皮质醇检测作业指导书 医学检验

皮质醇检测作业指导 医学检验 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件已阅声明》 《Procedure circulation form》 文件名称: 皮质醇检测作业指导书 表号:KM-MP03.02.02已阅声明:本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 (I have understood the relevant content of the document.I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure) 阅读人签名表 姓名(NAME) 职务(POSITION) 签名(SIGNATURE) 签名日期(DATE) STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件修改记录页》 《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03.02.03 序号 页码内容更改说明(Description of 审批人批准生效日期NO. (Page) Modified contents) (Approvedby) (Approveddate) 1 换版 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件信息表》 《Procedure information form》 表号:KM-MP03•02•04 文件名 皮质醇检测作业指导书(KM-SOP0300•321) Title of DOC.(Doc.Code) 版本号(Edition No.) Edition3.0 生效日期(Operative 2008-03-13 date) 文控部门 实验室文控室 (Doc. Control Dept.) 回顾日期(Review 回顾人员签名( Signature ) 回顾日期/签名 (Review date) date /signature ) 替代文件(Replaces) 皮质醇检测作业指导书(Edition2.0) 存放地点(Location)/持有No. 地点(Location) 持有人(Holder) 1 诊断部文控室 陈彬 人(Holder) 2 发光室 段学成 作者签名/日期(Author 姜小琴 signature/date) 审批人签名/日期陈建波 (Authorized by : Signature/Date) 接收人签名/日期 (Receiptor/Date) 副本数(Copy No.) 本文件是第 个文件拷贝 / 共发放 2 个文件拷贝。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 皮质醇检测作业指导书 (Standard operation procedure for analysis of COR) 1 原理(Test principle): 固相、竞争法化学发光酶免疫检测。 采用化学发光法:包括免疫反应和化学反应,利用在化学反应中释放大量自由能查声激发态中间体,当其回到稳定的基态时,同时也发射出光子，利用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量。 2 样本收集和储存(Specimen Collection and Storage): 2.1 标本采集(specimen collection):推荐使用超速离心清除脂血(lipoprotein)样本。溶血(hemolysis)样本提示样本在送达实验室之前处理不当，因此检测结果将受到影响，应予以注意。黄疸或严重污染的样本可致结果偏差。血清(serum)样本在未充分凝集前离心将导致纤维蛋白的存在。为避免纤维蛋白对结果的影响必须确保离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。源于不同生产商的血样收集试管，由于原材料和添加剂不同，包括凝胶或物理涂层、促凝剂和/或抗凝剂，可能导致得到不同的结果。本试剂盒没有对所有可能应用的收集管类型进行测试。 2.2 拒收标本(specimen rejection):严重溶血(hemolysis)、黄疸或严重污染的样本。 2.3 标本用量(sample volume):400ul,仪器加样量为10uL血清(serum)。 2.4 标本储存条件(sample storage): 2-8?可保存7天; -20?可保存3个月。 3 试剂(Reagent): 3.1美国DPC IMMULITE 2000 原装试剂。 3.1.1试剂内组份: ? Cortisol包被珠(L2CO12): 包被珠包装带有条码。一个包装200个。包被有多克隆兔抗皮质醇。2,8?可稳定保存至失效期。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 L2KCO:1个 L2KCO6:3个 ?Cortisol试剂楔(L2COA2): 试剂楔带有条码。11.5mL碱性磷酸酶标记的皮质醇缓冲液。2,8?可稳定保存至失效期。 L2KCO2:1个 L2KCO6:3个 使用前将试剂楔顶部穿孔部位的胶条撕开，注意不要损坏条码。揭掉试剂楔顶部的铝箔封条，将试剂楔滑盖的顶部搭扣在下方的斜坡上。 ? Cortisol校正(LCOL，LCOH): 两瓶(低、高)，每瓶3mL， 为含皮质醇的经处理的人血清(serum)。开封后，2,8?可稳定保存30天，或-20?可以保存(分装)6个月。 L2KCO2:1套 L2KCO6:2套 校正前将相应的分装标签(随试剂盒提供)贴于实验管上，以便分析仪上的读码器能够读取条码。 3.1.2未随试剂盒提供的组分 多重稀释液(diluent)1(L2M1Z) 用于高浓度样本的在机稀释。为1瓶经过处理的浓缩的正常人血清(serum)，其皮质醇含量很低，甚至低于检出限。开封后，2,8?可稳定保存30天，或-20?可以保存(分装)6个月。 L2M1Z:25mL 内有稀释液(diluent)用条码标签。使用前，将相应的标签贴于16x100mm实验管上，以便分析仪的读码器能够读取条码。 L2M1Z:3个标签 L2SUBM:化学发光底物 L2PWSM:探针清洗液 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 L2KPM:探针清洁试剂盒 LRXT:反应管(一次性) L2ZT:250个样品稀释测试管(16x100mm) L2ZC:250个样品稀释管盖 CON6:三水平、多成分的质控 其它必需:蒸馏水或去离子水、实验试管、质控 3.2试剂准备(Reagent preparation):将试剂从冰箱中取出并平衡至室温;不同批号的试剂不能混用;新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigeratory to room temperature New reagent lots must be tested in parallel with old lots for proper time; before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Record the results. 4 仪器(Instrument):美国DPC IMMULITE 2000。 仪器准备(Prepare apparatus):使用前将仪器的液体与固体垃圾清空;加入足够的蒸馏水，清冼液，底物及样本杯。然后运行仪器操作软件。而后排水及底物，防止内有残留气柱。将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。 5 安全防范(Safety Precautions): 操作时必须穿戴手套和工作服;工作后的台面应消毒擦洗;用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理;为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间;遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。 6 校准(Calibration): 6.1校准品储存和使用(Calibration material storage and usage):IMMULITE 2000 原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8?可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material.use it within expiration STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 date,storage in 2-8? 复溶(Calibration material redissolve):用复溶专用加样枪准确吸取3mL去离子水于瓶中，溶解静置30分钟，混匀并用有盖小子弹头分装200μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于,20?冻存备用。Label confecting date ,calibration lot,person who confected, expiration date.then 保存于2~8?，可稳定30天 保存于(-20)?，可稳定6个月。 6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准:(If one of the two happens, recalibration ) (1)试剂批号改变(Reagent lot changes) (2)根据质控需要进行校准(Recalibration based on quality control problem) (3)校准周期(Frequency of calibration):4周(4 weeks) 6.3步骤: 将两个样本管中分别加入至少300ul的A，B校准品 ，并贴上校准条码，放入样本架上。将样品架推入样品槽中，点击RUN。然后在计算机屏幕上选择kits项，用扫码器扫描药盒上的条码，选择worklist项，输入校正信息，输入是需在ADJUSTOR中的Kit lot一栏中输入校正信息，并申请COR项目。 6.4结果判断:校准因子(Factor)为:0.8-1.2为仪器自动接受范围，最佳为1.0;当校准因子为0.6-0.8或1.2-1.4时应以质控结果来衡量是否需要重新校准;当校准因子<0.6或>1.4时即说明校准失败，需查找失败因素重新校准。 7 操作过程(Procedural Steps): 7.1样本准备:先检查标本是否合格(标本与作业指导书上标本要求是否一致)，核对验单上的条码和标本上的条码是否一致，按样本每天唯一号原则进行编号。将带有编号的标本离心取血清(serum)，将待测物加入相应的样本管。 7.2取出空样本架，将含有血清(serum)的样本管加入样品架中，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架推入样品槽中。因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul(样本用量10ul)。实验号与样本架号“一一”对应以便于联STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 机。 7.3点击RUN。在[WORKLIST]中输入实验号，在[Assign Tube Position]中指定样品位置，在Tests中指定COR项目。结果出来后，在菜单[tool]中的export按日期打出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。 数据联机入系统: 计算机:设备管理?接口管理?点击德普2000-1全自动化学发光仪?点击开始，出现预处理窗口?仪器:LIS?SORT BY1?点击DEFINE RANGE 选起始日期、时间到最后日期、时间?点ACCESSION NUMBER后出现所有结果?TAG ALL?A或点击需要传送结果?SEND传送?回到计算机预处理窗口?传送。 数据审核:在确保仪器与电脑数据处理系统正常联机的情况下(即数据传送和接收无中断)，仔细核对每一个数据有无错误(如:误传、漏传)，是否与临床诊断相吻合，如发现异常情况，应仔细核对实验号与样本架号，原始导出结果与系统结果是否对应等，如有必要，复查该结果。 8 质量控制(Quality control): 使用CON6质控品做质控，每工作日至少做两个浓度的值，,并作好记录并分析质控结果，质控在控才能发。 COR最大允许误差ALE为25%;室内质控CV为L:8.0%;H:10.0 %，偏移为12.11%,过程稳定性<2%.根据公式:?SEc=(ALE-Bias)/CV-1.65利用计算软件可得, 低值选择的质控规则: 1/2/R/4 N=2; 高值选择的质控规则1/2/R/4 N=2,当质控失控3s2s4s1s3s2s4s1s时，应按照《室内质量控制程序》处理 9 稀释(Dilution): 用MD1稀释液(diluent)按要求的倍数进行稀释(如机外稀释5倍:取1份样本+4份稀释液(diluent))，需要手工稀释的样品在Manual Dilution中指定手工稀释的稀释倍数，仪器自动稀释的样本在Dilution中指定。稀释材料(dilution material):MDI diluent;最大稀释倍数(dilution times):8倍。 10 计算(Calculations): STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 手工稀释，结果应乘以稀释倍数，其它无需人工计算。 11 参考范围(Expected Values): 上午:138-690nmol/l 下午:大约为上午数值的一半 12 结果解释(Interpretation of Results): [1] 接受氢化可的松或强的松(在体内可转化为氢化可的松)治疗的病人，其循环皮质醇的检测结果会出现假性升高。因此对于接受这些药物和结构类似的合成皮质醇类固醇治疗的病人，在判定其皮质醇水平时应提起注意。 [2] 人血清(serum)中的噬异性抗体会与试剂盒组分中的免疫球蛋白发生反应，从而干扰体外免疫检测【见 Boscato LM，Stuart MC.Heterophilic antibodies:a problem for all immunoassays.Clin Chen 1988:34:27-33】。经常接触动物或动物血清(serum)制品的病人样本可证明这种潜在导致异常结果干扰的存在。已经证明这些试剂可以将这种风险最小化，但是少数情况下血清(serum)与实验组分之间潜在的交叉反应还是会出现。为达到诊断目的，此实验的检测结果要与临床检查、病史和其它的检查结合使用。 13 方法局限性(Method Limitations): 13.1精密度(Precision): 13.1.1批间精密度: Mean SD CV(%) 324 26 8 912 71 8 13.1.2批内精密度: Mean SD CV(%) 119.5 6.276 4.926 13.2灵敏度(Sensitivity):<27.6nmol/l(厂商为5.5nmol /l) 13.3特异性(Specificity):N/A 13.4分析测试范围(AMR): 37.6~344.5nmol/L(厂商为28~1380nmol/L) STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 9/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 9/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 13.5病人结果报告范围(CRR):37.6~2754 nmol/L 13.6干扰物质(Interfering Substances): 血清(serum)中的嗜异性抗体会与试剂盒组分中的免疫球蛋白发生反应从而干扰体外免疫检测。水质不合格，将会影响化学发光的性能，增加光子数，影响检测结果。 13.7注意事项(Notices):仅供外体外诊断使用。 , 试剂:2~8?保存，对其处理应遵守相应的法律规定。 , 对于所有组分使用的注意了预防措施都要将其视为存在传染疾病原来处理。 源自人血清(serum)的原材料全部经过检验，与梅毒、HAV1&2抗体、HBsAg 和HCV抗体无反应。 , 防腐剂叠氮钠不浓度小于0.1g/dL。废弃时，要用大量的水进行冲洗以防其 在铅、铜排水管道中生成潜在的爆炸性的叠氮化金属。 , 化学发光底物:避免污染和日光直射(见说明书)。 , 水:使用蒸馏水或去离子水。 13.8其他(Others):方法学比较或项目的特殊要求等。 14 临床意义(Clinical significant): COR的分泌有明显的昼夜周期性变化，故其血浆浓度也有相应的昼夜周期性波动。早晨8点含量最高，以后逐渐降低，夜间12点至次日2点最低。24尿游离Cortisol的排泄量可以有效、正确地反映肾上腺皮质的功能状态，因此两者结合测定对诊断价值更大。 增高常见于:(1)Cushing综合征、双侧肾上腺皮质增生或肿瘤(多为恶性肿瘤)、肾 上腺肿瘤(异位ACTH综合征)等，以上疾病时COR增高且失去昼夜 变化规律。 (2)单纯性肥胖 (3)应激情况，如手术、创伤、心肌梗塞等，但应激消失后很快即可降 至正常。 (4)与皮质醇结合的蛋白质增多，妊娠或用雌激素治疗等。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 10/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 10/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13) K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300•321 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 降低常见于:(1)Addison病、Simmonds-sheehan综合征等，血浆皮质醇降低，但分 泌节律基本正常; (2)某些药物影响，如苯妥英钠、水杨酸等。 15 参考文献(References) 1)Boscato LM，Stuart MC.Heterophilic antibodies:a problem for all immunoassays.Clin Chen 1988:34:27-33 2)IMMULITE 2000 HCG试剂说明书 3)中华医学检验全书 4)IMMULITE 2000 操作说明书 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 11/11 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 11/11 皮质醇检测作业指导书(2008-03-13)