交叉配血及注意事项

交叉配血及注意事项 交叉配血及注意事项 2009/03/08 21:17 将献血人的红细胞和血清分别与受血人的血清和红细胞混合，观察有无凝集反应，这一试验称为交叉配血。 交叉配血是确定能否输血的重要依据。若献血人红细胞与受血人血清(主侧)发生凝集应禁止输血;主侧不凝集，次测(献血人血清与受血者红细胞)凝集，必要时可少量、慢速输血;两侧均不凝集可输血。 交叉配血试验有多种方式，如盐水法、胶体介质配血法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。 在ABO系统血型相同的人之间进行输血，在输血前必须进行交叉配血试验(corss-match test)，即不仅把供血者的红细胞与受血者的血清进行血清配合试验(这称为试验主侧);而且要把受血者的红细胞与供血者的血清作配合试验(这称为试验的次侧)。这样，既可检验血型测定是否有误，又能发现他们的红细胞或血清中，是否还存在一些其它的凝集原或凝集素，足以引起红细胞凝集反应。在进行并叉式配血试验时，应在37?下进行，以保证可能有的凝集反应得以充分显示。 如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应，即为配血相合，可以进行输血;如果主侧有凝集反应，则为配血不合，不能输血;如果主侧不起凝集反应，而次侧有凝集反应，只能在应急情况下输血，输血时不宜太快太多，并密切观察，如发生输血反应，应立即停止输注。 注意事项: 1.对受血者血样进行ABO正反定型，必要时作Rh定型及血型抗体和鉴定。 2.选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。 抽取受血者与供血者静脉血各3--4ml，分离血清，并将红细胞配成2%盐水悬液。 取洁净小试管两支，分别标明:主侧:受血者血清(PS)+供血者红细胞(DC);次侧:供血者血清(DS)+受血者红细胞(PC) 按上述标注操作，各取相应血清1滴与红细胞悬液1滴，加入相应试管中，混匀，1000r/min离心1min。轻轻侧动试管，观察结果。 ABO同型配血:主侧与次侧均无溶血及凝集现象表示无输血禁忌，可以输血。 异型配血:主侧无溶血凝集，供血者血清中抗A(B)效价<200,可给与少量输血。 冬季应注意将试管保温，以防止冷凝集素应起的凝集反应。 交叉配血发现有不配合时，首先考虑受血者与供血者血型是否定错;必要时进行抗体筛检。其次，应注意有无特异性同种抗体、特异性未知的同种抗体存在。 血型鉴定和交叉配血的影响因素及解决方法 关键词】 血型鉴定 准确的血型鉴定及交叉配血是临床安全有效输血的重要保证。输血配合是选择用于受者的血液，使输血的成分能在受者体内有效存活，无不良反应，即输入的红细胞在受者体内必须不凝集或不溶血，输入的血 浆成分不导致受者自身红细胞显著破坏，才能使受者获得恢复健康所需的血液[1]。影响血型鉴定和交叉配血的因素很多，笔者结合工作实际就实验过程中出现的一些问及其对策报告如下。 1 标本和试剂因素 1.1 标本 交叉配血和血型鉴定血液标本的严格要求是安全输血的关键性措施之一。首先要对标本进行科学管理，确保标本一一对应，其标识、血液量、红细胞或血浆的质量符合实验要求和受者血液的身体状态，同时避免血样的稀释和溶血的产生。标本一般要求离体后尽快实验，最长不能超过3d，每次输血后受血者和供血者的血标本应在2?,8?保存7d[2]。患者的药物使用有时也对实验有一定影响，一般受者使用肝素治疗，应用硫酸鱼精蛋白对抗使标本凝结;如果受者使用右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等治疗，应注意将红细胞洗涤。 1.2 试剂因素 血型定型试剂是做好定型的基础。现在单克隆试剂是通过杂交瘤技术生产的，其效价、特异性、亲和力都较人血清有很大进步，但试剂的运输、贮存等条件不适可导致试剂变质失效，造成鉴定或配血错误。在实验前进行试剂外观、效价等项目质量控制。不同抗凝剂的血液制备的红细胞质量也不同，各实验室依据要求正确配制红细胞浓度。常见的抗D试剂主要有IgM型、IgG型胶IgM+IgG型三种。 2 ABO血型鉴定和交叉配血 2.1 冷凝集素 在ABO血型鉴定和交叉配血的过程中，冷凝集素是影响ABO血型正反不符和交叉配血不合的常见原因。正常人血清中冷凝集素效价一般不高，且在4?以下时才有活性。但由于人免疫系统的差异，在恶性肿瘤或病原体感染后有时冷反应性自身抗体可异常增高，造成溶血性贫血。这种冷凝集素效价在4?可高于1000，用37?生理盐水洗涤红细胞，操作时在37?环境可以排除冷凝集素的干扰。 2.2 自身免疫性溶血性贫血 红细胞被自身抗体强烈致敏后将干扰ABO定型，且自身抗体的存在会导致交叉配血不合，选择合适的试验方法对红细胞上结合的抗体做放散处理，确定抗体的特异性。如果抗体属于同种抗体，则交叉配血时应选取该抗原阴性的献血者的血液。如果该抗体无法确定特异性，则交叉配血时要根据患者自身红细胞与自身血清的对照反应选取较弱反应的献血者血液，因为自身抗体的干扰而发生ABO正反定型不相符时，可用37?,45?生理盐水洗涤红细胞三次，或者用放散后的红细胞(放散方法需不破坏红细胞结构)，血清定型则可用洗涤或放散后的红细胞将血清中的自身抗体吸收后再进行。 2.3 弱凝集 血型试验是抗原抗体反应，当患者红细胞上抗原异常或血清中存在ABO血型以外的不规则抗体时，可能会导致减弱的或缺少的凝集反应。抗原异常包括:?亚型，这种亚型红细胞抗原性较弱，可以通过亚型定型试剂来具体定型。?红细胞抗原形成不足或敏感性降低，如新生儿、老年人及少数恶病质患者。鉴定血型时要注意正反定型的结合，加用抗H和抗A，B型标准血清、A2红细胞等检查唾液中的血型物质，必要时作吸收放散试验以确定。若血清中存在不规则抗体可在反定型用O细胞加以鉴定，有些亚型因为抗原的某些位点缺失，也会产生相对于缺失抗原位点的抗体，这些抗体的产生有助于亚型的判定。 2.4 细菌性凝集 常见有类B凝集，A型或O型病人因大肠杆菌O86感染，从而使红细胞上获得类B抗原，能与抗B抗体发生凝集，表现为B 或AB型。其不受温度影响，病情好转类B凝集即消失。另外红细胞被细菌或细菌酶污染，红细胞上的T抗原被激活，与供血者中抗T抗体发生凝集。此种凝集在4?和37?之间随着温度的升高凝集程度逐渐减弱，在37?时最弱或消失。 2.5 混合外观凝集现象 出现混合外观凝集的情况时一般要核对标本，必要时可重新抽取血样。患者在近期有过骨髓移植或输血史、胎盘出血和白血病等应在疾病恢复后再确定血型。其他原因如嵌合现象、A3亚型及Tn多凝集反应等在定型时可帮助正确判断血型。 2.6 不规则抗体及亚型 血型试验是抗原抗体反应，当患者血清中存在ABO型以外的IgM或IgG和IgM混合型不规则抗体时，必然会导致ABO正反定型不一致。可通过测定唾液中的血型物质来鉴定ABO血型。由于受检者红细胞上有弱抗原，且抗原表达性特别弱，在纸片定型中很可能被错误定型，另外抗抗抗血清的效价低或Ac/Bc/Oc等其他因素的影响，正反定型不相符，也可能被错定或无法确认[3],应用试管盐水法镜检显示抗抗抗管呈弱的混合外观，正反定型相符，且经吸收放散试验进一步确定相应的亚型。由于某些亚型红细胞与抗，B血清呈现出特异性反应，因此同时采用抗，B血清，而在反定型时加入O细胞可以检出部分不规则抗体。对ABO血型正反定型不一致的标本，正定型时加入抗有助于检测红细胞表面H抗原的量，对鉴别亚型具有重要意义，同时有助于发现稀有血型，如孟买型等[4]。 2.7 假凝集 血清在室温和37?中，使红细胞出现了假凝集，造成配血错误。常见于某些肝病、传染病、多发性骨髓瘤、霍金氏病、心肌梗塞、感染等病，或用纸片或玻片作血型鉴定时，时间过长水份蒸发引起红细胞发生凝集，这种凝集在镜下为缗钱状，可看清红细胞形态，患者红细胞直接抗人球蛋白试验阴性，用生理盐水稀释或洗涤红细胞可使凝集消失。 3 Rh定型试验 Rh血型系统可能是红细胞血型系中最复杂的一个血型系[1]。常规条件下只作Rh(D)定型。Rh(D)阴性的受者必须接受Rh(D)阴性的血液。临床输血前检查Rh(D)血型是一个常规项目，但部分小型医院目前还未开展这类项目，这对输血安全带来很大隐患。鉴定Rh血型抗原有不同的血清血技术，主要按定型试剂的性质而确定，因此在作血型签定时，应对所用的定型试剂有全面的了解，才能避免假阳性和假阴性，正确地获得定型结果。Rh血型定型方法主要包括三种方法，即玻片法、盐水法和酶或间接抗球蛋白试验。试验过程中对照系统应包括试剂对照和抗原阳性阴性对照，并对采用的试验介质、浓度、温度、离心条件等严格控制。Rh血型弱D是D的弱表现形式，即使很弱仍可能引起免疫反应，若将弱D型血输给D阴性受者，有可能免疫受者，使之产生抗D;弱D红细胞输入血清中已有抗D的受血者，输入红细胞会被加速破坏，从而引起溶血性输血反应，对于初筛为D阴性的献血者，要分别用不同批次的IgG抗D试剂间接抗人球法进行Rh阴性确认，供者弱D型血作为D阳性血发放。临床对于受者只做IgM抗D试验，若为阴性，不再做弱D检测，应把受者当作D阴性，并输注D阴性血。另外标本污染和错误、操作者自身技术及判断错误、病人用药、输血史及妊娠史等因素也影响血型定型和交叉配血，在试验过程中要密切联系临床和环境因素，科学排除影响血型鉴定和交叉配血的因素，确保输血安全。 2008年2月赵 锋等:血型鉴定和交叉配血的影响因素及解决方法第1期2008年2月河北北方学院学报(医学版)第1期参考文献 【参考文献】 1 王培华主编.输血技术学\[M\].第2版.北京:人民卫生出版社，2002.164， 2 徐忠，沈行峰主译.血站和输血机构标准\[S\].第21版.上海:上海科学技术出版社， 3 薛敏，刘毅.Bx血型鉴定1例报告\[J\].临床输血与检验，2003，5(3):215 4 马曙轩，刘景汉，王全立,等.24例ABO血型正反定型不一致受血者的血型血清学\[J\].临床输血与检验，2005，7(4):280 做交叉配血试验时的注意事项 做交叉配血试验中发现不配合时，首先应考虑受血者和献血者的ABO定型是否错误，必要时进行Rh血型鉴定及抗体筛检。其次应注意有无特异性同种抗体，或者病人的血清在室温、 37?或抗球蛋白血清中凝集所有的其他红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步做有关试验进行鉴定。 受血者和献血者的样本，在每次输血之后，在2-6?保存3-7天，如果病人在输血后数天内发生迟发性、溶血性输血反应时，保存的病人和献血者的血样就可能要重做或追加试验，必要时从发生溶血性输血反应的病人重新采取血样与输血前病人血样同时检查以资比较。 交叉配血试验有多种方式，如盐水法、胶体介质配血法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。 胶体介质配血法为例进行说明 1、首先准备好受血者和献血者的血样。 2、配好用受血者血清配成的2,的红细胞悬液;用献血者血清配成的2,红细胞悬液。 3、主侧加受血者血清0.5ml，献血者血清配成的2,红细胞悬液0.25ml。 4、次侧加献血者血清0.5ml，受血者血清配成的2,的红细胞悬液0.25ml。 5、37度水浴箱孵育1小时，后观察有无凝集或溶血。 如有配血禁忌，则应查原因。 编辑本段临床意义 在血型鉴定的基础上，通过交叉配血试验进一步证实受血者和供血者之间不存在血型不合的抗原一抗体反应，以保证受血者的输血安全。 编辑本段交叉配血试验-简介 交叉配血试验包括主试验和副试验两种。前者用受血者血清与供血者红细胞悬液作试验以发现受血者血清中是否含有与供血者红细胞反应的抗体。又称直接配合或主侧配合;后者则用供血者血清与受血者红细胞作试验以发现供血者血清中是否有不合抗体，又称间接配合。 编辑本段交叉配血试验-背景原因 ABO血型是根据红细胞膜上存在的凝集原A与凝集原B的情况而将血液分为4型。 凡红细胞只含A凝集原的，即称A型;如存在B凝集原的，称为B型;若A与B两种凝集原都有的称为AB型;这两种凝集原都没有的，则称为O型。 不同血型的人的血清中各含有不同的凝集素，即不含有对抗内他自身红细胞凝集原的凝集素。在A型人的血清中，只含有抗B凝集素;B型人的 血清中，只含有抗A凝集素;AB型人的血清中没有抗A和抗B凝集素;而O型人的血清中则含有抗A和抗B凝集素。 在ABO系统血型相同的人之间进行输血，在输血前必须进行交叉配血试验(cross-match test)，即不仅把供血者的红细胞与受血者的血清进行血清配合试验(这称为试验主侧);而且要把受血者的红细胞与供血者的血清作配合试验(这称为试验的次侧)。 这样，既可检验血型测定是否有误，又能发现他们的红细胞或血清中，是否还存在一些其它的凝集原或凝集素，足以引起红细胞凝集反应。在进行并叉式配血试验时，应在37?下进行，以保证可能有的凝集反应得以充分显示。 编辑本段交叉配血试验-试验方式 交叉配血试验有多种方式，如盐水法、胶体介质配血法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。 胶体介质配血法 1、首先准备好受血者和献血者的血样。 2、配好用受血者血清配成的2,的红细胞悬液;用献血者血清配成的2,红细胞悬液。 3、主侧加受血者血清0.5ml，献血者血清配成的2,红细胞悬液0.25ml。 4、次侧加献血者血清0.5ml，受血者血清配成的2,的红细胞悬液0.25ml。 5、37度水浴箱孵育1小时，后观察有无凝集或溶血。 微柱凝胶试验 微柱凝胶试验(Microtubes Gel Test，MGT)是20世纪90年代先后进入国内实验室并用于交叉配血的新方法。在一些先进国家已成为常规的红细胞血型血清学检测技术。而凝聚胺用于不完全抗体的测定与鉴定以及交叉配血等血清学试验也已在国内迅速推广使用。该方法简便、时间短、结果明显。 编辑本段交叉配血试验-试验 和试剂 诊断用人血型抗A血清、诊断用人血型抗B血清(常在血清中加入不同颜色的染料以示区别，如A型红色，B型蓝色)、生理盐水、供血者血清、受血者血清、供血者的2%红细胞悬液、受血者的2%红细胞悬液。 器具 凹玻片或载玻片、小试管、尖嘴滴管、无菌刺血针、牙签、酒精棉球、无菌干棉球、试管架、显微镜、记号笔等。 过程 取小试管2支，分别标明1、2; 摇匀，3000rpm离心2,3min; 结果观察 先观察上清液的颜色，然后再轻摇试管观察有无红细胞凝集现象发生; 结果判定:如试管内红细胞呈均匀混浊无颗粒出现即无凝集，上清液呈正常血清状颜色为交叉配血试验相合。如上清液呈红色即有溶血现象，红细胞成块即为凝集现象，为交叉配血试验不相合 编辑本段交叉配血试验-正常范围 主试验和副试验均不出现凝集(也不溶血)即说明受血者和供血者ABO血型相配。 主试验和副试验都不出现凝集和溶血现象才可输血。如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应，即为配血相合，可以进行输血; 若献血人红细胞与受血人血清(主侧)发生凝集应禁止输血，则为配血不合，其血绝对不可输入。 主试验不发生凝集，副试验发生凝集，可适当少量输血 (不宜超过200ml)。输血时不宜太快太多，并密切观察，如发生输血反应，应立即停止输注。 编辑本段交叉配血试验-临床应用 交叉配血是确定能否输血的重要依据。在血型鉴定的基础上，通过交叉配血试验进一步证实受血者和供血者之间不存在血型不合的抗原一抗体反应，以保证受血者的输血安全。 交叉配血不能只进行盐水介质交叉配血，在条件差的实验室也进行胶体介质配血，以尽量消除不完全抗体存在的危害，减少输血引起的反应。 因输血直接涉及病人的生命安全，故病人与献血员虽属同一血型也应进行交叉配血。 编辑本段交叉配血试验-注意事项 待检红细胞悬液不宜过稀或过浓; 所用的试剂必须在有效期内; 气温较高时，为防止标本干涸所致的假阳性，可将玻片放入有一湿棉球的平皿中。若室温过低，可将玻片置于28?右右的温箱中; 注意区分红细胞的叠连现象与凝集现象。前者滴加生理盐水1,2滴混匀后，红细胞即可分散成浑浊状，而后者则不因此而改变; 利用已知A型和B型红细胞与一系列稀释的待检血清作凝集反应，根据凝集效价(以出现凝集的最高稀释度)的高低可作为判断体液免疫功能的一项指标。多数免疫功能正常的半岁婴儿，除AB型外，血清中相应的抗A效价?1:8，抗B效价?1:4。一岁后，凝集效价也相应提高。