【doc】新生儿脐带血滤纸血斑sTSH酶联法和免放法测定结果的比较研究

【doc】新生儿脐带血滤纸血斑sTSH酶联法和免放法测定结果的比较研究 新生儿脐带血滤纸血斑sTSH酶联法和免放 法测定结果的比较研究 3讨论 蚤的专门食血性和嗜多次吸血等特征.使蚤在 患桶常温宿主上取营养时有染疫的可能陛,并刺激 鼠疫苗在蚤消化道中繁殖根据这一特性,用家鼠 苗株攻击黄胸鼠感染家鼠蚤;用野鼠菌株攻击太缄 鼠感染野鼠蚤均获得了稍意的结果,经检验明 饥饿蚤只要吸食了濒死动物尾血涂片镜检每视野达 l0,i00个鼠疫苗或濒死前0.5,lh的动物血液后 感染率几乎高达100",且各蚤种间最初感染率无 显着性差异(P>o.05).说明只要掌握好以下环节, 制备感染蚤就比较容易成功 感染家鼠蚤最好选用家鼠苗强毒株攻击家鼠疫 源地的主要宿主;感染野鼠蚤选用野鼠菌强毒株攻 击野鼠.由于鼠疫苗对其贮存宿主的适应?使发病过 程典型,便于观察 攻击动物使用鼠疫菌浓度及菌量应偏高(约为 LD.的50,100倍),菌株的毒力要强,最好事先通 过小白鼠.攻击动物的当天受次日必须分批饥饿跳 蚤 l 攻击动物的方法必皮下注射为佳,能使动舰发 病减慢,不致于急死,症状典型,便于观察 动物接种鼠疫菌后每天正常喂饲,要勤于观察 动物的发病情况,一日数次.重点观察时间在攻毒后 第3d,4d,5d,为政血症形成高峰期 投蚤时机一定要掌握好.这十分重要,要在动物 处于啦血症濒死前0.5,lh左右投蚤为宜,此时动 物尾血辣片镜检每视野有l0,100十鼠疫苗,这是 鼠疫败血症的重要指标,但根据我们的经验,尾血涂 片需要剪破鼠尾端,由于疼痛加剧颧死动物的死亡. 对蚤的感染不利,故投蚤时机选择动物濒死前0.5 ,lh为佳,具体时间一般在攻毒后3,5dt可观察到 患鼠耸毛,眼内湿润,继而流泪,眼睛半睁半闭,摄食 减少t行动迟缓,继之不能动弹t倒下,唯有喘息,此 时投蚤感染率最高达i00%.反之,如投蚤时间过早 (鼠未处于濒死状态),投蚤后鼠数目不死.且异常恬 跃,似乎完垒摆脱了苗血定,那么谈批蚤的感染蜜几 乎为零这可能与大批蚤叮咬吸血的强烈刺激及 古有鼠疫苗及代谢产物的血液被吸人多丑蚤胃.故 使动物的症状得以缓解所致. 制备感染蚤攻击动物的数量要多,这可弥补夜 间鼠发精死亡无法投蚤的弊端,蚤必颓分多批饥饿, 以便一旦有鼠濒死可随时投蚤,鼠最好用铁墼笼或 脖圈固定.以防跳蚤被鼠吞食. 供试蚤若无特殊要求时.撮好选用成蚤感染,不 用幼蚤,固幼蚤尚未成熟感染率较低 值得一提的是在实验工作中常常需要用小白鼠 代替其它宿主动物感染跳蚤,困小白鼠个体小.发病 不典型,感染鼠疫菌后往莅围鼠毒素中毒而死亡,使 投蚤进机不易掌握,建议增大攻击菌量(3000万,l 亿个菌/ml比浊浓度,每只0.5m1).增加攻毒动物 数(s,1O只),严密观察,提高投蚤时机的准确 性. 膜饲养方法是一种感染跳蚤的良好方法.其优 点是:攻击菌量可^为控制,对某些要求较高的实验 可首选此法.本法用于^蚤的感染已获得成功.并可 推广运用于其它蚤的感染,怛跳蚤在正式感染前 必需用膜饲养法正常养殖一段时间,使蚤对该法养 殖加适应总之,只要掌握好上环节.蚤的感染 定能成功 4参考文献 1何晋候,等.中华流行病学杂志,1989,特刊号l0:86 2曾静凡,等.对剖川鼠疫自然痉源地宿主功物的研究 I.六种野鼠对鼠疫菌的感受性和敏感性.中华流行病 学杂志编辑部,1985,鼠疫论文专辑(日):58. 3孙懦泳,马德三,译.跳蚤传播鼠痤,吉林省地方病第一 防冶研竞所tl卸,160. {1997—08一o5收稿?1997一l1—20修回) [编辑宝建喜] yt43新生儿脐带血滤纸血斑sTsH酶联法辱州2 和免放法测定结果的比较研究R; 萎喜善辜望羹辫锦何萌栅光I福建省南平市卫生防疫站周海,『f.I. 中国地方病防溏杂志1998年第13卷第2期 药盍和ELISA法药盒各自的特点,分别制备了同一 个体的国产和SS903#滤纸的脐带血滤纸血斑,应 用IRMA和ELISA法对其sTSH含量进行了测定. 1材料与方法 1.1材料 受检者为南平市第一医院妇产科分娩的新生 儿.分别采用中国原子能研究院提供的栗血滤纸和 国际通用的筛查滤纸((SS903#)在新生儿断脐后 lSmin内采集脐带血,共129对,自然干燥后.低温 保存待测 1.2方法 应用中国原子能研究院提供的B.STSHIR- MAKit,澳大利亚Bioelone和莽兰Lsystems公 司提供的NeonatalTSHELISA药盒对同一个体不 同类型滤纸进行检测sTSH.IRMA法测试仪器为 北京二六一厂生产的FT一63O微机多探头放免测 量仪ELISA法测试仪器为EL312e酶标读数仪,并 运用MuItcale软件控制酶标读数仪进行全自动读 数. 1.3质量控制 测定过程均带入相应药盒的质控样品进行质量 控制 1.数据统计 运用SPP/PC一.HG.WP软件进行数据处理. 2结果与分析 新生儿脐带血滤纸血斑sTSHIRMA法和 ELISA法测定结果的数据分布正态性检验,见表1. 表1sTSH测定数据的正态性检验 从表l可以看出,应用TRMA法和ELIsA法对 新生儿脐带血滤纸血斑sTsH的测定数据正态性检 验显示其偏态系数均大于0,呈正偏态分布.这与作 者对静脉滤纸血斑的测定结果一致综台对脐带血 和静脉血撼纸血斑的测定结果.可以认为滤纸血斑 sTSH测定数据均是呈正偏态分布.因此.对其数据 集中趋势的表述宜用中位数 一 82一 不同方法新生儿脐带血血斑sTSH测定结果比 较.见表2 表2IRMA法和ELISA法对血斑 sTSH测定(mlu/L) 往r()内为倒敢.tIRMA往中位敦与ELIS^怯(芬兰)中冲也敦 比较P<001ltIRMA怯中位敷与EL敦LSA{壹(2奥太利 亚)中世敷比较P<005,…ELISA{壹(芬兰)与ELIS^往 {溴j:利亚)中世敦比较P<0.01. 从表2可"看出.对同一个体国产滤纸和 SS9O3#滤纸的样品,分别用IRMA法和ELISA法 检测其sTSH,则IRMA法的结果要高于ELISA法 (芬兰)的结果,这与我们以往的报道基本一致…. 为了进一步探讨不同ELISA法药盒生产厂家 其产品对同一个体检测结果的影响,在车次实验中 作者分别应用芬兰L曲systems公司和澳大利亚 Bioc]one公司生产的药盒对同一份SS903#样品进 行丁检测,结果表明.不同厂家的药盒对同一个体检 测的结果是不一样的.本攻实验澳大利亚生产的药 盒检测结果要高于芬兰生产的药盒.说明这两个厂 家所建议的新生儿全血sTSH阳性结果临界值(芬 兰Labs~tems公司10mIU几,澳大利亚Bloclone 公司20mIU/L)有药盒本身的实验环境,因此,在实 际ELISA法应用过程中各实验室应制定不同药盒 的阳性临界值. 新生儿脐带血滤纸sTSH检测lRMA法和 ELIsA法的关系IRMA法与ELISA法(芬兰 Labsystems药盒)呈正相关关系.相关系数,一 o.554.直线回归分析所得的回归方程为^I倍= =0.32+0.50X^,将IRMA法的结果5mIU,L, 10mlU/L代入上述方程,则所得的ELISA法结果 分别为2.82mIU/L,5.32mIU/L,IRMA法结果高 于ELISA法(芬兰)接近两倍.这与我们以往所作的 结果基本一致】. IRMA法与ELISA法(澳大利亚Bioc]one药 盒)的关系两者呈正相关关系.相关系数r一 0.518.直线回归分析所得的回归方程为 ElJ^r^一1.91+O.52Xm将IRMA的结果 5mlU/L,10mlU/L代入上述方程.则所得的 绷岔侍肉够 中国地方病防治杂志1098年第l3卷第2期 ELIsA法结果分别为4.51mlU/'L,7llmIU/'L两 者基本相同,此结果与我们对静脒血斑sTSH测定 结果基本一致. 应用ELISA法芬兰Labsystems公司药盒与禊 大利亚Boiclone公司药盒ELISA法测定结果的关 系两者也呈正相关,,一0.429,直线回归分析所建 立的回归方程为拿t一o.41+o.39Xc{.将澳大 利亚公司的结果5mlU/L,10mIU/L代八上述方程, 则芬兰公司的结果分别为2.36mlU/L,4.31mlU/L: 基本上是倍数关系,该结果也说明对于新生儿脐带血 sTSH(全血)的测定IRMA法和ELISA法(澳大利亚 药盒),其结果基本上趋于一致,而应用芬兰Labays— tems公司则不然,这进一步说明了每十实验室应建立 不同生产厂家生产的药盘的稿界值 3小结 本次实验证实了无论喂MA法还是ELISA法 对新生儿sTSH(全血)的测定数据均呈正偏态分 布.宜用中位数进行统计;其扶,在分析了应用IR MA法和ELISA法对同一样品的检测数据后.建立 了两法之间的回归方程,提出了两法的切点值,并认 为在应用ELISA法时应注意不同药盘生产厂家的 阳性结果临界值,为今后碘缺乏病监测和广搓开展 新生儿甲l扰腺机能低下症的筛查提供了实验室依 据 d参考文献 i陈志辉.何萌.林曙光.酶联法和免放法对新生儿脐带 血穗纸sTSH烈定结果的分析中国地方病防治杂志, 1996,1l{3):156. (1997一l0—1O收稿?1997—12一O8修回) ;一鼠疫菌在蚤体内的适应过程 宁夏回族自治区地方病防治所型d 宁夏回族自治区卫生学校l俞红 在自然界鼠疫的流行过程中,蚤感染鼠疫是经 吸入苗血或畋血症期哺乳动物(通常是啮齿动物)的 血鼠_麈菌侵入蚤体内只生存于消化遭,而不侵犯其 它器官….通常细菌不能在前胃和中胃中存活.对 鼠疫菌可能是它自身毒力因子的协同保护因为在 吸血蚤胃中最韧的消化过程包括了胃蛋白酶和肚 酶,以及前胃和中胃的胃刺的机械作用0.同时也作 用破坏血细胞.这种捎化过程也为鼠疫苗进一步的 繁殖提供了营养丰富的液体环境及必需的氪基酸 这时pH值中性或偏酸(pH6~7),为鼠疫苗PsaA 基因的表达提供了环境条件,也为下一步侵入宿主 后抗吞噬作用奠定了基础. 1染色体Hms系统的作用 对鼠疫菌.铁离子的获得嵌定着能否在蚤体内的 繁殖因为鼠疫菌为异营性细菌,在蚤体内生存繁殖的 营养来源是依靠对血液的消化在低于3oc的环境温 度下,鼠疫菌能表达血红素贮存系统(Hms表型),促 使吸附大量外源性高铁血红素.血红素至一较小区域, 吸附无机铁刭外膜.在蚤体内和栓塞蚤的前胃中 [编辑杨丽芬] -7-. 幸存的鼠疫菌表达这一系统0.栓塞对在哺乳动物间 的传播起着关键性的作用,决定着传播的效能.但外界 环境中的温度及湿度影响着菌樘的形成.在80"左右 的湿度条件下,当温度升高时,菌栓的形成速度加快, 但苗栓蚤的存活毒命缩短.尽管在蚤的前胃中富集着 高铁血红素,血红素和无机铁离子,Hms的鼠疫菌可 能仍然缺乏铁离子在一定的区域内.由于吸附在外膜 上,使得营养性的铁离子不能干9用.铁离子缺乏的鼠疫 菌能大量台成含铁细胞依赖铁转运系统:F~vIWPt, l胛P和其杆菌素的受体IrPc(由PSn基因编 码)….在26?,5种铁反应蛋白披表达,而不是在 37?.但26c铁转运系统的合成并不是特异性的.最 终高铁血红素的利用系统可能被表达在蚤体内,而不 同于非营养性的Hms系统.与其它致病性的肠道耶尔 森氏菌相比,鼠疫菌不能获得铣从其它含铁的细胞中 如:肠杆菌素或血红素B0.这些系统为保持鼠疫菌生 命的密闭循环,保护营养性竞争与其它菌起着决定性 作用蚤叮哎的周围组织构成一十铁螯台的环境对^ 侵的细菌.当进入哺乳动物局部皮下,这种26c温度 调节铁传运机铷已停止,而新的37?高铁血红素利用 一 83—