HPLC法测定黄连解毒汤传统汤剂与配方颗粒中盐酸小檗碱和黄芩苷含量的研究

HPLC法测定黄连解毒汤传统汤剂与配方颗粒中盐酸小檗碱和黄芩苷含量的研究 HPLC法测定黄连解毒汤传统汤剂与配方 颗粒中盐酸小檗碱和黄芩苷含量的研究 ? 14'虫国理岱垫塑廑垫!堡箜鲞箜塑』 HPLC法测定黄连解毒汤传统汤剂与配 粒中盐酸小檗碱和黄芩苷含量的研究 梁盈军舒洁倩 M0dDrugAool,Feh2011.Vo1.5.No.4 方颗 【摘要】目的建立HPLC法测定黄连解毒汤传统汤剂与配方颗粒中盐酸小檗碱与黄芩苷含量的 方法.方法色谱柱:C180DS反相色谱柱;流动相:甲醇一乙腈一0.4%磷酸(5O:45:5);流速:1.0mL/ min;检测波长:314nm;柱温:25?.结果盐酸小檗碱,黄芩苷分别在0.05,1.1me,/ml(r=0.9997), 0.06,1.3m(r=0.9998)范围内呈良好的线性关系.所测6组黄连解毒汤传统汤剂中盐酸小檗 碱,黄芩苷的含量平均值分别为0.789mg和1.79mg,6组黄连解毒汤配方颗粒中盐酸小檗碱与黄芩苷 的含量平均值分别为1.16mg和2.10mg.结论结果明黄连解毒汤传统汤剂与配方颗粒中盐酸小檗 碱和黄芩苷的含量均以后者较高. 【关键词】黄连解毒汤;传统汤剂;配方颗粒;盐酸小檗碱;黄芩苷;HPLC DeterminationofBerberineandBaicalinbetweenTraditionalDecoctionandDispensingGr anuleof HuanglianJieduDecoctionbyHPLCLIANGn,SHUfie— qian.Guangdongprovincialhospitalof TCM,Guangzhou510120,China 【Abstract】 ObjectiveEstablishedHPLCmethodforthedeterminationHJD(Huanglia.jieduDecoc— tion)traditionaldecoctionreadyfordecoctionanddispensinggranuleofberberineandbaicalincontentofthe method.MethodsChromatographiccolumn:C180DSReversed-phasechromatographycolumn;Mobile phase:methanol—acetonitrile一 0.4%phosphate(50:45:5);velocity:1.0ml/min;detectedwavelength: 314nm;colulnntemperature:25~C.ResultsBerberine,baicalinshowgoodlinearrelationshipin0.05—1.1 mg/ml(r:0.9997),0.06, 1.3(r=0.9998)respectively.MeasuredHJDtraditionaldecoctionof berberine,baicalincontent0.789mgand1.79mg,HJDdispensinggranuleofberberineandbaiealincontent 1.16mgand2.10mg.ConclusionResultsshowthatbetweenHJDtraditionaldecoctionanddispensinggran— uleofberberineandbaicalincontent,thelatterarehigherlevels. 【Keywords】 HJD(HuanglianjieduDecoction);Traditionaldecoction;Dispensinggranule;Berberine; Baicalin;HPLC 黄连解毒汤是清热解毒的代表方剂,其方出《肘后备急 方》卷二,方名见《外台秘要》卷一引崔氏方,由黄连,黄芩, 黄柏,栀子四味药组成.君,臣药分别为黄连,黄芩,主要有 效成分为盐酸小檗碱与黄芩苷,zJ. 中药配方颗粒在我国经过10多年的发展,在全国部分 地区和医院逐渐广泛应用起来,患者也逐渐开始接受配方颗 粒作为中药应用的一种新形式.中药配方颗粒与中药饮片 同样具有符合中医药辩证论治的优势和特色,又具有中成药 携带方便和服用简单的优点.本文作者选取一常用方剂黄 连解毒汤作为例子,通过高效液相色谱法分析同一方剂中传 统汤剂与配方颗粒问的主要成分含量高低,以此说明两者 差异. 1实验材料 1.1仪器上海伍丰LC一100系列高效液相色谱仪,(上海 伍丰科学仪器有限公司),超声波清洗器6LDL一180A(上海 之信仪器有限公司),分析天平BT25S(德国塞多利斯) 1.2试剂与试药甲醇(色谱纯,天津协和吴鹏色谱科技有 限公司),磷酸(分析纯,天津百世化工有限公司),乙腈(一 级色谱纯,天津四友精细化学品有限公司),蒸馏水,盐酸小 檗碱品(中国药品生物制品检定所,批号:110713— 200208),黄芩苷标准品(中国药品生物制品检定所,批号: 作者单位:510120广东省中医院(梁盈军);广东岭南职业技术 学院(舒洁倩) 黄 110713.200208),实验所用黄连解毒汤饮片黄连,黄芩,柏,栀子均由康美药业股份有限公司提供;黄连解毒汤配方 颗粒均由江阴天江药业有限公司提供. 2方法与结果 2.1实验操作环境:室内恒温25?,恒湿65%. 2.2色谱条件色谱柱C18ODS(迪马C18钻石色谱柱 5m,4.6×250mm)反相色谱柱;柱温:25~C;流动相:甲醇: 乙腈:0.4%磷酸=50:45:5;流速:1.0ml/min;检测波 长:314nm. 2.3对照品溶液制备精密称取盐酸小檗碱标准品51.40 mg,黄芩苷标准品61.20mg同置于50m1容量瓶中加甲醇制 成盐酸小檗碱,黄芩苷标准品浓度分别为1.028mg/ml, 1.224mg/ml的溶液,用0.45m微孔滤膜过滤,取续滤液即 得. 2.3"项下对照品溶液2 2.4系统适用性试验精密吸取" ml置于1Om1容量瓶中,用甲醇定容,在上述色谱条件下,进 样2O测定,盐酸小檗碱与黄芩苷两种成分均被洗脱且达 到基线分离,保留时间分别为5.50,8.78rain.对照品溶液 HPLC色谱图见图1. 2.5供试品溶液制备 2.5.1传统汤剂供试液按黄连9g,黄柏6g,黄芩6g,栀 子9g的处方比例称取4味中药,加8倍量水即240ml浸泡 30rain,煎煮60rain,8层纱布滤过,滤渣再加6倍量水即180 m】,煎煮30min,8层纱布滤过,合并两次滤液,于蒸发皿中浓 2011年2月第5卷第4期ChinJModDrugApol,Feb2011,Vo1.5,No.4 缩至干,放冷,加甲醇溶解后定容成10m1,用0.45m微孔 滤膜过滤,取续滤液即得. i;..;量基;..;..;.;;,.;图1对照品溶液色谱图 2.5.2配方颗粒供试液分别称取与药材当量的4味配方 颗粒(黄连配方颗粒每袋0.5g相当于饮片3g,黄柏配方颗 粒每袋0.5g相当于饮片6g,黄芩配方颗粒每袋2g相当于 饮片l0g,栀子配方颗粒每袋lg相当于饮片10g),混合,加 入80cC,100?热水200ml,搅拌溶解,超声处理20rain,于 蒸发皿中浓缩至干,放冷,加甲醇溶解后定容成10nll,用 0.45txm微孑L滤膜过滤,取续滤液即得. 2.6线性关系考察分别精密吸取"2.3"项下对照品溶液 0.5ml,Iml,2ml,4ml,10m1分别置于l0ml容量瓶中,用甲 醇定容,作为线性关系考察工作溶液I,?,?,?,V.在上 述色谱条件下五瓶工作溶液均吸取2O1进样测定峰面积. 以对照品溶液浓度(mm1)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘 制标准曲线, 得盐酸小檗碱回归方程为: A=2.0×106C+67019r=0.9997 线性范围为:0.05—1.1mg/ml 得黄芩苷回归方程为: A=5.0×106C一35919r:0.9998 线性范围为:0.06—1.3megml 2.7精密度试验精密吸取工作溶液?20,重复进样5 次,测定峰面积,结果得RSD盐酸小檗碱:6.69%,RSD黄芩 苷:4.23%(n=5),仪器精密度良好. ? 15? 2.8稳定性试验取"2.5.1"和"2.5.2"项下供试品溶液, 存放于冰箱中24h,分别于0…4810,16,24h时各进样一 次,记录峰面积,传统汤剂中两组分RSD为2.91%,4.33%; 配方颗粒中两组分RSD为1.89%,2.65%,均说明其在24h 内稳定(n=3). 2.9重复性试验平行制备同一供试品溶液传统汤剂和配 ,分别精密吸取2O进样,测定峰面积,结果 方颗粒各3份 以盐酸小檗碱为例RSD传统饮片=6.80%,RSD配方颗粒 =7.33%,重复性较好. 2.10样品测定取"2.5.1"和"2.5.2"项下供试品溶液,按 上述色谱条件分别进样2O,色谱图见图2,图3. 图2配方颗粒供试液 图3传统饮片汤剂供试液 平行测定6组传统汤剂与配方颗粒中两组分的含量,结 果见表1(以每方30g计算,即按黄连9g,黄柏6g,黄芩6 g,栀子9g的处方比例) 表1平行测定6组传统汤剂与配方颗粒中盐酸小檗碱与黄芩苷的含量 结果表明,配方颗粒中盐酸小檗碱及黄芩苷的含量均比 传统汤剂中的要高. 3讨论 3.1检测成分的确定黄连解毒汤中君,臣药分别为黄连, 黄芩,主要有效成分为盐酸小檗碱与黄芩苷.根据文献一 了解盐酸小檗碱与黄芩苷具有多种药理活性,因此,实验选 用这2种成分作为黄连解毒汤测定的指标. 3.2流动相的确定经过反复试验比较甲醇,乙腈,磷酸三 者不同比例,最终确定甲醇:乙腈:0.4%磷酸=50:45:5,作 为流动相,基本能在30min内全部出峰,分离度良好且拖尾 现象不明显. 3.3检测波长的确定采用紫外检测器,于200,40011113 波长范围对对照品液进行光谱扫描,结果与李清等]所测盐 酸小檗碱最大吸收波长一致,分别是227nm,262nm,340nm, 黄芩苷最大吸收波长分别是214,277,314nm,据图谱了解这 2种成分在314nm处都有较强吸收,且杂质干扰少,灵敏度 高,故检测波长选择314nm. 参考文献 [1]吴宏伟,唐力英,付梅红,等.不同煎煮条件下黄连解毒汤有效 成分分析.中国中医药信息杂志,2010,17(2):42. [2]李清,王璐,戴荣华,毕开顺.高效液相色谱法测定黄连解毒汤 中盐酸小檗碱的含量.西北药学杂志,2004,19(2):51. [3]乔晓莉,赵倩,肖学风.黄连解毒汤研究概况.天津药学,2008, 20(1):65. [4]刘金保,周杰.黄连解毒汤药理作用的研究进展.中国现代临 床医学杂志,2008,7(3):49. [5]李清,王璐,戴荣华,毕开顺.RP—HPLC法测定黄连解毒汤中黄 芩苷的含量.西北药学杂志,2006,21(2):59.