血液学一般检查null实验一 血液学一般检查 实验一 血液学一般检查 [内容]
血红蛋白测定(氰化高铁血红蛋白测定法)
白细胞计数(White Blood Cell Count) 1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 该法具有操作简便,结果稳定可靠,试剂容易保存等优点,被国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐为参考方法,为我国测定血红蛋白首选方法。null血液在血红蛋白转化液中溶血后,血红蛋白被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋白(Hi),后者与...
null实验一 血液学一般检查 实验一 血液学一般检查 [内容]
血红蛋白测定(氰化高铁血红蛋白测定法)
白细胞计数(White Blood Cell Count) 1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 该法具有操作简便,结果稳定可靠,试剂容易保存等优点,被国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐为参考方法,为我国测定血红蛋白首选方法。null血液在血红蛋白转化液中溶血后,血红蛋白被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋白(Hi),后者与氰离子(CN-)结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白(HiCN)。在特定波长(540nm)和光径(比色杯内径1.0cm)条件下具有一定的吸光度,通过用标准液制备的标准曲线,可求出血红蛋白浓度来。 原 理Hb Hi+ CN- HiCNK3Fe(CN)6null
[试剂]
血红蛋白转化液(文齐氏液):
氰化钾(KCN) 0.05g
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6] 0.20g
无水磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.14g
Triton X—100 1.0ml
蒸馏水 加至1000ml
[器材]
1.血红蛋白吸管,5ml吸管
2.大试管
3.722分光光度计上述试剂为淡黄色溶液,贮存于棕色瓶中室温保存,其中非离子表面活性剂可加速溶血,缩短转化时间,防止因血浆蛋白改变引起的混浊[标本来源] EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血 [操作][操作]1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大试管中。2.用血红蛋白吸管吸取全血20µl,轻拭管尖外余血,并准确调节血柱液面至20µl。加入到准备好的血红蛋白转化液底部,并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液,充分混匀,静置5分钟。
null3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定,波长540nm,光径1.0cm。4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量null将HiCN标准液倍比稀释(如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L)后,在所用的分光光度计上540nm处,光径1.0cm,以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,或求出换算常数K(K=ΣHb/ΣA)。则通过待测标本吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度(Hb=K×A)。
[附]HiCN标准曲线绘制和K值计算:null[参考值]
成年男性: (120~160)g/L
成年女性: (110~150)g/L
新生儿: (170~200)g/L
[
]
1.试剂因含氰化钾,虽浓度较低,但在配制、保存、使用中需妥善。
2.标准曲线或K值,应定期检查、校准。
3.722分光光度计的使用:转化液作空白(可共用)。透射比模式,开盖调0,闭盖调100;吸光度模式比色。[报告方式]
吸光度:
Hb:__g/L(小数点后留一位)2.白细胞计数2.白细胞计数[原理]
血液用白细胞稀释液(2%醋酸溶液)稀释,使红细胞溶解,白细胞形态更加清晰后,充入血细胞计数池,于显微镜下计数一定体积内的白细胞数,经换算求出每升血液中的白细胞数量 null1.血细胞计数板,盖玻片
2.血红蛋白吸管(具有10µl及20µl刻度)
3.1ml吸管,小试管,玻棒
4.光学显微镜
[器材]null[试剂]
白细胞稀释液:2%冰醋酸
[标本来源]
EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血
null1.加稀释液:取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。
2.加血:用血红蛋白吸管取全血20µl,轻拭管尖外余血,准确调节血液液面至20µl处,将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中(即小试管底部),迅速将血液放出,并用上清液吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。
3.溶血:混匀后室温静置,待液体变为棕褐色,即红细胞被完全破坏。
4.冲池:用一次性吸管取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池(一次充好,液体不可外溢,不可有气泡,否则擦净重充),室温水平静置2~3分钟,待细胞下沉后显微镜下计数。
[操作]null5.计数:将血细胞计数盘放在显微镜载物台上,低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数(压线细胞:数上不数下,数左不数右)
6.计算:白细胞/L=(N/4)×10×106×20=(N/20)×109式中N表示四个大方格内数得的白细胞总数。
/4:为平均每个大方格(0.1mm3)稀释液内
WBC数。
×10:将一个大方格白细胞数换算为1µl
内的白细胞数。
×106:1L=106µl。
×20:为血液稀释倍数。
白白白白白细胞计数区nullnullnullnull白细胞计数操作步骤null[报告方式]
左上: 右上:
左下: 右下:
换算
:
白细胞数(WBC):__×109/L
[参考值]成人: (4~10)×109/L
新生儿:(15~20)×109/L
null1、EDTA-K2抗凝全血使用前必须混匀。
2、计数盘和盖玻片在使用前需用纱布擦拭干净。
3、血红蛋白吸管内腔要干燥,否则会影响吸血量。
4、在稀释液转为棕褐色后方能充池计数,否则因
RBC残存而干扰计数使结果偏高。
5、显微镜调节:光镜光圈调暗,光源可调亮,微调计数。
6、用好的器材及时清洗(Hb吸管、计数盘、盖玻片、吸管)
[注意事项]
实验报告(注意学号,报告下次实验交)实验报告(注意学号,报告下次实验交)1 原理(0.5分)
2 简单步骤(0.5分)
3 实验结果(2分)
原始数据、最后报告各1分
4 分析讨论(2分)
附注附注 1、实验操作不考核,但实验成绩占整个实验诊断成绩总分的15%,包括实验报告成绩及平常表现。
2、共4次实验,当堂的实验报告在下次的实验课交,最后一次实验不要求完成实验报告。
3、实验纪律、值日安排
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