半枝莲多糖的抗肝癌作用及其机制的研究

癌症进展杂志翟穿盖5．q芰7雾惫；期 3310NCOLOGY PROGR 2009VoL7Ess．M删 ． ，№3 半枝莲多糖的抗肝癌作用及其机制的研究△ 叶华崔燎 广东医学院广东天然药物研究与开发重点实验室，湛江524023 摘要 目的探讨半枝莲多糖(SPS)的抗肝癌作用及其机制。方法建立小鼠移 植瘤模型，采用荷瘤小鼠抑瘤率检测SPS对H22肝癌小鼠的抗肿瘤作用；制备荷瘤小鼠 脾细胞悬液，检测SPS对脾淋巴细胞增殖和脾细胞分泌IL一2和TNF—d的影响。结果 SPS在50—200ms／(kg·d)范围内可抑制小鼠H22肝癌的生长，促进荷瘤小鼠脾淋巴 细胞增殖，提高脾细胞分泌IL一2和TNF—d的水平。结论SPS可能是通过增强机体免 疫功能达到治疗肿瘤的功效。 关键词半枝莲多糖抗肿瘤脾细胞增殖IL一2-rNF—d 中图分类号耵35．7 文献标识码A Anti——hepatocarcinoma polysaccharides effectofscutellariabarbata anditsmechanism△ YeHuaCuiLiao GuangdongKeyLaboratoryforResearchandDevelopmentofNaturalDrugs，GuangdongMedicalCoHege，Zhanjiang524023，China ObjectiveTostudytheanti—·hepatocarcinomaeffectofScutellariabarbataPolysaccharidesandits mechanism．MethodsThebearingtumormousemodelwithHepatoma一22wasestablished．andthein- hibitoryrateofSPSwasdetected．ThespleencellsfromH22一bearingmicewereculturedinvitro，and theproliferationoflymphocytesWasdetected．Furthermore．IL一2andTNF一仅intheculturesupema。 rantsweredetectedbyELISAassay．ResultSPSat50—200mg·kg～·d一1inhibitedthedevelopment oftransplantedtumorinmice，stimulatedtheproliferationoflymphocytes，andactivatedmousespleen cellstosecreteIL一2andTlNF一仅significantly．ConclusionSPSinhibitsthedevelopmentoftransplan— tedtumorinmiceevidently，whichmaybemediatedbyenhancingthefunctionofimmunecells． KeywordsScutellariabarbatapolysaccharides；anti—tumoractivity；proliferationoflymphocytes； IL一2：TNF—a OneolProg，2009，7(3) △基金项目：广东医学院青年基金资助项目(项目编号：XQ0717) 论 著 万方数据 论 著 癌症进展杂志2009年5月第7卷第3期 半枝莲为唇形科植物半枝莲(Scutellaria barbataD．Don)的干燥全草，别名并头草、狭 叶韩信草等，具有良好的抗肿瘤活性¨’21，是近 年来国内外抗肿瘤中药的研究热点。半枝莲多 糖(Scutellariabarbatapolysaccharides，SPS)是 从半枝莲中分离的主要有效成分之一，研究表 明可提高小鼠溶血素水平pJ，抑制S180荷瘤小 鼠肿瘤的生长[4’5]。本文通过建立小鼠体内移植 性肝癌模型，观察半枝莲多糖的抗肝癌作用， 并对其作用机制进行初步探讨。 阿一砑料和方法一 1．1实验材料 昆明种小鼠，18～229，雌雄各半，广东医 学院实验动物中心提供；小鼠肝癌H22细胞株， 本室保存；半枝莲多糖，本室自制；注射用环 磷酰胺(cytoxan，CTX)，上海华联制药有限公 司；M1，I'、ConA和LPS，美国Sigma公司； RPMI一1640，美国GIBCO公司；小鼠IL一2和 TNF—Ot定量ELISA试剂盒，晶美生物工程有 限公司提供(进口分装)。 1．2实验方法 1．2．1荷瘤小鼠模型的建立无菌条件下取传 代6～7d的H22肝癌小鼠腹水，用生理盐水 (normalsaline，NS)稀释成含量为1×107／ml 的细胞悬液。小鼠右侧腋窝皮下接种0．2IIll细 胞悬液制备实体瘤模型。 1．2．2分组及给药将接种H22细胞24h后 的小鼠随机分为5组，每组各12只。模型组， 每天灌胃给予NS0．4ml；CTX组，腹腔注射给 予CTX20mg／(kg·d)，SPS低、中、高剂量 组分别灌胃给予SPS50mg／(kg·d)、100mg／ (kg·d)、200ms／(kg·d)(用NS配制)。连 续给药10d。 1．2．3对荷瘤小鼠抑瘤率的影响末次给药24 h后，颈椎脱臼处死，常规取实体瘤称重，计 算肿瘤生长的抑制百分率(抑瘤率)。抑瘤率= (模型组平均瘤重一治疗组平均瘤重)／模型组 平均瘤重×100％。 1．2．4荷瘤小鼠脾细胞悬液的制备无菌条件 0NCOLOGYPROGRESS，May2009．VoL7，No．3 下分离小鼠脾脏，剪碎后在200目不锈钢滤网 上用玻璃注射器针芯研磨，RPMI一1640培养液 洗涤2次制成单细胞悬液。 1．2．5小鼠脾淋巴细胞增殖实验将制得的脾 细胞悬液用RPMI一1640培养液调整浓度至1X 10‘／rnl，96孔板每：fLirt入100斗1细胞悬液，再 分别加入含ConA和LPS的RPMI一1640完全培 养液1001xl(不含酚红，终浓度为5mg／L)，48h 后加入MTI'液100肛1(终浓度0．5mg／L)，继续 培养4h，弃上清，每孔加二甲基亚砜150一。 酶标仪测A啪值。刺激指数SI=实验孔A值／对 照孔A值。 1．2．6IL一2和TNF—Ot含量测定收集培养 的脾细胞上清液，ELISA测定IL一2和TNF一仅 的含量。 1．3统计学方法 应用SPSSIL0软件处理数据，采用单因素 方差分析。 {2 结 果 2．I SPS对H22肝癌小鼠瘤重的影响 50～200ms／(kg·d)SPS均能抑制1-122肝 癌在小鼠体内的生长，随着给药剂量加大，瘤 重下降，抑瘤率上升，显示出一定的抑瘤趋势， 50ms／(kg·d)剂量组与模型组相比有差异 (P<0．05)，100、200me,／(kg·d)剂量组与 模型组相比有显著性差异(P<0．01，表1)。 表1 SPS对1-122肝癌小鼠瘤重的影响(叉±s。n=10) 组 体重(g) 抑瘤率(％) 模型 2．424-0．93 一 CTX 0．95±0．32” 60．74 SPS(L) 2．04±0．72’ 15．7 SPS(M)1．64±0．57” 32．23 SPS(H)1．50±0．59” 38．02 注：‘P