血红蛋白的提取和分离

血红蛋白的提取和分离 太原二十中问题导学案 使用时间: 年 月 日 科 生物 课 题 血红蛋白的提取与分离 目 课 新课 第 1 课时 主备人 黄晓倩 审核人 型 学习 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白 目标 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 学习 重点 【学习重点】凝胶色谱法的原理和 与 【学习难点】样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 难点 学法 指导 【自主学习】 备注 ? 凝胶色谱法(分配色谱法): 1、概念:根据被分离蛋白质的 ，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。 2、原理:当不同的蛋白质通过凝胶时，相对 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 3、具体过程: (1) (2) (3) (4) (5) 相对分子质 量较小的蛋学 粒凝白质 胶 颗 习 相对分子质多 量较大的蛋孔白质 板 A 过 B A. 的蛋白质由于 作用进入凝胶程 颗粒内部而被滞留; 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。 B.(1) 混合物上柱; (2)洗脱开始， 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内; 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外; (3) 的蛋白质被滞留; 的蛋白质被向下移动。 (4) 不同的蛋白质分子完全分开; (5) 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。 【合作探究】(小组讨论、交流、展示) 备注 思考1:分离生物大分子的基本思路是什么, 思考2:蛋白质的分离和提取的原理是什么, 思考3: 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作 用结果是什么被破坏, 思考4:人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红 蛋白的原因是什么, 学 习 过 【答疑解惑】 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么,它的目的是什 么, 程 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环 境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和材 料的科学研究(活性) 如何测定蛋白质的分子量, 使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量时，可选 用一组已知分子量的蛋白同时进行电泳，根据已知分子量 的标准蛋白的电泳区带位置，用电泳迁移率和分子量的对数作 标准曲线，可以测定未知蛋白质的分子量。 【梳理巩固】 备注 例1:凝胶色谱法是根据( )分离蛋白质的有效方法。 A(分子的大小 B(相对分子质量的大小 C(带电荷的多少 D(溶解度 例2:缓冲液的作用是:在一定范围内，抵制外界的影响来维 持( )基本不变。 A(温度 B(pH C(渗透压 D(氧气浓度 例3:电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷 ( )的电极移动。 A(相同 B(相反 C(相对 D(相向 例4:哺乳动物和人的成熟的红细胞中的( )与氧气的运输 有关。 A(血红蛋白 B(肌红蛋白 学 C(肌动蛋白 D(肌球蛋白 例5:血液由血浆和各种血细胞组成，其中( )的含量最多。 习 A(白细胞 B(血小板 C(红细胞 D(淋巴细胞 例6:为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂 ( ) 过 A(NaCl B(甲苯 C(蒸馏水 D(柠檬酸钠 例7:将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显 看到试管中的溶液分为4层，其中第3层是( ) 程 A(无色透明的甲苯层 B(脂溶性物质的沉淀层 C(血红蛋 白的水溶液 D(其他杂质的暗红色沉淀物 例8:利用凝胶色 谱法分离蛋白质，最先洗脱的蛋白质特点是( ) A(相对分子质量大的 B(溶解度高的 C(相对分子质量小的 D(所带电荷多的 例9:凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是( ) A(糖类化合物 B(脂质 C(蛋白质 D(核酸 【达标检测】 备注 1.用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 ( ) A(路程较长，移动速度较慢 B(路程较长，移动速度较快 C(路程较短，移动速度较慢 D(路程较短，移动速度较快 2.蛋白质提取和分离分为哪几步 ( ) A(样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 B(样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D(样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 3. 在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是 ( ) A(磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 学 B(血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C(防止血红蛋白被0氧化 2 D(让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能 4(在盛有红褐色的Fe(OH)3，胶体的U形管的两个管口，各插习 一个电极，通直流电后，发现阴极附近的颜色逐渐加深，这说 明 ( ) 过 A(Fe(OH)胶体粒子带正电荷，向阴极移动 3 B(Fe(OH)胶体粒子带负电荷，向阳极移动 3 C(Fe(OH)胶体粒子带正电荷，向阳极移动 3 D(Fe(OH)胶体粒子带负电荷，向阴极移动 程 3 5.样品的加入和洗脱的操作不正确的是( ) A. 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B. 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C. 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D. 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 【作业布置】 备注 1 利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来( ) A. 相对分子质量大的 B. 溶解度高的 C. 相对分子量小的 D. 所代电荷多的 2 蛋白质提取和分离分为哪几步( ) A. 样品处理、凝胶色谱操作、SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳 学习 B. 样品处理、凝胶色谱操作、纯化 过程 C. 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D. 样品处理、纯化、 粗分离、纯度鉴定 3用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质( ) A路程较长，移动速度较慢 B路程较长，移动速度较快 C路程较短，移动速度较慢 D路程较短，移动速度较快 板 本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复课后 杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等 分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。