高效液相色谱法测定睡安口服液中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量.doc

高效液相色谱法测定睡安口服液中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量.doc 高效液相色谱法测定睡安口服液中酸枣仁 皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量 【摘要】 目的为睡安口服液建立专属性酸枣仁皂苷A和酸枣 仁皂苷B的含量测定方法。方法采用高效液相色谱(HPLC)法， 蒸发光散射检测器(ELSD)检测。结果睡安口服液中酸枣仁皂苷A 在0.928,4.604 μg范围内线性关系良好，酸枣仁皂苷B在0.468, 2.340 μg范围内线性关系良好, 酸枣仁皂苷A回收率为97.6%，RSD ,0.9%;酸枣仁皂苷B回收率为97.5%，RSD,1.9%。结论该 HPLC法可做为睡安口服液中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量 测定方法。 【关键词】 睡安口服液;酸枣仁皂苷A;酸枣仁皂苷B;高效液 相色谱法 Abstract:ObjectiveTo develop a special method to determine the contents of jujuboside A and jujuboside B in Shuian Oral Liquid.MethodsHPLC was adopted with Kromasil C18 column as analytical column. ResultsThe linear range of jujuboside A was 0.928, 4.604 μg.The linear range of jujuboside B was 0.468,2.340 μg.Recoveries of jujuboside A and jujuboside B were 97.6% (RSD=0.9%) and 97.5% (RSD=1.9%).ConclusionThis method can be used for determining the contents of jujuboside A and jujuboside B in Shuian oral liquid Key words:Shuian Oral liquid ; Jujuboside A ; Jujuboside B; HPLC 睡安口服液(现名睡宝口服液)是黑龙江省药学研究所研制的专 利新药，其主药为酸枣仁。酸枣仁具有镇静安神，养心安血，治疗 失眠等功效。为控制该制剂的质量，本实验建立了一种简单快速的 HPLC法，可同时测定主药中有效成分酸枣仁皂苷A (jujuboside A ) 和酸枣仁皂苷B(jujuboside B)的含量，为其质量标准的制 定提供依据。 1 仪器与药品 Waters 600E型高效液相色谱仪;Millennium32 色谱工作站数据处 理系统，均为美国产;蒸发光散射检测器(ELSD)为德国安捷伦公 司产。酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B对照品购自成都思科华生物技 术有限公司，用归一化法测定纯度均大于98%;甲醇为色谱纯;水 为高纯水;其他试剂均为分析纯;睡安口服液样品由黑龙江省药学 研究所提供。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm×200 mm,5 μm)，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相为甲醇-水-冰醋酸(70?30?1);流速为1.0 ml/min;柱温25?;ELSD氮气流速2.0 L/min;漂移管温度94?;理论板数按酸枣仁皂苷A峰计算应不低于200,1，2,。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取酸枣仁皂苷A对照品4.6 mg，酸枣仁皂苷B对照品 2.3 mg，置同一10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物5.0 ml，加入5.0 ml蒸馏水，混匀，用水饱和正丁醇萃取5次，10 ml/次，合并正丁醇层，用正丁醇饱和氨水溶液洗涤两次，20 ml/次，取正丁醇层蒸干，残渣用甲醇溶解，定容于5 ml量瓶中，摇匀，静置，过0.45 μm微孔滤膜，即得。 2.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10 μl，按上述色谱条件进行测定，以对照品进样量为纵坐标，峰面积积分值为横坐标绘制标准曲线，结果明，酸枣仁皂苷A在0.928,4.640 μg，酸枣仁皂苷B在0.468,2.340 μg之间均有良好的线性关系，回归方程分别为:Y=1.396 4X+11.674 5(r=0.999 5);Y=1.450 4X+11.360 4 (r=0.999 6)。液相图谱见图1,4。2.5 精密度实验 精密吸取对照品溶液5 μl，按含量测定项下色谱条件，连续进样5次，分别计算其峰面积值的RSD，结果酸枣仁皂苷A RSD,1.6%，酸枣仁皂苷B RSD,2.4%。 2.6 稳定性实验 精密量取供试品(批号050309)5.0 ml，按含量测定项下制备供试品溶液。每隔2 h进样1次，进样量10 μl，测定5次，结果酸枣仁皂苷A及酸枣仁皂苷B的RSD分别为2.2%和2.6%。 2.7 重复性实验 精密量取同一批号(批号050309)供试品5份，按含量测定项下方法制备供试品溶液和测定(见表1)。数据表明，本方法重现性较好。表1 重复性实验数据(略) 2.8 回收率实验 精密量取供试品(批号050309)、蒸馏水和对照品溶液(含酸枣仁皂苷A 0.464 mg?ml-1，酸枣仁皂苷B 0.234 mg?ml-1)。先将对照品溶剂挥干，再用水溶解与口服液混匀，并用10 ml水饱和的正丁醇萃取，然后按供试品溶液制备方法操作，制备供试液，按含量测定项下色谱条件测定。结果见表2。表2 回收率实验数据 (略) 5份样品，酸枣仁皂苷A平均回收率为97.6%，RSD,0.9%;酸枣仁皂苷B平均回收率为97.5%，RSD,1.9%，该法回收率较高，方法可靠。 2.9 供试品测定 取睡安口服液3批，上述方法测定。结果见表3。表3 3批样品含量测定结果(略) 3 讨论 《中国药典》(2005版)没有收载酸枣仁单味药材的含量检测方法，文献报道酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量测定也较少，主要方法有薄层扫描法、一阶导数分光光度法等。由于高效液相色谱法常用的紫外(UV)检测器不利于皂苷类成分的检测，本实验选用蒸发光散射(ELSD)检测器进行检测，建立的 HPLC,ELSD法简便准确。 黑龙江省药学研究所提供的睡安口服液含酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B总量的平均值为0.3375 mg?ml-1，批间差异较小,说明制备工艺稳定。 【