HPV分型检测临床应用

HPV分型的临床应用新进展世界范围—国际癌症研究所（IARC）统计全球每年有50万宫颈癌新发病例，28.8万死亡病例其中83%发生于非洲、拉丁美洲和亚洲等发展中国家50％的病例发生在亚洲中国聚焦：每年13万多例新发病例，约占世界新发病例总数的1/4；2009-2011，1000万农村女性免费宫颈癌筛查；2012-2015，5000万农村妇女免费宫颈癌检查；背景宫颈癌发生及筛查宫颈癌成为发展中国家妇女健康和生命的“头号杀手”宫颈癌的发病趋于年轻化，发病年龄一般在40-60岁2006年世界卫生组织指出：如不采取措施，未来10年内因子宫颈癌导致的死亡病例将上升25%。宫颈癌防治已成为全球关注的公共卫生问题！背景全球形势高危型HPV的持续性感染是引发宫颈癌的生物学诱因。HPV持续性感染：如果在间隔4-6个月或6-12个月的相邻2次随访中，同一患者的阴道宫颈检测样本均显示HPV阳性且为同种类型，则称为此种类型HPV的持续性感染。Koshioletal.PersistentHumanPapillomavirusInfectionandCervicalNeoplasia:ASystematicReviewandMeta-Analysis。AmJEpidemiol2008;168:123–137宫颈癌的发生生物学诱因HPV分型高危型与宫颈癌及宫颈病变密切相关，WHO/IARC(2005):16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66疑似高危型：IARC（2009）:66、68、73与宫颈癌有一定的相关性，但由于在人群中的分布频率较低或相关研究数据较少，需进一步研究确认低危型常引起外生殖道湿疣等良性病变，比如6、11、40、42、43、44、54、61、70、72、81、candHPV89等。SchiffmanM,CliffordG,BuonaguroF.Classificationofweaklycarcinogenichumanpapillomavirustypes;addressingthelimitsofepidemiologyattheborderline.InfectiousAgentsandCancer.2009;4:1-8.宫颈癌的发生中国型别分布2009-2012.12，全国42万数据（凯普21分型）阳性率：24.32%（门诊）宫颈癌的发生中国型别分布2009-2012.12，华南区13万数据（凯普21分型）阳性率：23.6%（门诊）宫颈癌的发生阳性率：23.6%（门诊）首选HPV检测欧洲生殖道感染和肿瘤组织（EUROGIN)2007年提出的宫颈癌筛查宫颈癌的筛查HPV分型的应用宫颈癌的筛查专家意见2012AOGIN会议调查结果：问题：对细胞学检查阴性的患者进行基因分型有意义么？1.错误-基因分型并不能带来益处14%2.正确-基因分型可以带来益处86%Sun-KuieTay2012亚太生殖道感染与肿瘤会议（AOGIN2012）HPV分型检测临床应用HPV分型检测用于区分一过性感染或持续性感染在对丹麦20~29岁妇女进行HPV检测时发现：间隔18个月2次检测HPV，相同基因型的HSIL发病风险明显高于不同基因型。（SusanneKKjaer,etal.BMJ.2001:325:7364.）HPV持续性感染：如果在间隔4-6个月或6-12个月的相邻2次随访中，同一患者的阴道宫颈检测样本均显示HPV阳性且为同种类型，则称为此种类型HPV的持续性感染。Koshioletal.PersistentHumanPapillomavirusInfectionandCervicalNeoplasia:ASystematicReviewandMeta-Analysis。AmJEpidemiol2008;168:123–137HPV分型47岁，2010年8月病患到宫颈门诊检查，当时的她已行子宫次全切除手术后两年，做HPV分型检测，结果为HPV58型阳性，细胞学检测为阴道炎症，阴道镜检测为CINⅠ-Ⅱ。对该病患进行随访观察，一年后，病患做HPV分型检测，结果仍为HPV58型阳性，细胞学检测为阴道炎症，考虑到该病患为HPV高危阳性的持续感染，决定对其行Leep诊断性锥切及组织性活检，结果发现该病患为宫颈原位癌(CINIII)。上海市松江妇幼保健院案例分享李女士，25岁，2008年2月到广东省妇幼就诊，发现HPV16（+），TCT：良性反应改变。宫颈重度糜烂。阴道镜：CINⅠ，病理CINⅡ，并进行了宫颈锥切术。2008年9月随访，持续HPV16（+），TCT：HSIL，阴道镜：CINⅡ，病例，CINⅡ累腺。2008年11月随访，HPV16（+），由于怀孕拒绝宫颈活检。2010年6月，产后9个月，宫颈活检：子宫颈鳞状细胞癌。广东省妇幼保健院宫颈病变中心毛玲芝教授案例分享早期的文献报道，HPV的多重感染与宫颈癌直接相关。现在越来越多的报道发现，HPV的多重感染与宫颈癌之间，不存在显著性的关系。潮州宫颈癌筛查工程-广东省妇幼保健院毛玲芝在CIN2以上高级别病变中，多重感染并不常见，以单一感染为主。临床应用HPV分型检测用于区分单一感染或多重感染HPV分型女，41岁，2010年做妇科检查，HPV为多重感染，TCT(-)，医生建议半年后复查。2011年3月患者进行复查，TCT(-)，HPV感染型别比原来少了两个，病人因为少了两个型别很高兴，但妇科主任很重视，建议其进行活检，阴道镜下宫颈表面光滑，无任何异样，主任还建议进行多点随机组织取样，检查结果为原位癌，病人随后被送到省肿瘤医院，妇科主任亲自手术，现已痊愈、恢复出院。分析：1、HPV持续感染是引发宫颈癌的生物学诱因2、病人两次都检测出HPV阳性，但液基细胞检测两次均为阴性，说明HPV检测比细胞学检查具有更高更明显的敏感度。湖南省湘潭市妇幼保健院案例分享不同型别的致癌风险不同不同的高危型促进LSIL向SCC转变的能力有差异。HPV16，18的致宫颈癌风险性大于其他高危型HPV。临床应用HPV分型检测用于阴道镜适应征HPV分型临床应用HPV分型检测用于阴道镜适应征2009/2012年，美国ASCCP发布了HPV基因分型检测指南，明确指出:≧30妇女，细胞学未见上皮内病变和恶性细胞，HPV16，18建议阴道镜;其他HPV高危型，则在12个月后重复HPVDNA检测和细胞学检查。（AmericanSocietyforColposcopyandCervicalPathology,2009）2010年，杨英捷、赵健、毕蕙等人的研究数据表明，HPV31、33的致癌风险也很高，建议HPV31、33直接行阴道镜检测HPV分型44岁女性，2008年10月24日，妇检宫颈光滑，滴虫（+）HPV16，52（+），TCT：炎细胞中度。未行阴道镜检查，2010年10月18日。阴道镜下宫颈活检病理:鳞状细胞癌（中分化）。未按规范筛查及随访，导致宫颈癌发生。广东省妇幼保健院37岁，细胞学检测结果为非典型腺细胞（AGC）并伴有阴道炎症，HPV分型检测为HPV16型阳性；医生建议病人做阴道镜及组织活检，不过，当时病人没有同意。该病患回去后，考虑再三，两个月后才来到医院宫颈门诊做阴道镜检查。对该病患做Leep诊断性锥切及组织性活检发现，该病患为宫颈原位癌(CINIII)。上海市松江妇幼保健院案例分享临床应用HPV分型检测用于ASCUS分层管理NCCN《子宫颈癌筛查临床实践指南》(2012)指出：对发生在成年人的ASC-US&LSIL有3个可供选择的方案，可选择HPV-DNA检测将患者分流、6个月复查细胞学或立即阴道镜检查。道镜即使按照规范流程执行，依然有30%的漏诊HSIL。直接阴道镜检查或多点病理活检，引起创伤和过度诊治（40-60%）。重复细胞学检查，有25%失访率，此外复检会增加病人经济及精神负担。HPV检测：为目前的最优。HPV检测阴性，可列入常规筛查人群；如HPV检测阳性，则考虑配合阴道镜检查。HPV分型临床应用HPV分型检测用于宫颈癌晚期治疗手段的选择HPV分型AdvancedcervicalcancerAddingchemotoRT:HPV18,58:improvingsurvivalHPV16,33:minimalbenefit临床应用HPV分型检测用于宫颈病变的随访宫颈病变治疗后失败的主要原因是同一基因型HPV的持续性感染据瑞典的一项研究，针对完成宫颈锥切术后，术后随访结果有26例CIN复发；22例未复发。术后3个月用PCR方法检测宫颈细胞涂片HPV，其中：26例复发者：25例为HPV阳性22例对照组：全部为HPV阴性实验说明：宫颈病变治疗后检测HPV-DNA，可预测残余病变、估计疗效。HPV分型临床应用HPV分型检测用于宫颈病变的随访HPV分型43岁女性，于2009年4月到广东省妇幼保健院妇检，HPV分型检查结果为HPV16（+），遂行阴道镜检查，拟诊为HSIL，即进行leep术，术后病理检查为CIN2；于2010年9月进行复诊，HPV分型检查结果为HPV56（+），细胞学检查结果为低度鳞状上皮内瘤样病变，阴道镜检查拟诊为LSIL，病理检查为CIN1，该病情有所减轻。31岁女性，每年1次定期体检，于2011年5月体检时，HPV分型检查结果为HPV16、33阳性，细胞学检查为ASC-US，行阴道镜检查，拟诊为HSIL，病理检查为CIN3，即进行锥切；于2011年10月进行复诊，HPV分型检查结果为HPV33阳性，细胞学检查为低度鳞状上皮内瘤样病变，阴道镜检查拟诊为LSIL，病理检查为CIN1，病情减轻，继续观察。广东省妇幼保健院案例分享临床应用HPV分型检测用于指导疫苗的开发针对衣壳蛋白（L1）的IgG和IgA中和抗体在病毒感染的早期较为重要--预防性疫苗默沙东：Gardasil（6、11、16、18）葛兰素史克：Cervarix（16、18）针对早期基因（E6/E7）的细胞免疫反应对最终清除病毒可能更为重要--治疗性疫苗HPV分型预防手段定期进行HPV检测宫颈癌的预防29CE、SFDA认证中国宫颈癌防治工程唯一指定的HPV分型检测产品中国女性HPV数据库的主要承担者凯普HPV21分型30检测原理PCR，PolymeraseChainReaction（聚合酶链式反应）导流杂交技术（凯普自主创新技术）——高效、快速、灵敏、准确凯普HPV21分型导流杂交VS传统杂交导流杂交VS传统杂交33实验过程凯普HPV21分型结果判读与分析凯普HPV21分型对于阴性样本，只有生物素点和IC点同时显色才是正常结果。对于阳性样本，如果生物素点、IC点和阳性点都显色，则结果正常；有些阳性样本，生物素点和阳性点显色，但IC点不显色，结果也是正常。结果判读与分析凯普HPV21分型36产品优势凯普HPV21分型科研项目HPV数据库卫生部临检中心HPV检测行业室间评估WHOHPV网络监测评估国内外核心期刊上发表文章超过170篇，其中SCI收录国际论文20余篇。参与国家863（北京大学附属第一人民医院）和973项目（华中科技大学附属同济医院）以及省市各级地方项目研究20余项。同卫生部合作，凯普公司主导，北大附属第一人民医院、武汉同济医院、复旦大学附属妇产科医院及广东省妇幼联合参与。中国临检中心之前一般只对HPV16和18两种型别进行测试。随着凯普21基因分型的推广，促使了中国临检中心从2012年5月开始对临床机构进行包含HPV16和18之内的多个HPV型别的检测评估。学术影响力2010,2011连续两年参与WHOHPV网络试验评估，国际上使用凯普21基因分型检测产品的实验室（伊朗、马来西亚、中国香港、中国上海，中国潮州）检测结果同WHO提供的标准品检测，对16、18检测灵敏度高。凯普HPV21分型学术影响2011年6月5日，第二届中国凯普HPV学术研讨会凯普HPV21分型国际HPV协会会长，著名HPV研究专家TomBroker说：凯普的HPV基因分型检测产品在宫颈癌筛查方面是一个里程碑。这句话总结出了凯普HPV产品在国际社会上的学术影响力。国际评价凯普HPV21分型40市场份额HPV分型检测中国市场占有量第一HPV分型试剂盒作为国内唯一远销海外的分型产品，已成功打入到西班牙、日本、土耳其、以色列、印度、尼日利亚、新加坡、马来西亚等17个国家。已有1200多家检测机构在使用凯普HPV分型产品。检测网点遍布全国各省，临床检测量已达到580万人份。凯普HPV21分型月经期不可采集标本。（减少给受检者的损伤）月经正常妇女，在月经来潮后10～18天为最佳检查时间不可在碘试验和醋酸试验之后采集样本。（可能会抑制PCR反应）检查前48小时内不要作阴道冲洗，不要用避孕药膏等阴道内用药物。（可能会抑制PCR反应）检查前48小时最好不要行性生活。（一过性假阳性）样本采集后，注意避免交叉污染。注意事项（1）样本采集采集部位HPV-DNA检测样本是子宫颈转化带的脱落细胞。妊娠取样：与非妊娠期相比,妊娠期由于高水平性激素的作用,使宫颈鳞柱状细胞交界线外移,柱状上皮暴露于宫颈阴道部,易于取材,并不增加检查的难度。妊娠进行取样是安全的（NCCN.2012）样本采集凯普宫颈细胞采集器及细胞保存系统对于采集足够的宫颈脱落细胞和长期保存细胞样本十分必要。为了保证所采集细胞样本的质量，要求在采集细胞前先用棉拭子拭去宫颈口的分泌物。凯普一次性宫颈细胞采集器采集工具样本采集HPV核酸分子测序21种人乳头瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒37种人乳头瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒13种高危型人乳头状瘤病毒核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒14种高危型人乳头状瘤病毒联合16/18基因分型检测（12+2）试剂盒14高危HPVE6/E7mRNA检测试剂盒五个产品&一项服务导流杂交通用荧光PCR平台HPV系列参评产品：凯普21分型、13荧光高危、14高危荧光分型（12+2）参评实验室：伊朗、马来西亚、中国香港、中国上海、中国潮州共提供10个检测数据。凯普21分型产品在5个实验室参加测评，其中对HPV16型别检测灵敏度5个实验室均可达5IU/5μl，对HPV18型别检测灵敏度4个实验室可达5IU/5μl。凯普14高危荧光分型（Hybribio14HR，12+2）产品在3个实验室参加测评，检测结果同WHO提供的标准品检测100%符合。凯普13高危（Hybribio13HR）产品在2个实验室参加测评，检测结果100%符合。良心品质科学管理THANKYOU