泌乳期山羊腺垂体中ERα和ERβ的分布特点
泌乳期山羊腺垂体中ERα和ERβ的分布
特点
动物医学进展,2Ol1,32(10):44—46
ProgressinVeterinaryMedicine 泌乳期山羊腺垂体中ER和ERf3的分布特点
吕颜枝,杨爽,胡鹏翔,熊东升,耿阳雪,蒋振兴,赵慧英
(西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100)
摘要:为了获得ERa和ERt3在泌乳期参与腺垂体激素分泌的调节机理的形态学依据,试验采集泌乳
初期,泌乳中期和泌乳后期山羊的腺垂体,用免疫组化SP法检测了ERa和ERG在腺垂体的分布.结果表
明,山羊腺垂体中ER两种亚型分布在腺垂体远侧部的嗜色细胞中;ERa阳性细胞数量随泌乳时间逐渐减
少,泌乳初期和泌乳后期多呈胞质阳性,高峰期呈胞核阳性;ERD的阳性细胞数量在泌乳初期和高峰期较
多,泌乳后期较少,多为胞质阳性,高峰期伴有全细胞阳性,泌乳后期伴有个别核阳性.提示不同的泌乳时期
ERa和ERI3分别分布在腺垂体远侧部中不同的嗜色细胞,泌乳前期和高峰期主要为PRL细胞,泌乳后乳期
主要为嗜碱粒细胞,ERa和ERI3在泌乳各期腺垂体激素分泌中发挥不同的作用. 关键词:山羊腺垂体;泌乳期;雌激素受体;免疫组化
0044—03 中图分类号:$852.13文献标识码:A文章编号:1007—5038(2011)10—雌激素(estrogen)是一种作用广泛的类固醇激
素[1],主要由卵巢的卵泡上皮细胞和卵巢问质细胞
分泌.卵巢雌激素的分泌受垂体促性腺激素的调
节,同时雌激素也可以通过长反馈途径调节腺垂体
激素的分泌.雌激素这些效应必须通过与其特异性
的雌激素受体(estrogenreceptor,ER)相结合后才 能发挥,经典的ER主要由ERa和ERE两种亚型组 成[2],分布于机体多种组织器官.在功能上ER介 导的雌激素效应可能有所不同,但也可能协同发挥 作用,ERa主要参与对生殖调控的作用,ERI3可能主 要参与了对高级脑功能,如学习记忆,神经退行性疾 病等的调节.有研究表明[3],大鼠垂体组织中存在 ER的表达;雌激素可诱发大鼠催乳素(prolaetin,
PRL)细胞内钙离子浓度迅速增加,导致PRL的释 放,ER颉颃剂可以阻止这种作用;脑垂体内几乎所 有的催乳素阳性细胞都不表达ER0,而ERa对泌乳 中枢的调节起着主要作用.目前,对于泌乳期山羊 腺垂体中的ER的分布研究报道的很少,本试验应 用免疫组化SP法对ERa和ERB免疫反应产物在 泌乳期山羊腺垂体细胞中的分布进行研究,为阐述 山羊泌乳期的生理调节机制提供依据.
1材料与方法
1.1材料
自陕西杨陵区农户购买泌乳初期(当年2月 份),泌乳中期(当年4月,5月份),泌乳后期(当年 6月,7月份)的健康山羊各5只,共15只.抗兔链 霉菌抗生物素一蛋白过氧化酶免疫组化超敏SP试剂 盒,柠檬酸盐抗原修复液,为福州迈新生物技术公司 产品;兔抗羊ERa和ERE多克隆抗体及抗体稀释液 为北京博奥森生物技术开发有限公司产品;德国 Leica石蜡切片机,Motic数码显微镜.
1.2方法
1.2.1取材及材料处理山羊放血处死后迅速取 下羊头,先用37?的生理盐水向两侧颈总动脉同时
注入400mL,500mL冲干净血液,随后灌流4? 40g/L多聚甲醛固定液400mL,500mL,开颅取 出垂体放人40g/L多聚甲醛固定液后固定24h. 固定后的垂体用流水冲洗24h,再用梯度酒精脱水, 二甲苯透明,之后浸蜡包埋,做石蜡连续切片(片厚 6m).制作的石蜡切片贴于APES包被好的载玻 片上,45?烘箱烤片,共制备3套切片,分别用于 ERa,ERI3免疫组织化学染色和阴性对照. 1.2.2SP法染色石蜡切片常规脱蜡水化后,用 构椽酸盐缓冲液(pH6.O)对切片进行组织热抗原修 复20min,冷却后进行免疫组织化学SP染色.免 疫组织化学SP染色流程如下:?滴加过氧化物酶阻 断液(试剂A)室,室温孵育10min;?滴加非免疫 收稿日期:2011—04—29
基金项目:西北农林科技大学国家级动物科学实验教学示范中心项目;抗病转基因
牛新品种选育重大专项
(2009ZX08007—008B)
作者简介:吕颜枝(1984一),女,河北邯郸人,硕士研究生,主要从事神经免疫内分泌
调控研究.*通讯作者
吕颜枝等:泌乳期山羊腺垂体中ERn和E的分布特点45 动物血清(试剂B),室温孵育l0min,15rain;?分 别滴加兔抗羊(ERa,ERB)多克隆抗体(稀释度为1: 200),4?孵育过夜;?滴加生物素标记的二抗(试 剂C),室温孵育10rain15rain;?滴加链霉菌抗 生物素一过氧化物酶溶液(试剂D),室温孵育10rain ,
15rain;以上每个步骤之间均用0.01mol/L的 PBS缓冲液冲洗5rain×3次,试验中的试剂A,B, C,D均来自SP试剂盒;然后用DAB呈色3min~5
rain.阴性对照组用0.01mol/L的PBS代替一抗, 其他步骤同上.最后经苏木素复染,梯度酒精脱水, 二甲苯透明,中性树胶封片,显微镜观察,摄影. 2结果
在整个泌乳时期的山羊腺垂体中均见到ERa, ERI3免疫反应阳性细胞,主要分布于远侧部的嗜色 细胞,其数量和免疫阳性产物在细胞中的位置随着 泌乳时期的不同而发生变化.ERa阳性细胞多分布 于腺垂体远侧部血窦周围,着色细胞的数量随泌乳 逐渐减少.泌乳初期多数分布于细胞质中(图IA), 泌乳高峰期多分布于胞核,少量分布于胞质中(图 1B);乳期后期多分布于细胞质中,个别囊泡深着色 (图IC).
ERI3阳性细胞数量较多,在腺垂体的分布较集 中,细胞个体相对于ERa阳性细胞大,泌乳初期免 疫阳性产物多分布于胞质,也有个别全细胞着色(图 2A);泌乳高峰期全细胞着色增多(图2B);泌乳后期 阳性细胞数量明显减少,多数为胞质着色,伴有个别 核着色(图2C).
A.泌乳初期;&泌乳高峰期;C.干乳期
A.Earlylactationperiod;B.Peaklactationperiod;C.Drylactationperiod
图1泌乳各期腺垂体中ERa的分布(400×) Fig.1ThedistributionofERainpituitaryduringdifferentlactationperiods(400×)
A.泌乳初期;B.泌乳高峰期;C.干乳期
A.EarlylactationperiodB.Peaklactationperiod;C.Drylactationperiod
图2图2泌乳各期腺垂体中ERI3的分布(400×) Fig.2ThedistributionofERBinpituitaryduringdifferentlactationperiods(400×)
3讨论
泌乳启动和维持受PRL等激素的调节引.雌
激素通过刺激垂体前叶合成与释放催乳素,促进乳 腺的发育;大剂量的雌激素可竞争催乳素受体,从而 抑制催乳素的促泌乳作用.在妊娠期,大量的雌,孕
激素抑制了催乳素的促泌乳作用;分娩后,雌激素, 孕激素水平迅速下降,解除了对催乳素的抑制作用, 同时催乳素的分泌也大量增加,促进乳腺开始泌乳; 随着规律性哺乳的建立,刺激垂体前叶分泌催乳素, 从而维持泌乳.研究表明[g1]在妊娠和泌乳期间腺
垂体内的PRL细胞由于雌激素的刺激而发生增生 和肥大,ER在分泌PRL和PRL细胞增生方面起重 要作用,PRL细胞的大小和形态的变化与妊娠,泌乳 等生殖周期密切相关.本试验发现,在ERa和ER/3 在泌乳初期和高峰期内胞体较大,且ERI3在高峰期 时数量增多,泌乳后期时胞体变小,数量急剧减少, 提示泌乳前期和高峰期ERa和ERI]阳性细胞可能 46动物医学进展2011年第32卷第1O期(总第220期) 主要是PRL细胞,泌乳后期可能主要是嗜碱性细激素受体基因表达的影响[J].中
国tt:较医学杂志,2009,19
胞,两者共同参与了雌激素对泌乳期的生理调节,而 泌乳高峰期是主要是ERp起主要作用.但是确定.一 萎盖.善萎鼠)
ERa和ERp具体定位于腺垂体中的何种激素分泌 细胞,仍需做双标和其他细胞类型的鉴定研究.[53Niew,ZhagYX.Ro1eof..t?
geicogniti.funetionnd
张庆红等L1对大鼠垂体中ER的分布研究中发preventionofneuronallossinhippocampus[J].ChineseJPhar一 现,ERa免疫反应物质位于细胞核内,ERI3免疫反应ac.Toi..l,..,(':一.? 物质位于胞质和胞膜.本试验结果表明,泌乳过程[.]BuNN'wniakA,
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中山羊腺垂体细胞中ERa和ERI3免疫反应阳性物Ca2levelsandpltireleaseinpititycellline[J].A
质在细胞的定位不同,ERa多数位于胞质,少数存在JPhy.io1Edoco1Metab,2005,288(2):388—397.
于细胞核内,ER[3主要存在于胞质,个别全细胞着[7]李联祥淳沛,王秋丽.雌激素a和p受体在大鼠结膜上皮和
色,与上述的研究结果不完全一致,这提示不同的动HenleNkN~[J]?解剖,2008,4():35一3?
物在不同的生理时期内ERa和ERG在腺垂体中定[.]李庆章?乳腺发育与泌乳生物学[M]?北京:科学出版社'
位于不同的细胞中不同的位置,提示ER两种亚型[9]步星耀,张云龙,张峰.垂体腺瘤与妊娠的关系[J].实用诊
在腺垂体中的分布的细胞类型不一样,在介导雌激断与治疗杂志,2005,19(11):811
—813.
素的作用可能有所侧
重.[1o]StefaneanuL.Pituitarysexsteroidreceptors:localizationand
参考文献function[J]?EndoerPathol,1997t8(2);91—108?
[1]郑可佳,杨彩荣,张岩,等.ERI3及ERB在小鼠发情周期卵巢[1】]成令忠?现代组织学[M]?上海;上海科学技术文献出版社,
内的表达[J].东北农业大学,2009,7(7).85—89.2003:53l538? [2]樊官伟,何俊,王虹,等.雌激素及其受体信号转导途径的[12]张庆红,陈亚琼,胡玉珍,等?雌激素受体在大鼠垂体前叶的
研究进展[J].中国临床药理学与治疗学,2007,12(3);266—269.分布[J]?解剖,2001,32(3):352—354?
[3]张韶峰,徐春,付淑云.雌激素和多巴胺对大鼠垂体组织中雌
Distribution0fERI】【andERpintheAden0hyp0physis0ftheLactatingGoats
L0Yan—zhi,YANGShuang,HUPeng—xiang,XIONGDong—sheng,
GENGYang—xue,JIANGZhen—xing,ZHAOHui—ying
(CollegeofVeterinaryMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi,712100,China)
Abstract:InordertosthdythedistributioncharacteristicsofERaandERpintheadenohypophysisofthe
lactatinggoats,theadenohypophysisofinearly-lactation,peaklactationandlaterlactationgoatswerecol—
lectedandmadetoslicestoobservethelocalizationofERaandERppositivesubstancerespectivelybyu—
singimmunohistochemicalSPmethod.TheresultsshowedtheERaandERI3positivecellsmainlylocatein
eosinophilsintheparsdistalisofadenohypophysis.ERapostivecellsgraduallydecreaseduringlactation
period,andmainlylocateincytoplasmaintheearlylactationandlaterlactationandinnucleusinpeaklacta—
tion.ThemajorityofER[3positivecellsscatterintheearlylactationandthepeaklactation,afewinthe
laterlactation,andthepositiveproductsmainlydistributeincytoplasma.Whole—
cellarecoloredinthepeak
lactation.TheresuitindicatedthatERaandERt3distributedduringdifferentchromophilcellsinthepars
distalisofadenohypophysisIndifferentlactationperiods.ERaandERpmayplayadifferentroleinthead—
enohypophysishormonesecretionduringdifferentlactationperiods.
Keywords:aden0hypophysis;lactation;estrogenreceptor;immunohistochemistry