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丙氨酸氨基转移酶.doc 丙氨酸氨基转移酶(ALT) 1(检测目的 丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测实验，确保检测结果的准确性和重复性。 2.标本采集 (1)ALT测定可以采用血清、肝素或EDTA抗凝血浆。 (2)稳定性:在室温(20?)可以保存48小时，在4?冰箱可保存l周，在 一25?以下可保存1个月。 (3)建议使用带分离胶的真空采血管，并及时分离血清。 3.测定方法 (1)方法:速率法 (2)原理: 在ALT速率法测定中酶偶联反应式为 A L T L一丙氨酸+α一酮戊二酸 丙酮酸+L一谷氨酸 ++L D H 丙酮酸+NADH+HL一乳酸+NAD+H0 2 上述偶联反应中(NADH的氧化速率与标本中酶活性呈正比，在340nm波长处，NADH呈现特征性吸收峰，而NAD+则没有。因此，可在340nm处连续监测吸光度的下降速率( - ?A,min)，计算出ALT的活性单位。 4.试剂 试剂 成份 实验深度 a-酮戊二酸NADH乳酸脱氢酶15mmol/l R (LDH) 0.18mmol/l ? ?5000U/L R Tris缓冲液(PH7.3) 100mmol/L ? L-丙氨酸 500mmol/L 5.校准 (1)校准物的准备与保存，严格按照购置说明执行。 (2)校准频率:?新仪器设备在开始使用时;?设备进行重要维护保养以及发生故障维修之后;?试剂盒在仪器上28天后;?试剂批号更改后;?更换试剂厂家后;?由室内质控结果决定;?定期校准，可由实验室根据检测系统(仪器与试剂)的情况自行决定校准周期。 6质量控制 (1)质控品:质控品应选择稳定、瓶间差小、基质效应小的物质。同时，因为是定量检测项目，所以应选择两个不同浓度水平的质控品，这样有利于在不同的医学决定性水平上监测方法的性能。 (2)质控方法的选择:备选的质控如下: 1(一个质控结果超出i?2SD为违背此规则，提示警告)。 2s 1(一个质控结果超过i?3SD为违背此规则，提示失控，存在随机误 3s 差)。 2(两个连续质控结果同时超过i?2SD，提示失控，存在系统误差)。 2s R(当同一批内高和低值之间差值超过4SD，提示失控，存在随机误差)。 4s 4(4个连续的质控结果落在X+ISD或X一1SD的同一侧，提示存在系统 1s 误差，需具体分析)。 lOx(10个连续的质控结果落在靶值的同一侧，提示存在系统误差，需具 体分析)。 各实验室可根据工作特点选择合适的质控规则(目前血清ALT测定至少 应选择1、1、2、R四个质控规则)。 2s3s2s4s (3)质控要求:必须所有浓度水平质控品结果在控，才可以对检验标本进 行检测。 7仪器 实验室可以选择各种常规的生化分析仪器，并根据仪器选择适用的丙氨 酸氨基转移酶试剂盒进行AI(T检测。 8(上机操作 校准程序、质控程序、操作程序均需要根据实验室所使用的生化分析仪器 自行建立，并严格依据生化分析仪的操作规程来进行校准、质控及常规操作。 9生物参考区间:0—45 U,L 建议各实验室建立自己的参考区间。 10(性能指标 试剂空白吸光度:A340mm?1.0(光径 1cm，340nm?20nm波长)。 试剂空白吸光度变化:?A/分?0.01。 准确度:相对偏差??10%。 批内精密度:异系数CV?5%。 批间精密度:批间相对极差?6%。 线性范围:0U/L-100U/L。 11(注意事项 (1)如果样本中ALT活力超出范围，则用生理盐水稀释样本，重测，结果乘以稀释倍数。 (2)若试剂空白吸光度<1.0，此试剂失效，不能使用。 (3)本试剂是一步法，为防止人血清内丙酮酸干扰，试剂加样60秒后测定为好。 (4)本产品公用于体顽皮诊断，内含叠氮钠，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。 (5)本产品应在2-8?条件下贮存。 12.抗干扰能力 :回收率在90,一110,之间; (1) (2)黄疸:样本黄疽会对检测结果产生一定影响; (3)脂血:甘油三脂达到11 3m,nol,L时有明显干扰; (4)溶血:红细胞内A【JT含量为血清中的几倍，应避免标本溶血。 13危急值大于500 u,L。 14医学决定水平 (1)20u,L:此水平在参考范嗣以内，低于此值可排除许多与ALT升高有关的病种，而考虑其他诊断。此值可作为病人自身A?的对照。与过去和(或)将来的值进行比较。 (2)60u,L:高于此值时，对可引起ALT增高的各种疾病均应考虑，并应进行其他检查以求确诊。 (3)300U,L:高于此值通常与急性肝细胞损伤有关，如病毒性肝炎、巾毒性肝炎、肝性休克等，而酒精性肝炎的ALT往往低于此值，其他如传染性单核细胞增多症、多发性肌炎等也都往往低于此值。