血清胆红素测定方法探讨

血清胆红素测定方法探讨 血清胆红素测定方法探讨 血清胆红素测定方法探讨 马雅琴,河口胜惠,山本诚一 (1.上海职工医学院,上海200237;2.川崎医科大学附属医院,日本冈山712—8052) V0I.2320o5No.20 摘要:选用Jendrassik—Grof法,酶法和氧化法测定血清中胆红素并作比较,结果显示酶法和氧化法测定血清胆红素精密 度高,相关性好,可信度高,操作简便.氧化法更显示出不受其它因素干扰,价格较酶法低,试剂不用调制的优点,可作为胆 红素测定的首选推广方法. 关键词:胆红素;酶法;氧化法 中图分类号:R446.11文献标识码:B文章编号:1671—1246(2005)20—0092—02 血清中胆红素是(由衰老红细胞经网状内皮系统的破坏由 肝脏转化通过肠道排泄的)体内血红素的代谢产物,分子量为 584,65D.L,分子式CHN,O,化学分类属四吡咯胆红素,在血 液中为单葡萄糖醛酸和双葡萄糖醛酸衍生物,其含量的变化对 疾病的诊断具有重要意义【1】. 血清胆红素测定通常用Malloy—Eve—Lyn及Jendrassik— Grof等法.这些方法都是胆红素与重氮化合物氨基苯磺酸反应形 成显色产物,安息香酸等作催化剂与间接胆红素反应【3—1.这些方 法容易受溶血等因素影响[S-a].近年开始使用酶法州和氧化法【s., 测定血清总胆红素和直接胆红素,本实验对此作了初步探索. 1材料方法 1.1标本 管理用血清(市售),自制混和血清. 1.2测定仪 日立725O一自动化分析仪. 1.3试剂,方法和原理(见1) 表l3种方法的试剂及反应原理 2结果 2.13种方法同时再观性 自制混和血清(高值为原有血清,低值为1:10稀释血清) 的变异系数见表2.其中低值和高值标本血清各取3O只,每日 早上1O:oo测定一次,连续测定2O天. 表23种方法的同时再现性 2.23种方法的日差再观性 自制混和血清的变异系数见表3.即低值,高值标本血清各 取2O只,1天测定2次,连续测定2O天. 一 92一 表33种方法的日差再现性 2.3Jendrassik—Gr0f法的相关国(见国1) 鬻璃鹤^…^一^_……-- 总胆红索(T)直接胆红素(D) 图1Jendrssik—Grof法和酶法,氧化法的相关比较 2.4干扰物质的影响(见国2) 溶血因素影响:Jendrassik—Grof法用血红蛋白500mg/d1. 总胆红素(T)有55%的正误差,误差存在表示有影响.酶法用维 生素C,存在约30%一50%的负误差,也有影响.氧化法用血红 蛋白及维生素C作干扰物质基本无误差,几乎无影响. 蜜謇?n?自?n?自 血红蛋白 _Joadt,mlt—m瞳_一?一?? 墓蜃蚕?,?c_ 维生素 图2干扰物质的影响 3讨论 (1)Jendrassik—Grof法测定精密度cv(%)T(总胆红素)为: 0.00—0.56;D(直接胆红素)为:0.00—0.00.干扰物质的影响: T——血红蛋白500mg/dl约有55%的正误差存在,有影响;D 无误差.无影响. (2)酶法测定精密度cv(%)T为:0.00—0.24;D为:0.O0— 0.79.相关性回归式相关系数:T:Y=1.016x.0.079,r=1.000; D:Y=1.037x-0.131.r=0.097.干扰物质的影响:T——维生素 C(500mg/d])约有33%的负误差存在,有影响;D无误差,无影 响. (3)氧化法测定的精密度cv(%)T为:0.O0—0.68;D为: 0.00,0.94.相关性回归式相关系数:T:Y=1.032x.0.033,r= 0.999;D:Y=0.976x+0.043,r=0.0998.干扰物质影响:T与D 都无误差,无影响. 上述结果表明3种方法测定血清胆红素与直接胆红素的 精密度和相关性都非常好.但比较起来,酶法与氧化法不受干 扰物质影响,精密度高.而酶法与氧化法2者比较,氧化法对2 种干扰物质均无影响,精密度更高,而且在价格上较酶法低,具 有相同的效果及应用价值,是临床测定总胆红素的首选方法. 通常胆红素测定存在的误差因素有物的问,检体自 身的问题,测定问题3大因素,本实验标准物用的为同一标准 液,所以相关性也比较好.检体用的管理血清和自制混和血清 也没有问题.然而胆红素受到光照易分解,特别是直射日光照 胆红素1个小时,测定值约下降30%一50%,测定中应注意克 服这类因素. 参考文献: [1]杉本元信.VII色素(1)胆红素IJ】.综合临床,1985,34(增刊号): 381. [2]山本俊夫.胆红素IJ】.日本临床,1980,38(春季增刊):192. [3]高阪.血清胆红素测定的误差IJ】.临床检查,1985,29(4):654—662. [4]高阪彰.血清胆红素的存在形式IJ】.检查与技术,1986,14(8):971— 975. [5]谷口英人.有关胆红素测定值的因素[J】.日本ll蠡床,1985,43(8):86— 90. [6]山田正明.血清中胆红素测定的问题IJ】.1985,43(8):57—62. [7]长裕子.总胆红素,直接胆红素测定IJ】.最新检查,1987,5(1):39— 4_4. [8]德田帮明.氧化法测定胆红素的新规定法IJ】.1l蠡床化学,1993,(22): 116—122. [9]中林彻雄.氧化法测定胆红素试剂的研究IJ】.医学检查,1995,45(5): 881885.A 蟾蜍脊髓前角运动神经细胞制备方法的改进 任丽丽 (首都医科大学顺义校区,北京101300) 关键词:蟾蜍;脊髓前角运动神经细胞;横切脊髓压片法 中图分类号:Q一33文献标识码:B 文章编号:1671—1246(2005)20—0093—01 细胞生物学是生命科学领域中一门新兴的前沿学科,和医 学生物学一样,实践性非常强,而实验教学又是必不可少的重 要环节.观察蟾蜍脊髓前角运动神经细胞是细胞形态观察中具 有代表意义的实验之一.为使学生在实验课中制作出好的标 本.我们把过去的方法做了改进,获得了理想的效果.此方法简 单,学生易于掌握,且缩短了时间.现将具体操作介绍如下. 1材料与方法 取蟾蜍1只,用探针毁碎脑,从口裂处剪去脑,除去延脑, 剪开椎管.小心地把脊髓取出来放在平皿内.用配置的Ringer 氏液冲洗.然后将其放在玻片上,用新的剃须刀片横切0.1em 厚的脊髓小片.用镊子将脊髓小片平铺在载玻片上.再用另一 张玻片压盖在上面,挤压,最后把上面的玻片取下得到压片,在 压好的片子上滴甲苯胺兰染色8分钟,盖好盖片,用吸水纸吸 去多余的染液即可. 2结果 过去,我们通常采用的方法是把取好的脊髓先弄碎后在镜 下观察,效果不够满意.现在用上述方法制作的脊髓压片.由于 是横切,保持了脊髓原有的形态,学生可以根据形态找到脊髓 前角的位置,然后再将物镜对准前角处即可找到脊髓前角运动 神经细胞. 3讨论 经过对比剪碎和横切脊髓2种制片方法,我们可以看出, 将脊髓剪碎后制成标本,由于脊髓组织结构已被破坏.运动神 经细胞分散存在,可供观察的细胞数量少,学生寻找细胞进行 观察比较困难,即使看到神经细胞也不能马上确定,所以看片 时间长;而横切脊髓制片保持了脊髓结构的完整性,且神经细 胞比较集中,学生可很快根据形态找到观察的位置.综上所述, 用横切脊髓压片法观察运动神经细胞优于剪碎法.它大大提高 了学生的观察效率和质量.A 一 93—