黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对促血管新生的协同作用

黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对促血管新生的协同作用 密级:公开学号:,,,,,,,, 南京卞医药犬掌 硕士学位论文 黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对促血管 新生的协同作用 研究生 顾万建 指导教师 杨学文 学科专业 中西医结合临床 所在学院 第一临床医学院 毕业时间 ,,, ,年,月 …??? ,,,,,,,;,, ,,,,,, ,? ? ? ? ;,,,,,,, ,, ,,,,,;,,, , ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,:,, ,,,, ,,, ,,,,,,,:,,,,(,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,;,,,，,,,, ,,,，,,,,, ,， ， ， ， ，， ， ，,,, ，，， ，， ， ， ,学号:,,,,,,,, ,, ,,,,, , 硕士学位论文 黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对促血管 新生的协同作用作者姓名: 顾万建 申请学位级别: 硕士指导教师姓名: 杨学文 职 称: 主任技师学科专业: 中西医结合临床 研究方向: 医学检验学习时间: 自,,,,年,,月,,日 起 至: ,,,,年,,月,,日止论文提交日期: ,,,,年,,月,,日 论文答辩日期: ,,,,年,,月,,日学位授予单位: 南京中医药大学 学位类型: 临床医学硕士学位 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者(需亲笔)签名:,，‖,,如,,年,月，占日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检?鳎梢圆捎糜坝 ?跤』蛏璧雀粗剖侄伪,婧突惚啾狙宦畚摹?保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保蒯。 (请在以上方框内打“,??) 学位论文作者(需亲笔)签名:,挝扣，,年易月,易,, 导师(需亲笔)签名: 加,,年多月肜日 南京中医药大学硕士学位论文 目录摘 要……………………………………………………………………………………………………………………………(，，,,,,,,, ,…………………………………………………………………………………………………………………，,第一部分研究背 景……………………………………………………………………………。, ,血管新生现状………………………………………………………………………………, ,胶原修饰研究现状…………………………………………………………………………, ,中药促血管新生现 状………………………………………………………………………, ,黄芪促血管新生现状……………………………………………………………………((, ,(,黄芪促血管生成的体内研究………………………………………………………(, ,(,黄芪促血管生成在体外实验的研 究………………………………………………(, ,脉络宁促血管新生现状…………………………………………………………………。, ,本研究的意义与 目的…………………………………………………………………………(, ,参考文献…………………………………………………………………………………((,第二部分实验研 究……………………………………………………………………………(, , ,材料与方法………………………………………………………………………………(,, ,(,仪器与试 剂……………………………………………………………………………((,, ,实验方法…………………………………………………………………………………(, , ,(, 黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对鸡胚尿囊膜血管新生的协同促进作用,, ,(,黄芪(脉络宁胶原促进体外胸主动脉内皮细胞血管新生的实验研究………。,,第三部分结果与讨 论…………………………………………………………………………((,, ,结果……………………………………………………………………………………………………………………,, ,(,胶原体外降解 率…………………………………………………………………,, ,(,黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对鸡胚尿囊膜血管新生的协同促进作用,, ,(,黄芪(脉络宁胶原促进体外胸主动脉内皮细胞血管新生的实验研究………((,, ,讨论……………………………………………………………………………………………………………………,, ,有待进一步探讨的问 题…………………………………………………………………(,,，,,,于录……………………………………………………………………………………………………………………………((,,附录一鸡胚培养及绒毛尿囊膜接种…………………………………………………………(,,附录二缩略语中英文对照表…………………………………………………………………(,,攻读硕士学位期间取得的学术成果……………………………………………………………,,弱【 谢…………………………………………………………………………………………………………………………(,, 摘要 摘要 ?,, ,，,? ,,?，, ， 【背景】由人工方法合成临床所需要的组织和器官，并寻找可使支架内快速血管化的方法称为组织工程学。血管生成(,,,,,,,,,,,,，,,,,,—,,,,,,,,,,)在促进细胞生长和组织修复起着重要的作用。有研究表明，黄芪、脉络宁注射液可能具有一定的促血管生成作用，其机制可能与促进血管内皮细胞增殖和,,,的合成，抑制细胞凋亡，上调多种促血管生长因子如血管内皮细胞生长因子(,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ;,,, ,,,,,, ,,;,,,，,,,,)、血小板衍化生长因子(,,,,,,,,(,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,，,,,,)和碱性成纤维细胞生长因子(,,,,;,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,，,,,,)等的表达，提高组织细胞血红蛋白和羟脯氨酸含量有关。按,:,的配比将黄芪与当归作用于,,,上，在血管新生和血管计数方面，其结果在血管新生及计数方面均显著比其他配比组及生理盐水空白组要好，在促进,,,血管新生方面具有更好的作用。尽管许多方面均已证实中药在体内优化促血管生长因子的作用，其局限性在于仅停留在口服和静脉给药方面，我们在过去的研究中已阐明黄芪微乳载入修饰后胶原和, ,,,对,,,血管新生具有相似的促进作用。 【目的】通过将黄芪、脉络宁注射液载入修饰后胶原，观察对促,,,血管新生的疗效，并证明黄芪与脉络宁之间的协同作用，同时探讨黄芪(脉络宁胶原对血管新生的细胞学影响及其可能的机制，为其应用于临床提供理论依据。 【方法】用肝素钠修饰，型胶原，将黄芪注射液、脉络宁注射液及二者混合液加于修饰好的胶原上。实验共分为,组，不加任何处理的单纯鸡胚孵化为空白组、将胶原放入鸡胚尿囊膜上为控制组、胶原中载入,,,黄芪注射液为黄芪组、胶原中载入,,,脉络宁注射液为脉络宁组、胶原中载入各,(,,,黄芪注射液及脉络宁注射液为黄芪，脉络宁组，,,,,,后将各组植入鸡胚尿囊膜孵化，,,后取出，观察鸡胚存活情况及尿囊膜血管生长形状，利用格子法计数鸡胚尿囊膜内和各组胶原内不重复的,个视野毛细血管(,,×)，采用光度计法测定各组血红蛋白含量，同时取创面中心肉芽组织，做病理,,, ,免疫组化后随机取,个视野对,,,,,,,,,,日性细胞数进行计数。应用增殖、迁移、管腔形成实验观察黄芪(脉络宁胶原对大鼠胸主动脉内皮细胞在血管新生各阶段的作用，用,,,,,,, ,,,,实验检测大鼠胸主动脉内皮细胞,,,,的表达。 【结果】各实验组鸡胚尿囊膜内血管呈轮辐状生长及鸡胚尿囊膜包裹标本率高于空白组与控制组，鸡胚尿囊膜内微血管数、胶原内微血管数、血红蛋白含量、,,,,,,,,,,,日性细胞数均高于控制组，差异有显著性意义(,,,(,,):其中黄芪，脉络宁组又高于黄芪组与 南京中医药大学硕士学位论文脉络宁组，差异有显著性意义(,,,(,,)。黄芪(脉络宁胶原能明显促进大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖率，与对照组比较，增加了,,(,,,(,,,(,,);迁移率增加了,,,(,,,(,,,(,,):管腔形成数是对照组的,(,,倍(,,,(,,);同时刺激内皮细胞,,,,蛋白表达增加,,,(,, ? (,,,(,,)。 【结论】黄芪、脉络宁载入胶原后，不仅对鸡胚尿囊膜内血管新生具有促进作用，对刺激血管长入胶原内也有一定的促进作用，两者合用具有协同作用;黄芪(脉络宁胶原能明显促进内皮细胞增殖、迁移、管腔形成，具有显著的促进体外血管新生作用，其机制可能与增加,,,,的表达有关。 【关键词】黄芪;脉络宁;胶原;鸡胚尿囊膜;血管新生 ,,,,,,,, ,,,,,,;, 〔,,;,,,,,,,〕,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,;,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,;,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,(,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,, ,,,,,,(,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,;,,。,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,，,,, ,,, ,,;,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ;,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,，,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,，,,,,,,, , ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,; ,,,,,, ,,;,,,, ,,;, ,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,，,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,, ,,, ,,,,; ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,, ,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ;,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,;,, ;,,,,,,(,,,, ,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,, ,,, ,,,,,,;, ,,,, ,,,,, ,, ,:, ,, ,,, ,,,，,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,,，,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,,,，,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,(,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,;,,, ,, ,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,，,,, ;,,,,,, ,,,,,,;, ,,,, ,,, ;,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,, ,,,,,,;, ,,, ;,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,, ,,;,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,, 〔,,,,;,,,,〕,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,;,,,,,,,，,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,;, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,，,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,，,,, ,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,; 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