密称定,精密加人适量的丹酚酸B和丹 参酮IIA的对照品溶液,按上述供试品溶液的制备 方法制备和测定,结果表明丹酚酸B和丹参酮IIA 的平均回收率分别为99.8.98.7,符合HPIC 的定量分析要求. 2.1.7样品的测定取样品粉末1.0g,精密称定, 精密加人95乙醇25mL,超声提取30rain,滤过, 将滤纸和滤渣一起再以5O%的乙醇25mL超声提 取30rain,滤过,将两次提取的滤液合并作为供试 液,供HPIc分析. 2.2丹酚酸B与丹参酮IIA在丹参中的横向分布 按上述方法分别测定不同来源的丹参药材的皮 层和木质部中丹参酮IIA和丹酚酸B的含量,每个 样品平行两份.结果见图1. (A.河南南阳,B.山东日照.C.安徽阜阳,D.河南南阳野生,E.河南洛阳) (A.Nanyang.B.Rizhao,C.Fuyang,D.Nanyang(wild),E.Luoyang) 图1丹参药材皮层和木质部中丹酚酸B(左图)与丹参酮IIA(右图)的含量 Fig.1DistributionofSalvianolicacidB(1eft)andTanshinoneIIA(right)inthecortexandxyle mpartofRadixSaIviaeMiltiorrhizae 图1结果表明,不同产地的丹参药材中丹酚酸B与丹参酮IIA的含量存在着差异,野生药材中的 层 踯__L??L-l___L ____ L ._ L 一___ L -..........L...........r........,.-..........L...........r...............L 76543210 层 腓-I:JI __JlI L?? 一?- ?? 现代中药研究与实践2006年第2O卷第2期 ResearchandPracticeofChineseMedicines 含量略高.除野生样品D外,所分析产地的丹参药 材中,丹酚酸B在皮层中的含量高,木质部中的含 量低,A样品中皮层丹酚酸的含量比木质部高出一 倍以上;丹参酮IIA则主要分布在皮层中,木质部中 含量甚微. ——0—— 2.3丹酚酸B与丹参酮IIA在丹参药材中的纵向 分布 按本文的样品测定方法,分别测定了丹参药材 的芦头,上端,下端和须根中丹酚酸B和丹参酮IIA 的含量.每个样品平行测定2次,其结果见图2. (A.河南南阳,B.山东日照?C.安徽阜阳,I).河南南阳野生,E.河南洛阳) (A.Nanyang,B.Rizhao,C.Fuyang,D.Nanyang(wild),E.Luoyang) 图2.丹参药材中纵向各部分中丹酚酸B(左图)与丹参酮hA(右图)的含量分布 Fig.2DistributionofSalvianolicacidB(1eft)andTanshinoneIIA(right)intheverticalpartsof RadixSaiviaeMiitiorrhizae. (A.Nanyang.B.Rizhao,C.Fuyang,D.Nanyang(wild),E.Luoyang) 图2结果表明,丹酚酸B和丹参酮IIA在丹参从其分布情况可以推出,脂溶性的丹参酮IIA 药材芦头中的含量均较低,在须根中的含量均较高,与水溶性的丹酚酸B均为丹参地上部分合成的,向 这两个成份在丹参根的纵向分布规律大体上呈现上下运输到根部,满足丹参生长发育的需要.其中,脂 端含量高,下端含量低的趋势.D样品中丹参酮的溶性的丹参酮IIA只能通过韧皮部纵向运输,不能 变化趋势与其他样品不同,表现出从上端到下端逐横向运输到木质部中去;而水溶性的丹酚酸B类成 渐升高的趋势,其下端根中丹参酮11A的含量比须份同样是通过韧皮部向下运输,同时,也能横向运输 根中的含量还高.到木质部. 3讨论3.2丹参活性成份的分布特点与丹参药材的GAP 3.1脂溶性成份丹参酮IIA与水溶性成份丹酚酸定向培育与采收加工 B的分布规律探讨药材中活性成份的积累和动态变化规律研究对 本文的研究结果表明,脂溶性的丹参酮IIA分于高质量高活性的中药材GAP栽培意义重大,根 布于丹参药材的皮层中,木质部中没有分布或分布据丹参药材中活性成份丹参酮IIA与丹酚酸B的分 甚微;水溶性的丹酚酸B在皮层和木质部中均有分布规律,在GAP栽培过程中,通过土壤条件及水肥 布,皮层略高木质部.在纵向分布方面,这两成份均条件的改变,促进丹参须根的生长和皮层的生长,以 以须根的含量高,芦头含量低,根的上端略高于下培育出高质量高产量的丹参药材. 端. 87654321O OOOOOOOO