我是一片快乐的小雪花

过氧化氢含量测定 学院；资源环境学院                                          姓名：王仁杰 前言：植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。因此，植物组织中H2O2含量与植物的抗逆性密切相关 测定原理：H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀，可被H2SO4溶解后，在415nm波长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。 仪器和用具：材料：小麦幼苗、研钵、移液管0.2ml×2支、5ml×1支、容量瓶10ml×7个、离心管5ml×8支、离心机、分光光度计。 方法步骤： 1 1.制作曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按加入试剂。 试剂（ml） 离 心 管 号   1 2 3 4 5 6 7 100μmol/L H2O2 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 4℃下预冷丙酮 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 5%硫酸钛 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 浓氨水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 4000r/min 离心5min，弃去上清夜，留沉淀 2mol 硫酸 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0                 待沉淀完全溶解后，415nm波长下比色，测定器吸光值，绘制标准曲线。 2、样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织1g加入2ml预冷丙酮研磨成匀浆后，转入离心管4000 r/min下离心5min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后4000rpm/min离心5min，弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3～5次，直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。 3.结果计算： 植物组织中H2O2含量(μmol/g Fw)= 式中  C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）； Vt—样品提取液总体积（ml）； V1—测定时用样品提取液体积（ml）； FW—植物组织鲜重（g）。 4、实验结果:   1 2 3 4 5 6 7 H2O2浓度 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 吸光度A 0 0.053 0.136 0.350 0.455 0.629 0.797                 得出标准曲线如下图：                            测定所得样品的吸光度为0.269，带入y=1.1805x得浓度为0.341，考虑到称取鲜重1.004g 代入公式含量为H2O2 =2.377μmol/g Fw。 注意事项 1、离心机离心时应该先配平。 2、加试剂的顺序一定不可以错。 3、每次加完一种试剂后都要充分摇匀。 4、注意所用H2O2 的浓度。