《血红蛋白含量测定》实验综述报告

《血红蛋白含量测定》实验综述报告 陈雨京 （安徽医学高等专科学校，安徽 合肥 230061） 【摘要】血红蛋白含量测定是医学检验专业实验课中的重要内容。本文通过对国内外学者近年来的研究成果的综述，使学生了解血红蛋白含量测定的最新科研动态，并掌握几种简单实用的测定。 关键词 血红蛋白含量；测定；评价 0　前言 血红蛋白是由珠蛋白、亚铁血红素等组成,作为红细胞内的一种机能蛋白，在生物体内起到传输氧气、传递电子等功能，与氧和能量代谢有关的重要活动。在临床上出现各类贫血、白血病及心脏病等症状常与血红蛋白异常有关，因此，人体血液中和尿液的血红蛋白含量的测定是临床检测的一个重要内容。通常用血红蛋白内的珠蛋白和亚铁血红素在血液中的总浓度来表示。血红蛋白成分的评价应用范围较广，其涉及动物学、医学、体育学、生物工程学等领域。目前，随着检验技术的飞速发展和医疗器械的不断改进，目前，血红蛋白含量检测方法主要有比重法[1]、比色法[2]721分光光度仪法[3]、光电比色[4]、电流阻抗法[5]、胶体金法溶血测试条[6]等6个不同方法测定。 1　比重法 比重法是血红蛋白测定的最原始的方法，在血库或大量的献血员采血时为了节约时间，看是否贫血，在硫酸铜溶液中加入一滴于溶液中，通过其浮力方法是否大于排开水的重量如果沉入杯底，可以献血，血滴漂浮为贫血。通过血滴在水中的比重变化来观察人体是否贫血，此方法是基于对血滴重量和在水中浮力进行测量，通过肉眼观察，粗略估计而得出的。是依据阿基米德原理，血红蛋白是由各种亚铁血红素等构成的，血红蛋白内珠蛋白和亚铁血红素的量多少，直接影响血红蛋白含量多少，因此通过血红蛋白比重法可推算出是否贫血。该方法不需要特定的设备，操作简单，但准确度低，没有准确的文字描述，不适合推广。只用于一般体检且对受试者体能状况有一定的要求，故对体质较弱的人群不要采用。 ２　血红蛋白目测比色法 血红蛋白目测比色法是对比重法的替代，此测定器材包括两个部分，一个是比色管，一个是参照比色槽。取0.1mol/L稀盐酸溶液2-3滴加于比色管中，再加20ul血液于比色管中，混匀、静置15分钟，不断加蒸馏水于亮光处与比色槽颜色相对照一样，液体的高度即可读取刻度即血红蛋白含量。由于指定颜色与刻度存在对应关系，进而可以推算出受试者的血红蛋白浓度。比色法的优点是受试者可以准确知道血红蛋白含量。缺点是目测视觉易产生读数误差，不利于大量标本测定。适合乡镇卫生院，诊所等。 3　721分光光度法 血红蛋白含量在比色法测定时不太稳定都是定性，不易于定量数值观察，易于出现误差，721分光光度仪法：取氰化高铁血红蛋白转化液5毫升加入20微升血，混匀后静置5分钟，混匀后倒入比色杯中，转化液调零，利用其在540纳米波长下，测定其吸光度。但此法需要（50 g/L、100 g/L、150 g/L、200 g/L）血红蛋白液校正其K值，不然其测定结果乘以367.7就有误差。此法可以反映血红蛋白含量情况，因其试剂、仪器干扰因素比较多测定时存在一定误差，但该方法简便易行，基层卫生所、乡镇卫生院、实验室单个检测用，缺点：不利于普查。 4　血红蛋白仪光电比色法 江苏生产的XK-Ⅱ型血红蛋白仪是依据郎伯-比尔光吸收定律，利用光电比色原理测定血红蛋白含量的专用检测仪器。测定方法，调零、校正取一只试管加入氰化高铁血红蛋白100 g/L标准液仪器校正后，定标、测试，5毫升转化液加入20ul血液混匀静置5分钟后，在把溶液混匀，吸管插入试管底部，按键即可。此种方法显示数字“三位”，测量范围：0-200g/L,时间测定＜8秒。线性误差当样品＜0-100g/L时，±2g/L;样品＞100g/L时，±2g/L，温度控制在5℃—35℃。XK-Ⅱ型血红蛋白仪法适合大范围普查，目前在国内院校学生体检被广泛应用。缺点，不能自动所测得血红蛋白含量的数据，做完标本吸掉不利于再分析，也不利于数据自动分析统计。 5　库尔特电阻抗法 全自动血球分析仪在全世界广泛应用比较普及，其应用最多仪器原理是电流阻抗法，其利用血细胞与稀释液相比是相对不良导体当血细胞悬浮电解质溶液中，将小孔管插入细胞悬液，使其小孔管内加入溶血剂后，红细胞溶解释放出血红蛋白，并与溶血剂中有关成分形成血红蛋白衍生物，在540nm特定波长下比色，吸光度与血红蛋白含量成正比，可直接反映血红蛋白浓度。电流阻抗法还能对血红蛋白含量以外的其他成分如白细胞、血小板等成分测定, 这是其它测定技术无法办到的，该法比常用的比色法、比重法测定方法结果精确可靠, 而比721分光光度法等在实验室技术成本、难度高、安全无创伤, 比较适用于大型医院，群体人群实验科学研究应用, 对诊断贫血、监测慢性病人等疾病有重要价值。目前也在医疗康复机构、营养研究机构、健身俱乐部、都在普及使用。它的操作过程简单易行, 对那些用血红蛋白难以测定的人群如儿童、老人、病人更为实用。缺点:一般家庭不能普遍使用。二：定试条费用比较高, 应用仍有局限性。随着电阻抗技术的不断发展，已有全自动、手提式半自动分析仪并用式测定仪问世。 6　胶体金法溶血测试条 胶体金法溶血测试条是对在血液输血中血液制品中游离血红蛋白含量多少测定的应用，来判断血液制品质量和安全输血的重要指标之一，也是一种快速筛查方法。方法按照《全血及成分血质量要求》，全血保养液为ACD-B时血浆中游离血红蛋白浓度≤0.29g/L、全血保养液为CPDA-1时血浆中血红蛋白≤0.72g/L 和解冻红细胞游离血红蛋白含量≤1.00 g/L的标准，该法适合在大、中医院或血站对血液制品中游离血红蛋白含量的快速筛查。现在血站用于血液制品中血红蛋白的检测方法，大多采用经典邻甲苯胺法，但由于该方法中的邻甲苯胺具有致癌性作用，针对这一问已有许多学者对血浆中游离血红蛋白检测的其他方法进行了大量研究。胶体金免疫层析法( GICA)是其原理是将胶体金标记、免疫检测和层析技术三者有机结合在一起的固相标记免疫检测技术，因其操作快速、简便、稳定性好、特异性强、实验条件不易被污染和要求不高等优点，特别是随着近几年来胶体金技术的发展，该方法的检测已可达到纳克级的水平。 7　结语 综上所述, 血红蛋白含量测定方法到目前来说比较多，每种测定方法都包含该种方法原理、精准性、操作性、安全性、对适用不同人群在价格等方面存在较大差异。选取适宜的测定方法，对血红蛋白含量的测定、研究也具有一定的重要意义。目前对血红蛋白含量测定还没有一种既简单又精确的理想方法。所以我们要在今后的实际操作工作中，可根据不同的目的选用不同的测定方法。 参考文献 ［1］袁健．《身体成分测定》实验综述报告[J]．科技信息·高校讲坛，2013，09：211． ［2］唐宁莉，方业毅，覃温露．刚果红共振散射光谱法测定血红蛋白[J].分析试验室杂志，2013，02：102． ［3］方跃强，王文娟，陈江，邵利进，等．EmoCueH仪和临床血液分析仪测定血红蛋白结果的可比性研究[J].中国卫生检验杂志,2010(20):05－988 ［4］雷皖秋.胶体金法溶血测试条在检测血液制品中游离血红蛋白的应用[J]．中国输血杂志·实验研究，2011(24):12－260 ［责任编辑：薛俊歌］ 1