高效液相色谱法测定银杏叶分散片中总黄酮醇苷含量

医药导报2008年7月第 27卷第7期 ·849· 仪，记录色谱 图；另取醋酸地塞米松对照品适量，用 甲醇制成 25 g·mL～，同法测定。按外标法以峰面积计算样品中醋酸地 塞米松(C H FO )的含量。并将测定结果与紫外分光光度 法。’进行比较，结果见表 2。 表 1 回收率实验测定结果 n=9 070514 96．3 070516 97．6 070927 102．2 0．4 0．6 O．4 99．2 99．5 101．1 0．3 0．3 0．4 3 讨论 在本实验条件下，制剂 中另一有效成分樟脑 ，不干扰醋酸 地塞米松的测定，其他辅料在相应位置上也无干扰峰，理论塔 板数按醋酸地塞米松计算为 5 131，分离度为4．57，以上各项指 标均符合《中华人民共和国药典》的有关规定。 对复方醋酸地塞米松搽剂中的主要成分醋酸地塞米松采 用高效液相色谱法进行含量测定 ，经过方法学的评价，证明该 法稳定 、准确、可靠，可用于本制剂 中醋酸地塞米松 的含量测 定。 实验中发现 ，醋酸地塞米松的回收率实验较理想，但样品 测定中发现贮存期样品的高效液相色谱测定结果均低于紫外 分光光度测定结果；实验中还发现贮存期样品的高效液相谱图 (c )中在保留时间4．12 min的位置多出一色谱峰，这是否与制 剂中醋酸地塞米松在贮存过程中已部分分解成地塞米松有 关 J，有待进一步研究。 [参考文献] [1] 浙江省食品药品监督管理局．浙江省 医疗机构制剂规范[M ． 2005：308． [2] 顾伟鹰 ，张和平，黄伟芬，等．复方醋酸地塞米松搽剂的含量测定 [J]．药学实践杂志，2005，23(3)：167—169． [3] 国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[Z]．北京：化学工 业出版社，2005：842—843． [4] 袁建平 ．李文德．HPLC法测定眼药水中的地塞米松磷酸钠及分解 产物f J]．现代应用药学，1995，12(3)：35． 效液相色谱法测定银杏叶分散片中总黄酮醇苷含量 陈桂红 ，钟锐生 ，黄清松 (1．广东省深圳市宝安区西乡人民医院药剂科，518102；2．广东药学院，广州 510006) [摘 要] 目的 建立高效液相色谱法测定银杏叶分散 片中总黄酮醇苷含量的方法。方法 用十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂；以甲醇-0．4％磷酸溶液(50：50)为流动相；流速为 1．0 mL·min～；检测波长 360 nm；柱温 35℃。结果 线性关系良好，加样平均回收率为99．38％，RSD为 0．72％(n=6)。结论 该法操作简便、分离效果好，结果准确、精 密度高、重复性好 ，可作为该制剂的质量控制方法。 [关键词] 银杏叶分散片；总黄酮醇苷；色谱法，高效液相 [中图分类号] R927，2 [文献标识码] A [文章编号] 1004~781(2008)07-0849-02 银杏叶提取物具有活血化瘀、降低血脂、清除自由基、抗衰 老等功效和作用 ；同时还具有改善血液流变学等多种药理作 用 。银杏叶分散片是银杏叶片的剂型改变，其主要活性成 分为总黄酮苷醇和萜类内酯。笔者参照《中华人民共和国药 典12000年版、2002年增补本中“银杏叶提取物”“银杏叶片”质 量标准中总黄酮醇苷的含量测定方法 ，建立银杏叶分散片中 总黄酮醇苷的含量测定方法，并进行系统的方法学考察。 1 1．1 仪器 LC一10A型高效液相色谱仪，包括 SPD一10A uV检 [收稿日期] 2007—10—10 [作者简介] 陈桂红(1972一)，女，广东人，副主任药师，学士，从 事临床药学工作。电话 ：0755—27956255，E-mail：ehghong@yeah．net。 测器，LC一10A色谱工作站(日本岛津公司)。 1．2 试药 银杏叶分散片(湖南华纳大药厂有限公司产品，批 号：030401)；对照品槲皮素、山柰素和异 鼠李素(由中国药品生 物制 品检定所提 供，批号 分别 为：10081 905，0816—200002， 110860—200204)；甲醇色谱纯、磷酸为纯。 2 方法与结果 2．1 色谱 条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；Nova— PakC 8色谱柱(3．9 mm×150 mm，5 g)以甲醇-0．4％磷酸溶液 (50：50)为流动相 ；流速为 1．0 mL·min～；检测波长 360 nm。 2．2 对照品溶液的制备 分别精密称取经五氧化二磷减压干 燥 24 h的槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品，各加甲醇制成每 1 mL分别含 0、03，0．03，0．02 mg的溶液，作为对照品溶液。 2．3 供试品溶液的制备 取本品 10片，除去包衣，精密称定。 维普资讯 http://www.cqvip.com · 850· Herald of Medicine Vo1．27 No．7 July 2008 研细，取相当于总黄酮醇苷 19．2 mg的粉末，精密称定 ，精密加 入甲醇20 mL，称定重量，超声处理 20 min，放冷，再称定重量， 用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 10 mL，置 100 mL锥形瓶中，加甲醇 10 mL、25％盐酸溶液 5 mL，摇匀，置 水浴中加热回流 30 min，迅速冷却至室温 ，转移至 50 mL量瓶 中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0．45 tzm)滤过，取滤 液，即得。 2．4 测定法 分别 精密吸取对照品溶液与供试 品溶液各 10 ，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠 李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量 j。总黄酮醇苷 含量 =(槲皮素含量 +山柰素含量 +异 鼠李素含量)×2．51。 2．5 专属性实验 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 l0 L，注入液相色谱仪，记录色谱图，各色谱峰相互之问分离 度良好，柱效高。理论板数按槲皮素峰计算为6 744(>2 500)， 山柰素与异鼠李素峰的分离度 2．11>1．5。 2．6 阴性干扰实验 按处方 比例称取空 白辅料，照含量测定 项下供试品溶液制备方法，制成空白溶液，取 10 注入液相 色谱仪，记录色谱图。结果表明在所测定的槲皮素、山奈素、异 鼠李素出峰处无干扰吸收峰 ，说 明辅料不干扰含量测定。 2．7 线I『生关系考察 精密称取经五氧化二磷减压干燥 24 h 的槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品适量，加 甲醇分别制成每 1 mL含槲皮素 0．031 mg、山柰素 0．032 mg、异鼠李素 0．022 mg 的对照品溶液。分别取上述照品溶液 4，8，10，12，16，20 ，注 入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，以对照品进样量 (rag)为横坐标 ，峰面积为纵坐标，得 回归方程为槲皮素：Y= 1．887×10。X一71 713(r=0、999 6)；山奈 素：Y=1．576× 10。x +22 233(r=0、999 7)；异 鼠李素：Y=1、304×10。X一 1 843．7(r=0．999 8)。结果表明，槲皮素进样 量在 0．124～ 0．620 mg，山柰素进样量在 0．128—0．640 mg，异鼠李素进样量 在0、088—0．440 mg范围内线性关系良好。 2、8 精密度实验 取批号为 030401的同一份供试品溶液，按 含量测定方法，连续测定 6次，分别以槲皮素、山柰素、异 鼠李 素的峰面积进行计算 ，其 RSD分别为0．36％，0．88％，0．87％。 表明本测定方法的精密度较好。 2．9 稳定性 实验 取批号030401的同一份供试品溶液，按含 量测定方法，分别于 0，1，2，4，8 h进样 10 ，记录色谱图，分别 以槲皮素、山柰素、异鼠李素的峰面积进行计算，其 RSD分别为 0．545％ ，0．53％ ，0．84％ ，表明供试品溶液在 8 h内稳定。 2．10 重复性实验 取批号 030401的样品，按含量测定方法 ， 重复测定 6次，分别计算总黄酮醇苷的含量，其 RSD为 0．36％， 表明本测定方法的重复性较好。 2．11 加样回收率实验 取 已测知总黄酮醇苷含量的银杏叶 片样品(批号：030401，含量为每片26．07 mg，平均片重为 0．402 3 g)约 0．2g，精密称定，共取6份，每份分别精密加入对 照 品 甲醇 溶 液 (槲 皮 素 2．625 mg·mL～、山柰 素 1．905 mg·mL～、异鼠李素0．705 mg·mL )1．0 mL，再分别精密加入 甲醇 19 mL，各份均按上述含量测定方法提取、测定。按外标法 以峰面积计算供试品中总黄酮醇苷的含量，计算回收率 ，结果 见表 1。结果表明，银杏叶分散片含量测定方法准确度较高，6 份样品的平均回收率为99．38，RSD为0．72％。 表1 银杏叶分散片总黄酮醇苷加样回收率结果 2．12 样品含量测定 分别取 3批样品，照上述含量测定方法 分别测定并计算槲皮素、山柰素和异 鼠李素的含量，按下式换 算成总黄酮醇苷的含量。总黄酮醇苷含量 =(槲皮素含量 +山 奈素含量 +异 鼠李 素含量 )×2．51。结 果批 号为 030401， 030403和 040305的总黄酮醇苷含量为每片 26、25，25、81和 25．30 mg。 3 讨论 笔者采用 340，360，380 am波长进行过测试 ，其 中360 am 有最大的吸收峰 ，因此采用 360 am波长。笔者在初实验过程 中，分别比较了以下不同的流动相对测定结果的影晌：甲醇一1％ 冰醋酸(30：70)、乙腈一1％冰醋酸(40：60)、甲醇一2％冰醋酸 (32：68)、甲醇-0．4％磷 酸溶液 (50：50)、乙腈一3％ 冰醋酸 (15：85)、甲醇-0．8％磷酸溶液(15：85)为流动相。结果发 现，甲醇-0．4％磷酸溶液(50：50)为流动相时，被测物分离效果 好 ，杂质干扰少 ，故选择其为流动相，且保留时间也适宜。 从以上方法学考察实验结果可知，本总黄酮醇苷的含量测 定方法简单方便，准确，灵敏度 高，重复性好，能够准确测定样 品中总黄酮醇苷的含量。 [参考文献] [1] 潘洪平．银杏叶制剂药理作用和临床应用研究进展[J]．中国中药 杂志，2005，30(2)：93． [2] FUNFGELD E W．Rokan ginkgo biloba．resent results in pharmacology and clinic[M]．Springer—verlag Berlin，Heidelberg，Newyork，London， Paris，Tokyo 1998． [3] MCKENNA D J，JONES K，HUGHES K．Efficacy，safety，and use of ginkgo biloba in clinical and preclinical applications[J]．Altern Ther Health Med，2001，7(5)：70—86，88—9O． [4] 国家药典委员会．中华-~-tL共和国药典(一部)[Z]．北京：化学工 业出版社，2005：597． 维普资讯 http://www.cqvip.com