反相高效液相色谱法测定不同制法华盖散中橙皮苷的含量

反相高效液相色谱法测定不同制法华盖散中橙皮苷的含量 ------精品文档!值得拥有～------ 反相高效液相色谱法测定不同制法华盖散中橙皮苷的 含量 作者:张明昶，邵进明，彭小冰，袁双秀，梁光义 STRONG【摘要】/STRONG目的对华盖散的分煎液与合煎液汤剂中的有效成 分橙皮苷进行含量比较。方法采用AgilentZorbaxSB-C18柱(5μm，4.6mm ×150mm),流动相为甲醇-醋酸-水(34?4?62)，流速为1ml/min，检测 波长为283nm，柱温为25?。结果华盖散分煎液中橙皮苷的平均含量小于 合煎液中橙皮苷的含量。结论橙皮苷在华盖散分煎液与合煎液中含量存在 显著性差异。其结果为该复方的研制开发提供了一定科学依据。 STRONG【关键词】/STRONG华盖散;反相高效液相色谱;合煎;分煎;橙 皮苷 China;2.TheKeyLaboratoryofChemistryforNaturalProductsofGuizhouProvinceandChineseAcademyofSciences,Guiyang,Guizhou550007,ChinaAbstract: ObjectiveTocomparethecontentofthehesperidininthemixedmedicinedecoctionandthesinglemedicinedecoctionofHuaGaiSan.MethodsAnRP-HPLCmethodwasestablishedwithaAgilentZorbaxSB-C18column(5μm，4.6mm × ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 150mm),amobilephaseofmethonal-aceticacid-water(34:4:62),aflowrateof1.0ml/min，acolumntemperatureof25? andadetectionwavelengthof283nm.ResultsTheaveragecontentofhesperidinofthesinglemedicinedecoctionwaslowerthanthatofthemixedmedicinedecoction.ConclusionThereisremarkabledifferenceinthecontentofhesperidinindifferentdecoctionsofHuaGaiSan,whichprovidessometheoreticalbasisforthedevelopmentoftherefinedgranuleoftheHuaGaiSan. Keywords: Huagaisan;RP-HPLC;Singlemedicinedecoctions;Mixedmedicinedecoctions;Hesperidin 中药复方汤剂是中药制剂的传统剂型，在临床使用广泛，但其煎煮具 有随意性，使用不方便;而中药配方颗粒是将单味中药饮片通过水等溶剂， 提取浓缩制得，可以类似中药饮片随证组方，解决传统汤剂使用不便之不 足。但两者的临床疗效是否相近，其有效成分的含量有何差异是中药配方 颗粒能否广泛应用于临床需要解决的重要问。华盖散出自《博济方》， 由麻黄30g，桑白皮30g，紫苏子30g，杏仁30g，赤茯苓30g，陈皮30g， 炙甘草15g等7味药组成，具有宣肺解表，祛痰止咳之功效。主治素体痰 多，肺感风寒证,1,。 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ STRONG 1器材与试药/STRONG Anglent1100型高效液相色谱仪，HP1100/WIND3D化学工作站。DAD检测器。草麻黄EphedrasinicaStapf.，桑白皮MorusalbaL.，紫苏子Perillafrutescens(L()Britt.,杏仁PrunusarmeniacaL.，茯苓Poriacocos(Schw()Wolf.，陈皮CitrusreticulataBlanco.，炙甘草GlycyrrhizauralensisFisch.，均购于贵阳市药材公司，以上药材经贵阳中医学院刘芃教授鉴定且符合2005版《中国药典》?部收载。橙皮苷的对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110721-200512);甲醇为色谱纯;其余试剂均为分析纯。 STRONG2方法与结果/STRONG 2.1色谱条件,2, 色谱柱AgilentZorbaxSB-C18柱，流动相为甲醇-醋酸-水(34?4?62)，流速:1.0ml/min，检测波长:283nm，柱温:25?。其对照品、合煎液、分煎液和阴性对照液色谱图见图1。 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解，制成0.194mg/ml的溶液，备用。 2.2.2合煎液供试品溶液的制备(传统煎液法) 按处方量称取药材粉末(粗粉)，加水300ml，浸泡20min，沸后30min，过滤，滤渣加水300ml，沸后20min，过滤，合并两次滤液，浓缩，干燥，粉碎成粗粉，备用,3,。精密称取粗粉约0.2g，置于25ml容量瓶中，加入甲醇23ml，超声提取30min，冷至室温后定容至刻度，滤过，取续滤液过0.45μm滤膜，滤液作为合煎供试品溶液。 2.2.3分煎液供试品溶液的制备 按处方量分别称取麻黄等7味药材粉末，分别加8倍水，6倍水煎煮两次，合并两次滤液后，干燥，并粉碎成粗粉。将各药材粗粉混合均匀，精密称取相当于合煎处方生药的0.25g干膏，同上法制得分煎液样品溶液。 2.2.4阴性对照溶液的制备 按处方分别称取除陈皮以外的其余6味药材饮片，按上法制成阴性对照溶液。 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 2.3线性关系 考察精密吸取橙皮苷上述对照品溶液精密吸取上述对照品溶液稀释成6个不同浓度，不同浓度的对照品溶液取相同体积进样，按相应色谱条件测定峰面积，以峰面积(A)对含量(C)作线性回归，得回归方程为:A,0.0006C+0.0004，r=0.99995，结果在0.0485,0.2425μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。 2.4精密度实验 精密吸取对照品溶液2μl注入高效液相色谱仪，连续进样5次，测定橙皮苷相应的峰面积，RSD为0.15%。 2.5稳定性实验 取合煎供试品溶液，分别于0，2，4，6，8h进行测定，RSD为1.27,,结果表明合煎液中橙皮苷在8h内保持稳定。 2.6重复性实验 取合煎液供试品6份，按样品测定条件测定橙皮苷含量，RSD为2.38%。 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 2.7加样回收实验 精密称取已知含量的合煎液干膏，分别加入样品中橙皮苷总含量80,，100,，120,的对照品各3份，按橙皮苷的含量测定方法制备样品供试液，同法测定其平均回收率为97.2,，1.6%。 2.8阴性对照实验 取合煎液、分煎液供试品溶液，橙皮苷对照品溶液及阴性对照溶液，各进样5μl,比较色谱图，表明样品阴性部分对测定结果无干扰。结果见图1。 2.9样品测定 分别测定5批平行华盖散合煎液和分煎液的含量，其处方每克生药中橙皮苷平均含量分别为0.6464，0.4249mg?g-1;RSD分别为1.2%，1.3%。 STRONG3讨论/STRONG 两种供试品精密度的比较通过F检验得FF0.05，4，4，则两种供试品精密度之间不存在显著性差异。华盖散合煎液中橙皮苷的平均含量是分煎液中 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 平均含量的1.52倍。通过T检验得Tt0.05,8，故两种供试品中橙皮苷的平均含量之间存在显著性差异。 橙皮苷在合煎和分煎中存在明显差异，说明该复方中各生药在合煎过程中发生了相互作用，它有利于橙皮苷溶出，具体是怎么影响还有待深层次的研究。该处方中盐酸麻黄碱、甘草酸、甘草苷也是止咳的有效成分，其在分煎与合煎中是否具有含量差异，都还需要进行进一步的研究。其综合结果可为该复方的研制和进一步开发提供一定科学依据。 STRONG【参考文献】/STRONG 1,邓中甲.方剂学,M,.北京:中国中医药出版社,2003:39. 中国药典,S,.北京:化学工业出版社，2005: ,2,国家药典委员会. 132. ,3,程磐基.宋元明清药物剂量的考证与研究,J,.上海中医药杂志，2004，38(7):6. ------珍贵文档!值得收藏～-----