【2016年】乳癖散结片质量标准研究【临床医学论文】

【2016年】乳癖散结片质量标准研究【临床医学论文】 临床医学论文-乳癖散结片质量标准研究 【摘要】 目的建立乳癖散结片的质量标准。方法采用TLC法对处方中当归、川 芎、柴胡、赤芍、延胡索进行鉴别 ;用 HPLC法测定制剂中芍药苷含量。 结果 3批样品的TLC色谱中均能检出当归、川芎、柴胡、赤芍、延胡索; 芍药苷的 含量限度为不得少于1.00 mg/片。结论该方法简便可行，重现性好，可有 效地控制乳癖散结片的质量。 【关键词】 乳癖散结片; 薄层色谱; 高效液相色谱; 质量标准 Abstract:ObjectiveTo establish the quality of Rupi Sanjie Tablets. MethodsRadix Angelicae Sinensis, Rhizoma Chuanxiong, Radix Bupleuri, Paeonia lactiflora and Rhizoma Corydalis in the prescription were identified by TLC，Paeoniflorin was determined by HPLC.ResultsRadix Angelicae Sinensis,Rhizoma Chuanxiong,Radix Bupleuri, Paeonia lactiflora and Rhizoma Corydalis could be detected by TLC，The content limit of Paeoniflorin shouldn't be lower than 1.00mg per tablet.ConclusionThe established method is simple，feasible and reproducible.The quality of Compound Chaishao Tablets can be effectively controlled by the method. Key words:Rupi Sanjie Tablets; TLC; HPLC; Quality standard 乳癖散结片由夏枯草、川芎(酒炙)、僵蚕(麸炒)、鳖甲(醋炙)、柴胡 (醋炙)、赤芍(酒炒)、玫瑰花、莪术(醋炙)、当归(酒炒)、延胡索(醋 炙)和牡蛎11味中药经科学组方制成的复方制剂,具有行气活血，软坚散结的功 效。临床上主要用于气滞血淤所致的乳腺增生病，症见乳房疼痛、乳房肿块，烦躁易怒，胸胁胀满等。为有效地控制其内在质量，采用HPLC法对其主要药味赤芍所含的有效成分芍药苷进行含量测定，并对样品中当归、川芎、柴胡、赤芍、延胡索进行了薄层鉴别。 1 仪器与试剂 岛津10A(日本)高效液相色谱仪;延胡索乙素、芍药苷对照品及当归、川芎、柴胡对照药材均购自中国药品生物制品检定所。乳癖散结片(湖北李时珍医药集团有限公司,批号:2412001，2412002，2412003)。 甲醇为色谱试剂(特级)，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 薄层鉴别 2.1 2.1.1 当归、川芎的鉴别 取本品5片，除去包衣，研细，加正己烷25 ml，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至约1 ml，作为供试品溶液。另取川芎、当归对照药材各0.5 g,分别同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10 μl ,对照药材溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60,90?) 醋酸乙酯(9?1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而缺当归、川芎阴性对照则无此特征斑点。见图1。 2.1.2 柴胡的鉴别 取本品15片，除去包衣，研细，加甲醇40 ml，加热回流 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，置分液漏斗中，用三氯 甲烷振摇提取3次，20 ml/次，弃去三氯甲烷液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，加入等体积的氨试液，摇匀，放置使分层，分取上层液，减压回收正丁醇至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5 g，加乙醚30 ml，加热回流30 min,弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，加甲醇30 ml，加热回流30 min滤过，滤液减压回收甲醇至干，残渣加水15 ml使溶解，自“用水饱和的正丁醇振摇提取3次”起，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15 μl，对照药材溶液10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65?35?10) 10?以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显至少两个相同颜色的斑点。而阴性制剂对照溶液无此斑点。见图2。 2.1.3 延胡索的鉴别 取本品10片，除去包衣，研细，加浓氨试液1 ml，三氯甲烷25 ml，冷浸1 h，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷- 醋酸乙酯- 氨水(6?4?0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏，在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。而缺延胡索阴性对照则无此特征斑点。见图3。 2.1.4 赤芍的鉴别 取本品10片，除去包衣，研细，加乙醇40 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。 另取芍药苷对照品，加乙醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯- 甲醇- 甲酸(40?5?10?0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。而阴性制剂对照溶液无干扰，说明本法鉴别本制剂中赤芍具专属性，见图4。 图1 当归、川芎鉴别TLC图(略) 图2 柴胡鉴别TLC图(略) 图3 延胡索鉴别TLC图(略) 图4 赤芍鉴别TLC图(略) 2.2 含量测定 2.2.1 色谱条件Hypersil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm);甲醇-水(17?38)为流动相;检测波长为230 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为35?;理论塔板数(N) 按芍药苷峰计算为2500以上，拖尾因子为1.02。 2.2.2 方法 对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.01 mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备:本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml,密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，上清液滤过，取续滤液，即得。 测定方法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.2.3 方法学考察 阴性对照实验:按处方比例，照本品制备工艺，制备不含赤芍的阴性对照样品，再按供试品溶液配制方法制成阴性对照溶液，取10 μl注入液相色谱仪。结果阴性对照不干扰芍药苷的测定，色谱图见图5。 线性关系考察:精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.08 mg的溶液, 分别精密移取1，3，5，7，9 ml,定量稀释至10 ml量瓶中，作为芍药苷对照品溶液1,5号。精密称取芍药苷对照品溶液1,5号各10 μl进样，按上述色谱条件测定。以芍药苷峰面积Y为纵坐标，对照品进样浓度X为横坐标，进行线性回归，回归方程为Y=1.385 34×107X，r=0.999 7。结果表明，芍药苷进样浓度在0.008 ,0.072 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。 精密度实验:取同一供试品(批号2412001)溶液连续测定5次，芍药苷平均峰面积的RSD为1.32%。 稳定性实验:精密吸取供试品溶液(批号2412001)10 μl，分别于0，2，4，6，8 h注入液相色谱仪，测得芍药苷峰面积积分值，结果RSD为1.22%，表明样品供试品溶液在8 h内基本稳定。 a 缺赤芍阴性对照 b 芍药苷对照品 c 样品 图5 乳癖散结片芍药苷HPLC色谱图(略) 重复性实验:取样品(批号2412001)5份，分别按供试品的制备方法制备，依法测定，结果芍药苷平均含量为2.842 3 mg/g，即1.25 mg/片，RSD为0.26%。 加样回收率实验:取已知含量的样品(批号2412001)细粉9份于置具塞锥形瓶中，精密称定，分别精密移取芍药苷对照品溶液(0.19 mg/ml)3.0 ml(1, ，2.0 ml(4,6号) ，3.0 ml(7,9号)，按供试品的制备方法制备，依法3号) 测定。结果见表1。 2.2.4 样品的含量测定 取样品3批，按正文【含量测定】项下操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定结果见表2。 表1 芍药苷回收率结果(略) 表2 样品中芍药苷含量测定结果(略) 3 讨论 制剂中芍药苷测定条件，曾用《中国药典》?部赤芍药材中芍药苷测定方法， 发现芍药苷色谱峰分离度不佳，后选用甲醇-水(17?38)为流动相，分离效果理想,1，2,。 芍药苷测定供试品溶液的制备中，提取方法曾比较了温浸法，热回流方法和超声处理法，结果采用超声处理样品的效果较好。对提取溶媒进行了考察，结果以50%甲醇的含量最高，超声处理 (功率250 W，频率50 kHz)30 min,可基本提取完全。 【参考文献】 ,1, 国家药典委员会，中国药典，?部,S,.北京:化学工业出版社，2005:561. 2, 魏承志.高效液相色谱法测定胃力康颗粒中芍药苷含量,J,.中成 , 药,2003,25(2):165.