白虎追风胶囊的抗炎作用机理
白虎追风胶囊的抗炎作用机理 72
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J~malof(沁nILnlv~Jlyof.rmChln~eMc 文章编号:1007—3213{20C0)叭一0072—04
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'白虎追风胶囊的抗炎作用机理
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摘要:为揭示白虎追风胶囊的抗更作用机理.研究了白虎追风胶囊对佐荆性关节炎(AA)大鼠滑膜白细胞
舟素一l(IL—J),肿瘤坏死因子a(哪一a)和前列膝素(PG)的影响,烈厦对AA大鼠血液中氧自
由基和NO的影响=结果显示:白虎追风胶囊能下调AA太鼠滑膜过度分泌的lIJ一1,哪一a和PG;能降
低^A太鼠过高的LPO和NO水平,使过低的SOD和GSH—Px增高.提示白虎追风胶囊的作甩机制可能与其
抑制滑膜分泌细胞因子和更症舟质,以厦抗氧化作用有关.之々磷锄屯毒I善拦 主题词:@白虎追风胶囊/药理学;白虎加桂枝汤/药理学;关节点,佐荆性/中药疗_击;
关节更,娄风湿/中药疗法;滑膜/分船;白细胞介素一1/
;肿瘤坏死因子/分析
/分析;脂质过氧化作用/药物作用;谷胱甘肽过氧化酶/血液; 前列腺素E类
超氧化物歧化酶/血液;一氧化氪/血液
中圈分类号:R285.5文献标识码:A
白虎追风胶囊是在《金匮要略》白虎加
桂枝汤的基础上加减而成的有效制剂.主要
含有石膏,白芍,细辛,制川乌,桂枝等
药以往研究表明该方对类风湿性关节炎
(队)具有较好的抗炎,消肿及镇痛作 用lJ.大鼠佐剂性关节炎(AA)是常见的 RA实验模型之一,常用于RA发病机制的 研究及抗炎药物的筛选J.本文通过观察白 虎追风胶囊对AA大鼠关节形态学,病理结 构,滑膜细胞功能和血液中氧自由基等的变 ,以求揭示其抗风湿的药理基础和作用机 化
制
l材料与
1.1材料
11.1实验动物Wistar大白鼠5O只,雌 雄符半,2—3月龄,体重180—220g,由广 州巾医药大学实验动物中心提供. 1.1.2实验药品及主要试剂?白虎追风 胶囊:由广州中医药大学药剂教研室提供, 每粒药粉(5/30mg)相当于5z生药的提取 量(包括挥发油和浸膏),实验时以蒸馏水 配成舯L溶液(低剂量)和160g/L溶液 (高剂量);?雷公藤多甙片:上海医科大学 红旗制药厂生产,批号9711201;?弗氏完全 佐剂(FCA),脂多糖(LPs),?型胶原酶 均为美国Sig~na公司产品;?胰蛋白酶(1: 250),Difco产品进口分装;?DMEM培养 粉,Gibco公司产品;?白细胞介素一l(IlJ —
1)B试剂盒,深圳晶美生物
有限公 司提供,批号980717;?肿瘤坏死因子一a (TNF—)试剂盒,北京东亚免疫技术研究 所生产,批号980701;?前列腺素E,
(Pc)试剂盒,苏州医学院提供,批号
9707i9;?一氧化氮(NO)测试盒,军事医 学科学院研究所提供,批号97i029. 收稿日期:1999—03—01:
作者简介:第一作者,男.1965午出生,副教授,医学硕士;
基金项目r采省中医药竹局资助曝题("4o964);广州中医药太学科研摹金资助课题
(o.97O34)
?
期,
第砌
年
第f期施拙进.等.自虎追风腔囊的抗蹙作用机73 12方法
1.2.1大鼠佐剂性关节炎(AA)模型制备 按照文献方法【J用弗氏完全佐剂于每只 太鼠右后足跖皮下注射0.In【j赛炎 1.2.2分组及给药方法将大鼠分为5组: 正常组,AA组,白虎追风胶囊高剂量组 (药高组),白虎追风胶囊低剂量组(药低 组),雷公藤多甙对照组,每组10只,雌雄 各半.造模后2d即开始灌胃,连续28d, 灌胃量为10mL/kg.正常组灌服生理盐水; 药高,药低组分别灌服白虎追风胶囊高,低 剂量溶液;对照组灌服雷公藤多甙混悬液. 1.2.3躁关节病理切片观察于致炎后3O d将大鼠处死,取大鼠右踝关节周围之软组 织及关节滑膜,置10%福尔马林中固定, 作常规石蜡包埋切片,HE染色,光镜下观
察.
1.2.4大鼠滑膜细胞培养上清液的制备【J 于致炎后3od无菌取出大鼠双侧醵关节 滑膜组织,经?型胶原酶及胰蛋白酶消化 后,分离成单个滑膜细胞,用含有5—1L LPS的DMEM培养液配制滑膜细胞悬液(5 ×lo5/L),加入24孔培养板内,每孔1mI, 于37?,5qoCO2培养箱培养48h,收集上清 液,一柏?保存待测IL—l,TNF—q和 PGB等活性.
I.2.5滑膜细胞培养上清液【l_一I,F—q, PGE'活性的检测IL一1活性采用ELISA法 检测,TNF—a,PGFa活性采用放射免疫法 检测,均按试剂盒
操作.
1.2.6红细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性测定采用邻苯三酚自 氧化法J.
1.2.7全血谷胱甘肽过氧化物酶(glutathlone
peroxldase,GSH—Px)活性洲定采用IYFNB 直接法l测定
1.2.8血浆丙二醛(malondialdehyde,MDA)
含量测定采用硫代巴比妥酸比色法【8l测 正.
1.2.9
书进行操作.
2结果
2.1对大鼠关节形态学和病理结构的影响 表l结果显示,给药后7,14,21,28 d白虎追风胶囊组大鼠右足肿胀率明显小于
AA组,差别有显着性(P<0.05或P<0.01
).表明白虎追风胶囊对AA大鼠原发性病 变有较好的治疗作用.
病理切片结果显示,AA造模组大鼠踝关 节周围软组织内见大量淋巴细胞,单核细胞 浸润,并可见大量类上皮细胞反应,部分区 域类上皮细胞聚集成团,形态颇似结核结节, 类上皮细胞团周围有大量淋巴细胞,单核细 胞聚集.滑膜巴皮细胞增生,肿胀肿胀之 滑膜上皮细胞呈立方形,低柱状甚至成复层, 上皮下见少量淋巴细胞及单核细胞浸润.白 虎追风胶囊组滑膜上皮增生程度较轻,上皮 及周围软组织内浸润之炎症细胞亦较造模组 少,说明白虎追风胶囊对AA大鼠病变关节 的病理组织结构有一定的改善作用. 2.2对AA大鼠滑膜细胞分泌IL一1,TNF— n和r'GF~的影响
表l白虎追风胶囊对AA大鼠足跖
肿胀的影响(?J
AA组1064l?275
药低组10柏.1?1I3'
药高组1040.0?1I2'
雷公藤组42.8?【53'
6l5?笠.B647?2BI425?153
?.7?21)64D6?l8.0248?l6.B' 34.B?【2336?119''236?125
41I?171'艚9:t-1t4213?125
*与AA组比较P<O舾.**P<O01 表2白虎追风胶囊对AA大最滑膜,
PF一.和P的影响(雾?
血清NO含量测定按测试盒说明P0?,??Pc0010001*与正常组比较:p<..tP<;
?与M蛆比较
74广州中医药大学2000年第】7卷 表2结果表明,AA大鼠滑膜细胞分泌 lL—l,TNF—n和PGE2的含量较正常组大鼠 明显增高(P<0.01),白虎追风胶囊高, 低剂量均可降低AA大鼠异常增高的IL一1, TN}l_a活性和PGE2含量,使其接近或恢复 正常水平
2.3白虎追风胶囊对AA大鼠血液中LPO, SO1),GSH—Px和NO的影响
各组动物于造模后30d眼球取血,分别 检测红细胞SOD活性,全血GsH.P)【活性, 血浆MDA含量和血清NO含量.结果证明白 虎追风胶囊组可以降低从大鼠过高的LPO, NO水平,同时还使其过低的SOD和GSH— Px活性增高或恢复正常(见表3). 3讨论
白虎追风胶囊是由桂枝,白芍,知母, 石膏,白芷,薏苡仁,制川乌,细辛,黑老 虎等药组成,具有清热祛湿,驱风通络止痛 的作用.实验结果表明白虎追风胶囊对大鼠 AA有良好的治疗作用,对AA大鼠病变关 节的病理组织结构有一定的改善作用. 细胞因子在RA的发病过程中起重要作 用,其中以IL一1和F的作用较为突出. 细胞因子刺激滑膜成纤维细胞,毛细血管内
皮细胞高度增殖,构成RA特征性血管翳; 刺激软骨细胞,破骨细胞产生前列腺素E, (pGE2)以及胶原酶等多种蛋白水解酶;激 活中性粒细胞释放溶酶体酶,自由基等炎症 介质,成为引起关节软骨,骨质等组织破 坏,导致关节内粘连以及后期关节畸形的关
.实验结果表明,键因素_9J白虎追风胶囊 可降低AA大鼠异常增高的IL一1,F—a 活性和PcE2含量,提示其对AA大鼠的治疗 作用可能与其抑制滑膜分泌的细胞园子及炎 症介质有关
文献报道?,氧自由基(OFR)和一
氧化氧(NO)参与类风湿性关节炎和佐剂 性关节炎的病理损伤过程.本文检测AA大 鼠脂质过氧化物产物MDA含量可代表LPO 水平,LPO水平不仅反映自由基产生的程
OD清 度,而且还提示对机体损伤的强度.S除,减少H2的生成,是代表机体内抗氧 化能力的重要指标.GSH—P)【清除H'o), 防止H2被进一步氧化为毒性更强的 OH一.研究表明白虎追风胶囊可降低血浆 LPO及血清NO水平,并提高机体内源性的 抗氧化酶SOD,GSH—Px的活性.提示其对 大鼠AA的治疗作用也可能与其提高机体抗 氧化系统能力,清除过多的LPO及NO,减 少自由基对机体的损伤有关.
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I510405,China;2GIadua躅of
Grade96,6llIUalvem[ty0rM,曲曲510405.Claim)
Ahslract:Torevealtheanti—iaflar~m3atorymechanismofl~ihuZhuifengCapsule(BZC),
?1eeffectsof
BZConsynovialinterleukin-1(?,1),alpIlatmnornecrosisfactor(F?)andpr,~taglandinE2 (PGE2),andbloodoxygenfreeradicalandniricoxide(NO)inratswithadjuvantarthritis(AA)
were
observed,TheresultsshowedthatBZCcouldreducethehypersecretionofIL一1,F?
andPGE2,
decreaseseFulnlipidperoxidesandNOcontentsandincreasesupemxidedismutaseandgluta
thionepemx—
idaselevels.ItisindicatedthatthemechanismofBZCisprobablyrelatedtotheinhibitionofsy
novial
cytokinesandinflammatorymedialorandtheantioxidation, Keywords:@BAIHUZHUIFENGCAPSULE/phammcology; ARTHRITIS,M)JUVANT/TCDther.;AR唧rI1s.RHEUm.IDlD厂rcDther,;
SYNOVI_AIMEMBRANE/secmt.:
TUMORNECROSISrACTOR/~a.;
LIPIDPEROXIDATION/drugeft.; SUPEROXIDEDISMUT^SE/bl00d:
INTERLEUKIN一1/anal;
PROSTAGLANDINSE/ana1.;
GIX1TAHIONEPER0XlDASE/blood NrIR?ES/blood
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