参仙生脉口服液HPLC指纹图谱研究

参仙生脉口服液HPLC指纹图谱研究 参仙生脉口服液HPLC指纹图谱研究 陕西中医2011年第32卷第9期1239 3.3试验中采用了两种提取70%乙醇回 流提取30rain,700.4乙醇超声提取15min,两种方法提 取后,药渣对茚三酮反应均呈阴性,证明已基本提取完 全.最终采取7O乙醇超声提取15rain. 参考文献 [1]《中华本草》编委会.中华本草第8卷[M].上海:上 海科学技术出版社,1999:71. E23刘惠文,韩振泰.HPLC法测定石刁柏中的蜀葵氨酸 含量[J].中草药,1999,30(7):501. [3]肖崇厚.中药化学[M].上海:上海科学技术出版 社,1997:560. (收稿2011-03—04;修回201J-04—11) 参仙生脉口服液HPLC指纹图谱研究 杨娟英林玉红谢伟王月茹?陕西步长制药有限公司(西安710075) 摘要目的:建立参仙生脉口服液HPLC指纹图谱的分析方法.方法:色谱柱:AlltimaC.柱(4. 6mm×250mm,5m),流动相:乙腈一水梯度洗脱,流速:1.0mL/min,全波长.结果: 建立了参仙生脉口服液HPLC指纹图谱,确立了10个共有峰,并且3个色谱峰已经归 属,相似度均值0.997,RSD为0.3%.结论:该方法重现性好,可为参仙生脉口服液的质 量评价提供较全面的信息. 主词中药/复方/标准色谱法,高压液相@参仙生脉口服液 【中图分类号】R917【文献标识码】A【文章编号】1000—7369(2011)09—1239—02 参仙生脉口服液是由红参,淫羊藿,枸杞子,补骨 脂等药材组成,具有温补心肾,活血化瘀之功效.用于 阳虚脉迟症,症见脉迟,脉结,心悸,胸闷,胃寒肢冷,腰 膝酸软,气短乏力等症,对于现代医学中病窦综合症及 窦性心动过缓等类型心律失常具有良好的治疗效果. 由于该制剂涉及的药材种类较多,化学成分相对复杂, 各味药材易受产地,药用部位,采收时间,提取工艺等 因素的影响,为有效的控制及评价该制剂的质量带来 了一定的困难.指纹图谱反映的是样品整体的特征的 质量评价方法[1],本试验拟建立该制剂的中药高效液 相色谱(HPLC)指纹图谱.实验中采用全波长检测法, 最终建立了参仙生脉口服液HPLC指纹图谱,为科 学,合理的评价及有效的控制该制剂的质量提供了可 行的参考方法. 1仪器与试药1.1仪器Waters2695高 效液相色谱仪,Empower色谱工作站,2996二极管阵 列检测器;HB3120U型数控超声波发生器;Sartorius BT125D电子天平. 1.2试药人参皂苷Rg对照品,人参皂苷 Rb对照品,淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定 所提供);参仙生脉口服液1O批(批号100302, 100303,100304,100601,100602,100603,101201, 101202,101203,101204)由山东步长制药有限公司生 ?陕西国际商贸学院(咸阳712046) 产提供;甲醇,乙腈均为色谱纯,其他试剂均为分析纯. 2方法与结果2.1色谱条件色谱柱: KrornosilODSC18(5m,4.6ram×250mm);流动相:乙 腈(A)一水(B)梯度洗脱:O,20min(A:lO%一2O), 2O,40min(A:20一3O),40,65rain(A:30一 38);全波长检测;柱温:30?;流速,1.0mL/min. 2.2对照品溶液的制备取人参皂苷Rg,人参 皂苷Rb,淫羊藿苷对照品适量,至于量瓶中,加甲醇 制成每lmL含0.5rag的溶液,作为混合对照品溶液. 2.3供试品溶液的制备精密量取本品10mL, 用D?型大孔吸附树脂柱吸附,然后用100mL蒸馏水 洗脱,弃去水洗液;用7O乙醇50mL洗脱,收集洗脱 液,蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,并转移至5mL量瓶 中定容,用0.45m的微孔滤膜过滤,取续滤液,即 得. 2.4测定方法及数据处理精密吸取对照品溶 液与供试品溶液各2OL,进样,记录120min的色谱 图,采用国家药典会推荐的"中药色谱指纹图谱相似度 评价系统(2004A版)",经过数据导入,点校正和数据 匹配,将多个批次的样品色谱图进行比较,得到可全面 反映多个色谱图特征的参仙生脉口服液的对照指纹图 谱,根据峰匹配结果,以峰面积为参数,计算出各样品 指纹图谱与对照指纹图谱(R)的整体相似度,结果越 接近1即相似度越高. 2.5稳定性,精密度和重复性考察取同批样 1240陕西中医2011年第32卷第9期 品,按照"2.2.3"项方法制备供试品溶液,分别在0,2, 4,6,8,10,12,24h时测定,观察各峰的tR,峰面积比值 的变化及图谱的相似度.结果表明:各共有峰的t, 峰面积的比值及色谱相似度基本稳定(RSD<2.0,相 似度为<O.920),符合指纹图谱制定的要求;取同一批 样品6份,按照"2.2.3"项方法制备供试品溶液,测定 指纹图谱;6次测定结果稳定,各共有峰的t,峰面积 4258l 31458 _ f...….一 . .^ 一 l1 ?.'. }},一一.. s . ; 一 J』?..《,;,一--# eI:?????-S - r一一t盘j二二:三二={ k一』上J.1..: ".;.? ?S 00013O4260939l352l8652278279131 图110批参仙生脉口服液HPLC指纹图谱 附表10批参仙生脉口服液HPLC 指纹图谱相似度计算结果 样品批号相似度计算结果平均相似度RSD 1OO3Ol 1O03O2 1OO3O3 1OO6O1 1O0602 100603 lO12Ol 1012O2 1012O3 101204 3讨论目前,中药制剂HPLC指纹图谱多 以单一波长下指纹图谱为依据,不能同时反映特征吸 收波长不同的多指标成分的化学信息.为了能更深入 的反映本检测样品指纹信息的整体性,特征性,更全面 的控制该制剂的质量,本试验采用全波长检测法对待 测样品的指纹图谱进行考察,结果发现在254nm处样 品信息较为全面,并且峰形好,分离度高,响应值较大. 相似度是聚类分析中的一个基本概念口.],它反 映了研究对象之间的亲疏程度,聚类分析就是根据研 究对象之间的相似性来进行分类的.在聚类分析技术 的发展过程中,形成了很多种测度相似性的方法.其 的比值及色谱相似度基本一致(RSD<1.2l,相似度< 0.990).以上实验结果表明:本方法的稳定性,精密度 和重复性良好. 2.6共有指纹峰的标定和相似度的计算取10 批复方红景天口服液样品,分别按照"2.2.3"项方法制 备供试品溶液,在上述色谱条件下,测定其色谱图,结 果见图1,2和附表. 0OO130426O939l352l8652278279131 图2参仙生脉口服液HPLC对照指纹图谱 中距离测度的出发点是把每个案例看作ITI维空间中 的一个点,在ITI维空间中定义点与点之间的距离,距 离越近的点,相似程度越高,聚类时更可能归为一类. 指纹图谱反映的是样品整体的特征,进行指纹图谱的 比较,可以反应样品之间的亲疏程度,但是单纯的直观 比较指纹图谱的峰的多少和峰的大小,只是定性比较, 而且又带有个人的主观性.相似度可以定量地描述指 纹图谱,本实验中用相似度分析软件对参仙生脉口服 液lO个批次进行比较,根据其色谱指纹图谱建立对照 指纹图谱(共有模式),计算样品与对照指纹图谱的相 似度算结果均在0.99以上,RSD为0.3,并且对各 色谱图进行色谱峰匹配,结果初步确立了lO个共有 峰,其中3个已标定,因此我们将在今后的研究过程 中,继续确定其他共有峰的归属,这将为本产品的质量 评价的提高提供基础和依据. 参考文献 Eli张聪,王智华,金德庄.中国红参与高丽红参的指 纹谱比较研究[J].中成药,2001,27(3):160—163. [2]赵陆华,屠颖,吴孟华,等.肾宝合剂HPIC指纹图 谱的研究EJ].中国药科大学,2005,36(2):134—136. [3]陆红柳,谭喜莹,张飞,等.急咳停颗粒指纹图谱研 究I-J3.中成药,2007,29(2):157—160. [4]宋敏,杭太俊,张正行.丹参脂溶性成分指纹图谱 标准的对照品对照法研究[J].药物分析杂志,2007,27(1):8— 12. (收稿2O11—03—17;修回20?一O5—03) 1356l 48269加93 % 3 ? O 7 9 9 ? O 456825 999999 99l999l9l1 ??????OOOOOO