RP—HPLC测定骨炎灵颗粒中阿魏酸的含量

RP—HPLC测定骨炎灵颗粒中阿魏酸的含量 RP—HPLC测定骨炎灵颗粒中阿魏酸的含 量 2011年7月第3卷第l9期 July2011Vo1.3No.19 中国中医药诲讯 JournalofChinaTraditionalChineseMedicineInformation?7? RP—HPLC测定骨炎灵颗粒中阿魏酸的含量 付泽华 (四川省巴中食品药品检验所,I~1)lI巴中,636000) 【摘要】目的建立骨炎灵颗粒中阿魏酸的含量测定方法.方法采用RH—HPLC法, 十八烷基硅烷键合相色谱柱;流动相 为甲醇一乙腈一1.O%冰醋酸溶液(24:4:72);波长322nm.结果阿魏酸在 0.073,2.92IXg范围内与峰面积呈很好的线性关 系,平均回收率为98.06%,RSD=1.23%(n=6).结论所建方法结果准确,操作简便,能 用于控制骨炎灵颗粒的质量. 【关键词】骨炎灵颗粒;阿魏酸;高效液相色谱法 DeterminationofferulaicacidinGuyanlingGranulebyRP-HPLC FuZe—hua. BazhongInsitimteforDrugCon~ol,Bazhong636000 【Abstract】 ObjectiveToestablishamethodtodetermineferulaicacidinGuyanlingGranule.MethodsA RP-HPLCmethodwas adoptedwithC18column(4.6mmx150mm,5m).Themobilephasewasconsistedofmethano l—acetonitrile一1.0%aceticacid(24:4: 72).detectionwavelengthwas8etat322nm.ResultsThecalibrationcurveshowedagoodline aritywithintherangeofO.073,2.92g, r=0.9999.TheaveragerecoveryWaS98.06%withRSDofl_23%(n=6).ConclusionThemet hodisaccurate,simpleandreliableforthe qualitycontrolofGuyanlingGranule. 【Keywords】GuyanlingGranule;Ferulaicacid;HPLC 骨炎灵颗粒由骨炎灵片改变剂型制成的颗粒剂,原标 准收载于《卫生部药品》中药成方制剂第五册,是由当 寺??争?夺?夺?牵?夺?夺?争?夺?夺?夺?夺?夺?牵?牵?夺?夺?牵?幸 2.2自愿组与对照组FSH和1rr浓度比较 自愿组与对照组FSH和rrr浓度比较见表2. 表2自愿组与对照组FSH和1TI1浓度比较 单因素方差显示,自愿组与对照组FSH和水 平相比无显着统计学差异(p>O.05o 3讨论 海洛因依赖可引起男性性功能及性行为改变.国外研 究表明,海洛因或阿片类依赖患者与正常对照相比,血TT 水平显着下降,并与滥用时间成正比,血LH和FSH水平与 正常对照相比亦显着降低,推断机制在于海洛因或阿片类 物质作用于下丘脑一垂体一性腺轴,抑制FSH的释放 【2,3].国内魏洁研究表明,自然戒断的海洛因依赖患者在自 然戒断的30天之前,FSH和1Tr浓度在正常范围,但30天 后FSH浓度增高,1Tr含量与正常对照组无差异[4].但也有 文章观察到,男性海洛因类毒物依赖者戒断后血浆TT水 平明显高于对照组『5o 本研究结果表明,强制戒断的海洛因依赖患者在戒断 急性期FSH和1rr水平与正常对照相比无显着差异性,这 与魏洁等研究结果[4卜一致.在稽延性戒断期,FSH水平与 正常对照相比无显着性差异,,ITI'水平显着高于正常对照 组,这与甘西伦等研究结果一致『5o考虑这与戒断后海洛 因对FSH的抑制解除,FSH释放增多,浓度回归正常范围. 由于FSH可促进1rr的释放,故1丫r浓度增加,高于正常对 照组.另一方面,海洛因患者戒断后,由于机体对海洛因的 依赖突然中断,从而使机体处于一种强烈的应激状态,此时 归,川芎等中药组成,具有补气益血,清热解毒,消肿止痛等 功效,用于骨髓炎,开放性骨折感染及虚入痛疡等病症.原 ? 夺?夺?牵?争?夺?夺?孛???夺?夺?夺?牵?夺?夺?孛?孛?夺?夺?夺? 机体分泌一系列激素如促肾上腺皮质激素,雌雄激素等,以 适应机体内外环境的变化.促肾上腺皮质激素可以促进肾 上腺皮质激素分泌,一方面可以使血浆中1T含量增加,另 , 方面又可以促进睾丸间质细胞增加TT的分泌【6】.这些 研究结果不一致的地方考虑与毒品滥用时间有关.本研究 海洛因滥用时间为3年左右,而魏洁等研究毒品滥用时间 为1年左右. 本研究结果表明,海洛因依赖患者自愿戒毒者在药物 替代治疗第二天FSH和1Tr水平与正常对照无显着性差 异,但远期变化未予观察,有待于进一步的研究. 本研究表明,海洛因依赖者强制戒断后,内分泌系统功 能的恢复是不平稳发展的.性激素在恢复的过程中会有"反 复"的现象.这提示我们在脱毒后期应加强稽廷陛戒断症状 的处理,综合应邀药物治疗和心理治疗等手段,以利于患者 的恢复. 参考文献 [1]姜佐宁,万文鹏.药物滥用.1992,北京:科学出版社. [2]H6=ianSH,DashtiMH,RafatiA.TheeffectofopiumonselzIm LH,FSHandtestosteroneconcentrationinaddictedmen.Iranian JournalofReproductiveMedicine.2007;5(1):35-38 [3]EstienneMJ,HarperAF,KnightJW,eta1.Circulatingconcentration ofLH,testosteroneandGHafternaloxanetreatmentinsexuallymature boars.ReprodBio1.2002;2:133—142 [4]魏洁,王志纲,张宪武等.海洛因依赖者自然戒断过程中内分泌 激素含量变化的研究.中国药物依赖性杂志.2000;9(1):30—32 [5]甘西伦,陈跃,陈伯勋等.男性海洛因类毒物依赖者戒断后血浆 T,E2水平变化.放射免疫学杂志.2005;18(5):404—405 [6]刘萍.吗啡依赖大鼠和小鼠戒断后应激行为和激素水平的观察. 中国药物依赖性通报.1997,6(1):181 ? 8? 中国中医药咨讯 JoumalofChinaTraditionalChineseMedicineInformation 2011年7月第3卷第19期 July2011Vo1.3No.19 质量标准中没有含量控制指标,本次研究增加主药当归,川 芎中主要成分阿魏酸的含量测定.据文献资料报道,阿魏酸 的含量测定多采用RP—HPLC法[1],[2J,[31,UPLC法『4],GC 法【5]及毛细管电泳法[6]等,RP—HPLC法应用广泛,故本文 采用RP—HPLC法测定当归,川芎中主要成分阿魏酸的含 量,所用方法操作简便,结果准确,专属性好. 1实验部分 1.1仪器与试药液相色谱仪(Waters515),包括wa— ters2487检测器,Empower色谱工作站;电子天平XS205 (Mettler);阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,含量 测定用,批号:110773—200808);骨炎灵颗粒(批号: 100301,100302,100401;四川泰乐制药有限公司);甲醇,乙 腈为色谱纯,其余试剂为分析纯. 1.2方法与结果 1.2.1色谱条件f1,3,4]采用LunaC18(4.6mm×150mm,5 m)色谱柱;以甲醇一乙腈一1.0%冰醋酸溶液(24:4:72)为 流动相;检测波长322nm;流速为1.0ml?min;柱温30?: 理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3×103. 1.2.2对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量,置 棕色量瓶中,加入含0.5%冰醋酸的90%甲醇溶液制成每 lml含15IXg的溶液,作为对照品溶液. 1.2-3供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物, 研细,取1.0g,精密称定,加硅藻土3g,拌匀,精密加入含 0.5%冰醋酸的90%甲醇溶液25ml,称定重量,超声处理(功 率250W,频率50kHz)20分钟,放冷,再称定重量,用含 0.5%冰醋酸的90%甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过, 取续滤液,作为供试品溶液. 1.2.4专属性试验按制剂处方比例制备缺当归,川芎的阴 性样品,再按"1.2.3"项下方法制得阴性对照溶液.在"1.2.1" 项色谱条件下,精密吸取对照品溶液,阴性对照溶液和供试 品溶液各1071,分别注入高效液相色谱仪,记录色谱图.结 果供试品溶液在对照品溶液相对应位置上有色谱峰,阴性 对照溶液无干扰,测定结果见图1. :A :l t=————一——————J :C I t=二===.———一 图1阿魏酸对照品溶液(A),供试品溶液(B)和阴性对照液 (C)的HPLC图 Fig1HPLCchromatogramsofferulaicacidsolution(A),sample solution(B)andblanksolution(C) 1.2.5线性关系考察精密称取阿魏酸对照品适量,置棕色 量瓶中,用O.5%冰醋酸的90%甲醇溶液分别配制成 0.0073.0.0146,0.0292,0.073,0.146与0.292mg?ml一1的对 照品溶液,分别精密吸取1Ol注入色谱仪,测定峰面积. 以峰面积积分值对进样量(g)进行回归,得回归方程: Y=2.921×106X+5.898×103(r=0.9999).结果阿魏酸进 样量在0.073,2.92g范围内与峰面积呈很好的线性关 系. 1.2.6稳定性实验精密吸取同一供试品溶液,分别于0,2, 6,8,12h测定,结果在室温条件下放置12h内阿魏酸的浓 度没有明显改变,RSD=I.50%. 1.2.7精密度实验精密吸取"1.2.2"项下对照品溶液 10l,连续进样5次,峰面积积分值RSD=1.37%,表明仪 器的进样精密度良好. 1.2.8重复性实验取同一批样品6份,分别按"1.3.0"项下 的方法测定含量,RSD=I.15%,表明分析方法的精密度良 好. 1.2.9加样回收实验取已知含量的样品约0.5g,精密称 定,共6份,分别加入阿魏酸对照品溶液(0.0162mgCm1) 10ml,混匀后,按"1.3.0"项下的方法测定含量后再计算回收 率,结果见表1. 表1加样回收试验结果 Table1Resultsofrecoverytest Ofiginal/mgDeteeted/mgAdded/ragRecovery/%Average/%RSD/% 1.3.样品的测定取3批样品,按"1.2.3"项下的方法制备 _f扯试品溶液,在"1.2.1"项的色谱条件下,精密吸取供试品溶 液和对照品溶液各107l注入液相色谱仪,以峰面积按外标 法计算含量,3批样品中阿魏酸的含量分别为0.31,0.25和 0.26mg'g-. 2讨论 2.1本品为颗粒剂,含有大量蔗糖,对样品测定有一定干扰, 在供试品的前处理处理中加入硅藻土,以吸附样品中蔗糖, 减少干扰. 2.2试验中曾采用甲醇为溶剂,阿魏酸稳定性较差,故样 品的前处理中改用0.5%冰醋酸的90%甲醇溶液为提取溶 剂,增加了阿魏酸稳定性. 2.3骨炎灵颗粒收载于卫生部药品标准中药成方制剂第 五册,该质量标准中未作含量控制.本文以主药当归,川芎 中所含阿魏酸为目标成分,采用高效液相色谱法测定其含 量,结果阿魏酸在0.073—2.92g范围内呈良好的线性关 系(r=0.9999),回收率98.06%,RSD=I.23%(n=6).取三批 骨炎灵颗粒,测得阿魏酸平均含量为0.27mg.g-实验结果 证明,该方法具有操作简便,结果准确,专属性好,为控制骨 炎灵颗粒的质量提供了参考依据. 参考文献 [1]谢先吉,王l临润,吴文娟.经通口服液中阿魏酸含量测定方法的 研究?.药物分析杂志,2005,25(8):992,993 【2】邵玉玲,强百杰,刘专专等.HPLC法测定浓缩当归丸中阿魏酸的 含量『J】.分析测试技术与仪器,2007,13(3):211,214 【3]郝丽晓,高天爱.高效液相法测定归脾丸中阿魏酸的含量[J】.中国 药事,2004,18(11):678,679 f4】杨筱丽,李耿.超高效液相色谱法同时测定解郁丸中芍药苷和阿 魏酸的含量【J】.中国医院药学杂志,2008,28(11):946,947 [5降秋怡,干固平,王光忠等.气相色谱法测定川芎油中阿魏酸的 含量[J].时珍国医国药,2007,18(7):1687,1688 【6]叶鸣.高效毛细管电泳法测定三两半药酒中阿魏酸的含量[J].安 徽医药,2006.lO(3):187