荧光法测定维生素B2含量

西安文理学院 化学工程学院实验报告 实验编号：                                        2014  年  4  月 24 日 化学类  专业 13 级 1 班            实验名称:荧光光度法测定食品中维生素B2的含量 姓名：    秦    阳               成    绩：                            同组人:                            指导老师：                            ——————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————— 一．实验目的 1.学习荧光光度法测定“高乐高”固体饮料中维生素B2的分析原理。 2.熟悉荧光分光光度计的操作技术。 二． 实验原理 维生素B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂。在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。维生素B2水溶液在430~440nm蓝光或紫外光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在535nm，在pH 6~7的溶液中荧光强度最大，在pH 11的碱性溶液中荧光消失。由于维生素B2在碱性溶液中经光线照射，会发生光分解而转化为光黄素，后者的荧光比核黄素的荧光强的多。因此，测量维生素B2的荧光时，溶液要控制在酸性范围内，且须在避光条件下进行。 三．仪器与试剂 970CRT荧光分光光度计。 10μg/ml维生素B2溶液：准确称取10.0mg维生素B2，用热蒸馏水溶解后，转入1L棕色容量瓶中，冷却后加蒸馏水至标线，摇匀，置于暗处保存。 冰乙酸（AR）；多维葡萄糖粉试样。 四. 实验步骤 (1) 标准曲线的绘制 于6只50mL容量瓶中，分别加入10μg/ml维生素B2标准溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL，再各加入冰乙酸2.0mL，加水至标线，摇匀。在970 CRT荧光分光光度计上，用1cm荧光比色皿于激发波长440nm，发射波长540nm处，测量标准系列溶液的荧光强度。 (2) “高乐高”固体饮料中维生素B2的测定 准确称取一定量的“高乐高”固体饮料试样，用少量水溶解后转入50mL容量瓶中，加冰乙酸2mL，摇匀。在相同的测量条件下，测量其荧光强度。平行测定三次。 五. 实验记录及数据处理 以相对荧光强度为纵坐标，维生素B2的质量为横坐标绘制标准曲线。从标准曲线上查出待测试液中维生素B2的质量，并计算出“高乐高”固体饮料试样中维生素B2的百分含量。 浓度/(ug/ml) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 相对荧光强度 101.267 175.748 254.59 333.192 413.828 497.257               测得样品维生素B2含量：1998ug/片即约2.0mg/片 样品：21金维他  标示维生素B2含量：2.5mg/片 误差分析：1.样品已过保质期； 2.测量误差；3.条件探索不够精确。 六．思考题 1. 试解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因。 由于现代电子技术具有检测十分微弱光信号的能力，并且荧光强度与 激发光强度成正比，提高激发光强度也可以增大荧光强度，使测定的灵敏度提高； 而吸收光度法测定的是吸光度，不管是增大入射光强度，还是提高检测器的灵敏 度，都会使透射光信号与入射光信号以同样的比例增大，吸光度值不会改变，因 此灵敏度不能提高。 2. 维生素B2在pH=6~7时最强，本实验为何在酸性溶液中测定？ 因为维生素B2在碱性溶液中经光线照射，会发生分解而转化为光黄素，后者的荧光比维生素B2的荧光强的多。因此，测量时溶液要控制在酸性范围内进行。