Vam3对小鼠呼吸道非特异性炎症模型气道高反应影响

Vam3对小鼠呼吸道非特异性炎症模型气道高反应影响 Vam3对小鼠呼吸道非特异性炎症模型气道 高反应影响 【摘要】目的,利用非特异性炎症小鼠模型来探讨二苯乙 烯化合物Vam3扩张气道的效果。方法,小鼠用伴清蛋白腹 膜内致敏,然后气管内发敏。在首次发敏后24小时用Vam3 进行治疗,地塞米松治疗组、生理盐水组及不作处理的空白 对照组作为对照。Vam3的评价主要是对过敏性气道高反应 性、肺组织学特征的影响。结果,与盐水对照组相比, Vam3 可有效消除气道高反应性,肺组织学特征显示, Vam3可以 减轻炎症和减少粘液分泌。结论,中药有效成分Vam3具有 抗气道高反应性,扩张呼吸道的作用,可以用于COPD、哮 喘等气道炎症的治疗。 【关键词】Vam3,过敏性哮喘的小鼠模型,气道高反应 性 The effects of Vam3 on suppressing airway hyperreactivity in a murine airway inflammatory model 【Abstract】Objective: The goal of this study was to investigate the inhibitory effects of Vam3, anti airway inflammation in a well-characterized mouse airway 1 inflammatory model.Methods: Mice sensitized intraperitoneally and challenged intratracheally with conalbumin were treated with Vam3. 24 hours after the first intratracheal challenge.Dexamethasone-treated,saline solution sham-treated,and naïve mice served as controls. The effects of Vam3, on inflammatory airway hyperre-activity, inflammation, lung histologic features were evaluated.Results: Vam3 treatment virtually eliminated airway hyperreactivity and remarkblely reduced the total numbers and percentage of eosinophils in bronchoalveolar lavage fluids compared with the sham-treated group. Lung histologic features showed that Vam3 reduced inflammation and mucus production.Conclusion: Vam3 exhibits anti-airway hyperresponsiveness, They relax the muscles surrounding the narrowed airways. This allows the airways to open wider, making it easier to breathe again COPD和哮喘是一类发病率、致残率及病死率极高的疾 病。据世界卫生组织估计,至2020年,COPD和哮喘可能 上升为世界第三大致死病因。我国40岁以上人群中,COPD 总体患病率为8.2%,目前约有4000万人罹患此病,每年死 于COPD的人数超过100万,其死亡率,17.6%,已经超过 2 冠心病,15%,成为我国主要致死性疾病,形势不容乐观[1,2]。 临床上,推荐的COPD、哮喘的治疗以糖皮质激素和长效B2受体激动剂联合应用为主,但是由于吸入药物的价格较高,激素使用的依从性差,我国接受规范治疗的人群比例不到5%[3,4]。 该实验的目的是用小鼠模型来评价化合物Vam3对于嗜酸性粒细胞性炎症和抗原诱导的气道高反应的作用。Vam3是从山葡萄根(Vitis Amurensis Rupr,)提取的二苯乙烯低聚体类化合物。山葡萄主要生长在中国的中部和东北地区,在民问用其根和茎治疗炎症性疾病。我们以往研究发现,从山葡萄根提取的Vam系列化合物,如Vam3、Vam4和Vain21等均具有相似结构和抗炎作用。 1材料和方法 小鼠和药物 雄性balb/c小鼠,6周龄,购自潍坊医学院实验动物中心。伴清蛋白,CA,、刀豆素A,ConA,、地塞米松和二硝基苯,DNP,结合的清蛋白购自Sigma公司。ELISA用抗体购自Binding Site 和PharMingen公司。抗DNP IgE、IgG2a、IgGI购自Accurate Scientific公司。 Vam3由中国医学科学院药物研究所制备并提供。 抗原致敏、发敏及治疗 将200ug的CA和2mg的清蛋白溶解在0.3ml的PBS 3 中,给小鼠腹膜内注射,共两次,间隔一周,如图1所示。第二次致敏7天后,将小鼠麻醉,用含100ug CA的0.05mlPBS气管内用药来发敏,在20天和30天时用2倍剂量进行发敏试验。初次发敏24小时后,Vam3按50mg/kg每天灌胃1次,连续17天。地塞米松治疗组每天腹膜内注射0.5mg/kg地塞米松进行治疗。盐水对照组每天腹膜内给予盐水进行处理。未处理组同其它对照。 迟发相气道反应的测定 最后一次发敏后3天,静脉内注射乙酰胆碱后测定气道压力变化来反应气道应答情况。小鼠用戊巴比妥麻醉并用气管插管,18号,保持呼吸道畅通,用RSP1002型压力可控呼吸系统保持每分钟120次呼吸,潮气量恒定,0.2ml,。静脉内注射十烃溴铵,25mg/kg,来诱导肌肉松弛。在气管插管上连接压力转导器来测定气道压力。当气道压力稳定2分钟后,静脉内注射乙酰胆碱,50ug/kg,。用VENTP软件系统观察并记录4分钟的气道压力变化。参照气道压力,时间指数,APTI,(每秒厘米水柱)计算气道压力峰值的时间,组合变化,用来反应气道应答反应。 气管灌洗液的制备和细胞分类计数 气道应答测量结束后,杀死小鼠并用1.0ml的不含钙镁的冰浴预冷的HBSS灌洗肺脏,灌洗液收集到预冷的试管中,1000g 4?离心10分钟,细胞总数用血细胞计数器测定。 4 用Diff-Quik系统染色后每张细胞片显微镜下计数500个细胞的方法进行细胞的分类计数。 1.1组织学检查 实验组小鼠,每组4只,尸检后主要脏器用中性福尔马林液固定。脏器5um石蜡切片用苏木素伊红和过碘酸,席夫试剂染色后显微镜检查。 1.2统计学分析 实验数据用SigmaStat 2.03统计软件进行处理。除BALF的细胞总数外,APTI的结果,BALF的嗜酸性粒细胞的百分比均通过检验。各治疗组之间的差异由ANOVA决定。当ANOVA检验显著性为P Vam3对抗原诱导的肺部炎症的作用 为确定是否抑制AHR后伴有炎症减轻,我们测定了气管灌洗液中的细胞总数和嗜酸性粒细胞的百分比。细胞总数在Vam3治疗组和地塞米松治疗组显著盐水处理组。Vam3治疗组和地塞米松治疗组之间差别没有统计学意义。尽管未处理组小鼠的气管灌洗液中没有嗜酸性粒细胞,但在抗原致敏并发敏的盐水处理组小鼠气管灌洗液中却含有44%的嗜酸性粒细胞,Vam3治疗组和地塞米松治疗组的气管灌洗液中 5 嗜酸性粒细胞均明显减少,与盐水处理组相比,P 6