中药五白散对308nm准分子激光诱导色素沉着动物模型的影响_查伟锋
收稿日期:2011 - 11 - 11
作者简介:查伟锋(1985 -) ,男,浙江临安人,硕士研究生,研究方
向:中西医结合防治皮肤病及激光美容。
通讯作者:宋为民(1968 -) ,男,浙江宁海人,副主任医师,硕士研
究生导师,研究方向:中西医结合防治皮肤病及激光美
容。
经和神经分泌组织的活性水平居中,最低值见于非神经组
织、血清和脊髓液。它被发现在与神经内分泌组织起源有
关的肿瘤中,特别是 SCLC中有过量的 NSE表达,导致血清
中 NSE明显升高。
本项目结果显示,tPNS 能诱导 MSCs 转变为类...
收稿日期:2011 - 11 - 11
作者简介:查伟锋(1985 -) ,男,浙江临安人,硕士研究生,研究方
向:中西医结合防治皮肤病及激光美容。
通讯作者:宋为民(1968 -) ,男,浙江宁海人,副主任医师,硕士研
究生导师,研究方向:中西医结合防治皮肤病及激光美
容。
经和神经分泌组织的活性水平居中,最低值见于非神经组
织、血清和脊髓液。它被发现在与神经内分泌组织起源有
关的肿瘤中,特别是 SCLC中有过量的 NSE表达,导致血清
中 NSE明显升高。
本项目结果显示,tPNS 能诱导 MSCs 转变为类似于神
经元样的形态,经免疫组织化学鉴定,大多数细胞表现为
NF - M、NSE、nestin、MAP - 2 和 GAP - 43 染色阳性,并在胞
质和突起中有棕黄色的物质。SABC法显示 NSE和 MAP -
2阳性细胞数分别为(72. 64 ± 2. 04)%和(73. 5 ± 2. 17)%。
提示三七总皂苷在体外能使 MSCs 向神经元样细胞转化,
且具有神经元样细胞的特性,这为 MSCs 治疗相关疾病提
供了理论基础。
参考文献
[1] Martin DR,Cox NR,Hathcock TL,et al. Isolation and charac-
terization of multipotential mesenchymal stem cells from feline
bone marrow[J]. Exp Hematol,2002,30:879 - 886.
[2] 撒亚莲,李海标.三七总皂苷诱导骨髓间质干细胞分化为神
经元样细胞[J].中山医科大学学报,2002,23(6) :409 - 410,
437.
[3] Woodbury D,Schwarz EJ,Prockop DJ,et al. Adult rat and hu-
man bone marrow stromal cells differentiate into neurons[J]. J
Neurosci Res,2000,61 (4) :364 - 370.
[4] Yuehua Jiang,Balkrishna N,Jahagirdar R,et al. Pluripotency
of mesenchymal stem cells derived from adult marrow. Nature,
2002 (6893) ,418:41 - 49.
[5] 项平,李海标.黄连素诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样
细胞[J].中国病理生理杂志,2004,20(1) :51 - 53.
[6] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典:1 部[S]. 北京:化
学工业出版社,2000:10.
[7] 施雪英,陈先文,胡慧敏,等.三七总皂苷和维甲酸联合诱导
大鼠 MSCs分化为神经元样细胞[J]. 中国病理生理杂志,
2007,23(3) :612 - 613.
[8] Makino S,Fukuda K,Miyoshi S,et al. Cardiomyocytes can be
generated from marrow stromal cells in vitro[J]. Clin Invest,
1999,103(5) :697 - 705.
[9] 项鹏,夏文杰,王连英,等.丹参注射液诱导间质干细胞分化
为神经元样细胞[J].中山医科大学学报,2001,22(5) :321.
[10] 项平,撒亚莲,黄锦桃,等.三七总皂苷诱导 MSCs分化为神
经元样细胞时胞内钙离子浓度变化的研究[J].中国组织化
学与细胞化学杂志,2005,14(3) :241 - 244.
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中药五白散对 308nm准分子激光诱导
色素沉着动物模型的影响
查伟锋1,宋为民2,艾俊俊3,郑俊惠2,胡玲玲2
(1.浙江中医药大学,浙江 杭州 310053;2.杭州市第三人民医院,浙江 杭州 310009;
3.安徽医科大学杭州临床学院,浙江 杭州 310009)
摘 要:目的:探讨中药五白散对 308nm准分子激光诱导的色素沉着豚鼠模型的影响。方法:308nm 准分子
激光诱导色素沉着豚鼠模型。造模成功后,色素沉着区分为单纯基质乳膏组、2%氢醌组和中药五白散组,分别对
应外涂于皮损区。外用治疗 30 天后,对各组的黑色素指数、黑素细胞、黑素颗粒及皮肤组织病理学检查观察药物
的疗效和安全性。结果:五白散可降低黑色素指数水平,抑制黑素细胞活性,减少黑素生成,减轻 UVB 所致皮肤
色素沉着的程度。结论:中药五白散对 308nm准分子激光诱导豚鼠色素沉着有明显的改善作用,其机制可能是
一定程度上抑制酪氨酸酶活性,减少黑素生成。
关键词:色素沉着;308nm准分子激光;中药;动物模型
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1673 - 7717(2012)04 - 0893 - 03
Influence of Wubai Powder on Pigmentation Animal Model induced by 308nm Excimer Laser
ZHA Wei-feng1,SONG Wei-min2,AI Jun-jun3,ZHENG Jun-hui2,HU Ling-ling2
(1. Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,Zhejiang,China;
2. Hangzhou No. 3 People's Hospital,Hangzhou 310009,Zhejiang,China;
3. Hangzhou Clinical College Affiliated to Anhui Medical University,Hangzhou 310009,Zhejiang,China)
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Abstract:Objective:To observe the influence of Wubai Powder on pigmentation animal model induced by 308nm ex-
cimer laser. Methods:308nm excimer laser induced pigmentation animal model. After establishing the model,the areas of
pigmentation were divided into 3 group:single matrix cream group,2% hydroquinone group and Wubai Powder group,and
daubed them on corresponding lesions. After treamting for 30 days,the efficacy of the tested drug was evaluated compre-
hensively by measurements of melanin index,melanocyte,melanin as well as the histopathology of skin. Result:It was
shown that the tested drug can decrease the level of melanin index,restrain the activity of melanocyte,reduce the genera-
tion of melanin and relieve pigmentation caused by UVB. Conclusion:Wubai Powder had obvious treatment function on
308nm excimer laser - induced pigmentation,its mechanism was to inhibit the activity of tyrosinase,which decreased mel-
anin generation.
Key words:pigmentation;308nm excimer laser;traditional Chinese herb;animal model
近年来中药对皮肤色素沉着的改善作用被广泛关注,
临床上外用中药美白制剂治疗黄褐斑等皮肤色素沉着有
效。本研究选择对酪氨酸酶活性有显著抑制作用的 5 味中
药,制成外用乳剂五白散,应用于 308nm 准分子激光诱导
的皮肤色素沉着动物模型,通过观察黑色素指数、黑素细胞
及黑素颗粒变化,可确定本实验模型是否建立成功,并通过
以上各观察指标客观
药物作用。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 实验动物 采用普通级健康雄性棕黄色豚鼠 20
只,8 周龄,体质量 220 ~ 240g,由浙江中医药大学实验动物
中心提供,委托该中心饲养。每只实验动物背部取 3 块相
离区域,308nm准分子激光造模后外涂药物。
1. 1. 2 实验药物 中药五白散由白芨、白芷、白蔹、白附子
和白僵蚕组成,经杭州市第三人民医院制剂室制成乳膏制
剂;2%氢醌乳膏购自广东人人康药业有限公司生产,国药
准字 H20040088,生产批号 20100802;单基质乳膏由杭州市
第三人民医院制剂室提供。
1. 1. 3 主要仪器 XTRAC巅峰 308nm准分子激光治疗系
统(PhotoMedex,USA) ;MPA9 型皮肤多功能生理测试仪
(CK,GERMANY) ;共聚焦激光扫描显微镜(vivascope l500,
USA)
1. 2 方法
1. 2. 1 动物模型制作 使用 XTRAC 巅峰 308nm 准分子
激光治疗系统造模。电动剃刀将豚鼠背部棕色粗毛剃除,
再以脱毛膏脱去短毛使背部皮肤充分暴露。308nm准分子
激光治疗头直接与豚鼠背部皮肤接触,照射能量 400mJ /
cm2,每周 1 次,共 3 次。每次照射前均需脱毛暴露皮肤。
1. 2. 2 动物分组和给药 每只实验动物背部取 3 块相离
区域,分别给予单纯基质乳膏,2%氢醌乳膏和中药五白散
外涂。于造模成功后开始外用药物,每日 1 次,持续 30 天,
间隔 3 天脱毛 1 次。
2 检查指标
2. 1 黑色素指数测定
使用 MPA9 型皮肤多功能生理测试仪,于造模前后及
用药 30 天后测定豚鼠背部实验区的皮肤黑色素指数。
2. 2 活体下黑色素及黑素细胞观察
采用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM) ,动态观察造模
前后和用药 30 天后豚鼠背部试验区皮肤的黑色素和黑素
细胞的变化情况。
2. 3 组织病理观察
豚鼠皮肤常规石蜡切片,硫酸亚铁染色,光镜下观察黑
色素变化。
3 统计学方法
所有数据采用 SPSS 16. 0 软件进行统计
。各组间
采用 t检验进行比较,数据用均数 ±标准差(珋x ± s)表示,P
< 0. 05 为有统计学差异。
4 结 果
4. 1 皮肤颜色变化
豚鼠背部皮肤 308nm 准分子激光照射(总能量
1200mJ /cm2)。照射后 1 天,照射部位出现红斑,4 ~ 5 天肉
眼红斑消退,6 天后开始出现色素沉着,3 次照射后色素沉
着稳定,开始用药。单纯基质乳膏组,30 天后未见明显色
素减退;2%氢醌组,用药 4 ~ 6 天左右出现发红、脱屑,30
天后色素沉着不明显;中药五白散组未见明显发红、脱屑,
用药 30 天后色素沉着减退。
4. 2 造模前后及用药后各组间黑色素指数比较
308nm准分子激光照射后皮肤黑色素指数较照射前显
著升高(P <0. 01)见表 1。单纯基质乳膏外用后 30 天,黑色
素指数稍下降甚至未下降;2%氢醌连用 30 天后,黑色素指
数较单基质乳膏组明显下降(P < 0. 01) ;中药五白散组与单
纯基质乳膏组相比黑色素指数明显下降(P < 0. 01) ,但与
2%氢醌组比较,差别没有统计学意义(P >0. 05)见表 2。
表 1 造模前后豚鼠皮肤黑色素指数比较(珋x ± s)
组别 n 黑色素指数
照光前 60 164. 80 ± 55. 99
照光后 60 340. 70 ± 99. 52*
注:与照光前比较,* P < 0. 05。
表 2 各组 30 天后黑色素指数比较(珋x ± s)
组别 n 黑色素指数
单纯基质组 20 315. 50 ± 92. 33
2%氢醌组 20 217. 20 ± 78. 24*
中药组 20 242. 55 ± 74. 42*
注:与单纯基质组比较,* P < 0. 01。
4. 3 CLSM下治疗前后各组黑素细胞及色素颗粒观察
CLSM能非创伤性实时动态观察活体表皮和真皮浅层
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的多种生理病理变化,尤其在色素性疾病的检查上有独特
优势。308nm准分子激光照射后,CLSM下豚鼠表皮基底层
可见大量树枝状黑素细胞及色素颗粒,黑素细胞功能活跃;
与治疗前相比,单纯基质乳膏外用后 30 天,黑素细胞和色
素颗粒未见明显变化,而 2%氢醌组与中药五白散组树枝
状黑素细胞数量及色素颗粒明显减少。见图 1。
①造模前:基底层色素颗粒均匀散在②造模后:基底层见大量色素颗粒和树枝状黑素细胞,高折光性,似黄褐斑样
改变③2%氢醌:色素颗粒减少,残留少许树枝状黑素细胞④中药五白散:色素颗粒减少,局部可见数量不定树枝状黑素
细胞⑤单纯基质乳膏:可见大量折光性强的色素颗粒和黑素细胞。
图 1 CLSM下黑素细胞和色素颗粒改变
4. 4 组织病理学观察
308nm准分子激光照射后黑素颗粒显著增加;单纯基
质乳膏组使用 30 天后未见明显黑素颗粒减少迹象;2%氢
醌组连续应用 30 天,黑素颗粒较外用单纯基质乳膏组明显
减少;中药五白散组外用 30 天后黑素颗粒较单纯基质乳膏
组明显减少。见插页Ⅷ图 2。
5 讨 论
UVB照射豚鼠作为色素沉着实验动物模型已被成功
应用[1 - 3]。本实验采用局部双倍最小红斑量的紫外线多次
照射棕色豚鼠的方法制作动物模型。根据文献资料,豚鼠
UVB的最小红斑量为 200 ~ 300mJ /cm2[4],实验选择单次
400mJ /cm2剂量,3 次照射的方法所形成的色素沉着稳定、
均匀。
酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的关键酶[5]。抑制酪
氨酸酶活性可阻止皮肤黑素生成。理想的皮肤脱色剂是能
作用于该酶,脱色快速有效且无明显不良反应的制剂。氢
醌是经典的皮肤脱色剂,外用可引起皮肤红斑、脱屑瘙痒和
刺痛,刺激性与浓度及接触时间有关[6]。实验中发现每日
外用 1 次 2%氢醌,4 ~ 6 天左右局部出现发红、脱屑等刺激
性反应。中药五白散由白芨、白蔹、白芷、白附子和白僵蚕
五味中药组成,各药均能有效抑制酪氨酸酶活性。雷铁
池[7]等观察了 82 味中药乙醇提取液对酪氨酸酶活性和黑
素生成量的影响,仅有 11 味在高、中、低 3 个浓度均对酪氨
酸酶活性和黑色素生成量呈剂量依赖性抑制,其中白僵蚕、
白芨和白附子乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制率与熊果
苷无统计学差异(P > 0. 05)。张美华[8]等通过观察 48 味
中药水提物对黑素形成的影响,发现 10 味中药对黑素形成
有抑制作用,其中白芷、白蔹和猪苓的作用最强,且与空白
组比较差别有显著性。本实验中,五白散在抑制黑素生成,
降低皮肤色素沉着上效果满意,同时没有出现氢醌常见的
刺激性反应。
综上所述,中药五白散在降低皮肤色素沉着上与氢醌
有类似的功效,能抑制黑素细胞活性和减少黑素颗粒的产
生,并且在用药过程中,对皮肤的刺激性小或无刺激,对色
素增加性皮肤病如黄褐斑的防治有很大指导意义。
参考文献
[1] Yokota T,Nishio H,Kubota Y,et al. The inhibitory effect of gla-
bridin from licorice extracts on melanogenesis and inflammation
[J]. Pigment Cell Res,1998,11:355 - 361.
[2] Maeda K,Naganuma M. Topical trans - 4 - aminomethylcyclohex-
anecarboxylic acid prevent ultraviolet radiation - induced pigmen-
tation[J]. J Photochem Photobiol B,1998,47(2 - 3) :136 -
141.
[3] Imokawa G,Kawai M,Mishima Y,et al. Differential analysis of
experimental hypermelanosis induced by UVB,PUVA,and al-
lergic contact dermatitis using a brownish guinea pig model[J].
Arch Dermatol Res,1986,278(5) :352 - 362.
[4] Tobiishi M,Haratake A,Kaminaga H,et al. Pigmentation in in-
trinsically aged skin of A1 guinea pigs[J]. Pigment Cell Res,
2004,17(6) :651 - 658.
[5] Kubo I,Yokokawa Y,Kinst - Hori I. Tyrosinase inhibitors from
Bolivian medicinal plants[J]. J Nat Prod,1995,58(5) :739 -
743.
[6] 方晶,朱文元,张美华.橙皮苷对中波紫外线诱导豚鼠色素沉
着抑制作用的研究[J].临床皮肤科杂志,2007,36(3) :141 -
144.
[7] 雷铁池,朱文元,夏明玉,等. 82 味中药乙醇提取物对酪氨酸
酶活性的抑制作用[J].中草药,1999,30:336 - 339.
[8] 张美华,朱文元. 48 种中药水煎剂对体外培养鼠黑素瘤细胞
黑素形成影响的研究[J].江苏中医,1999,20:44 - 45.
598
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