抗体工程研究进展沈倍奋

null抗体工程研究进展抗体工程研究进展沈倍奋 军事医学科学院基础医学研究所null治疗性抗体的研发阶段治疗性抗体的研发阶段靶标发现 抗体制备 抗体筛选、确认和优化 中试工艺研究 临床前研究 临床研究主要研究进展主要研究进展靶抗原的发现 抗体人源化改造及人源抗体制备 提高抗体效应功能 提高抗体表达量 其他null靶抗原的发现nullTRAIL: TNF-related apoptosis-induced ligand TRAILR: DR4、DR5、DcR1、DcR2、OPGnullProtein extraction and digestionTreated/SickControl/HealthyMass SpectrometerProtein peptidesidentificationMS spectraquantificationcharacterizationPOPhosphorylationOxidation… post translational modifications (PTM)Peptides and MS/MS spectraHPLCProteomicsnull20a5-6 Heavy Chain功能单抗识别表位可能是一个新的药靶？null主要研究进展主要研究进展靶抗原的发现 抗体人源化改造及人源抗体制备 提高抗体效应功能 提高抗体表达量 其他null治疗性抗体产生抗－抗体的比例抗体人源化的主要技术抗体人源化的主要技术嵌合抗体 CDR移植, FR移植, SDR移植 表面氨基酸残基人源化 抗原表位定向选择 null嵌合抗体、CDR移植抗体nullSDR人源化方法null鼠抗体（红）和人源化抗体（绿）Fv结构的叠合图表面氨基酸残基人源化null人源化抗体识别的抗原表位与親本抗体相同null抗原表位定向选择HL人抗体重链文库人源抗体制备技术人源抗体制备技术 人х人杂交瘤技术 EB病毒转化技术 人源抗体库 噬菌体抗体库 合成抗体库 核糖体展示抗体库 转基因动物 null大容量抗体库大容量抗体库null合成抗体库null核糖体展示scFv文库 null各种抗体库筛选方法null感染性筛选null抗原库对抗体库筛选方法null提高抗体特异性和亲和力Chain shuffling计算机模建技术定点突变技术nullchain shuffling 原理示意图LHLLLLHLHLHHHHHL更高亲和力抗体亲和筛选建抗体库亲和筛选+重链文库建抗体库轻链文库高亲和力抗体+亲本抗体nullnull抗体H22计算机分子设计与直接进化null[S]-[B] (10-11M)Ka~ 6x1010L/molB/F抗体CH22m亲和常数测定ItemsZ12 Ka=8×107M-1 1/750 CH22 Ka=9×109M-1 1/6.5 mCH22 Ka=6×1010M-1 1 Remicade® Ka=1×1010M-1 1/6Antibody affinitynull移植人免疫球蛋白的小鼠null抗体结构信息具有重要的研究价值nullnullHer2靶点人源抗体（HF)的设计与验证新抗体或抗体类似物的设计新抗体或抗体类似物的设计以抗原－抗体复合物的晶体结 构设计新抗体 以人抗体Fc为支架设计类抗体 以全人抗体为支架设计小抗体 以非Ig的人蛋白为支架设计功能分子 nullPT4－Linker－FC融合蛋白的构象 PT4-Linker-FC与TNF-α相互作用复合物的构象 拮抗肽－linker－Fc融合蛋白设计nullnull单域抗体（PTVH5）设计 PTVH5与TNF形成的复合物模型null单域抗体 单链抗体(scFv)单链抗体（TSA1、TSA2）设计主要研究进展主要研究进展靶抗原的发现 抗体人源化改造及人源抗体制备 提高抗体效应功能 提高抗体表达量 其他null抗体药物的作用机理抗体药物的作用机理直接效应 诱导凋亡 抑制增殖 阻断生长因子或生长因子受体 干扰血管生成 间接效应 依赖补体的细胞毒（CDC） 依赖抗体的细胞毒（ADCC) 作为毒素、放射性同位素和细胞 毒药物的载体 形成抗独特型抗体 通过双特异性抗体靶向效应细胞null抗体偶联细胞毒物质null抗体融合蛋白null双功能抗体作用原理nullBsAbBsAb效应细胞靶细胞触发受体膜表面分子 NK细胞 CD16肿瘤细胞HER2/neu抗HER2/neu×抗CD16 BsAbBsAb双特异性抗体介导的杀伤作用机制 （a), BsAb桥连效应细胞和靶细胞；(b), 连接的触发分子启动细胞毒反应；(c) , 效应细胞对靶细胞产生致死性杀伤反应。 细胞毒反应null细胞内抗体：在细胞内合成并作用于细胞内组分的抗体细胞核EGFREGFREGFRnull抗体的ADCC和CDC效应提高ADCC和CDC的策略提高ADCC和CDC的策略抗体Fc突变 改变抗体糖基化nullRituximab Fc的三维结构nullRituximab突变体与C1q的结合主要研究进展主要研究进展靶抗原的发现 抗体人源化改造及人源抗体制备 提高抗体效应功能 提高抗体表达量 其他提高表达量的方法提高表达量的方法应用扩增系统 GS/DHFR 弱化选择标记基因 应用有利于基因表达的元件 强启动子 强增强子 反式作用元件 位置效应（position effects)nullnullCre-LoxP定点整合系统null工程细胞株lacZ-Zeocin可扩增 转录活性位点‘Hotspot’-taged FRTnullnullnull抗体的糖基化主要研究进展主要研究进展靶抗原的发现 抗体人源化改造及人源抗体制备 提高抗体效应功能 提高抗体表达量 其他null抗体可变区和框架区的影响 抗体稳定性 可溶性 折叠动力学 表达nullPEG化的抗体或抗体片段null重组多克隆抗体 重组多克隆抗体 重组多克隆抗体优点： 可大量生产，批间稳定性好 结合抗原的亲合力高 识别多个抗原表位，对复杂靶抗原的 治疗效果好 对于易变的抗原也能有效 null