牛结核病提纯结核菌素变态反应试验

牛结核病提纯结核菌素变态反应试验 1. 原理 机体受到结核杆菌刺激时，导致T淋巴细胞转变为淋巴母细胞，并进而增殖分化 为致敏淋巴细胞，使机体致敏;以后如再次接触结核菌时(结核菌素)，致敏淋巴细胞 即释放出各种淋巴因子，一方面使机体现特异性的细胞免疫，而另一方面则发生迟发 型变态反应，出现以单核细胞浸润，以及由于巨噬细胞释出溶酶体酶(水解酶)和淋巴 细胞释出淋巴毒素所引起的组织环死为特征的病理现象。 皮内注射提纯结核菌素(PPD)于正常动物，不出现显著的局部炎症反应。相反，如果 将其注入曾感染结核病而致敏的动物，便发生迟发型超敏感性应答，在几小时之内注射 局部不出现肉眼的或组织学的变化，但以后血管扩张，通透性增加，因而出现红斑和水 肿，肿胀硬固。组织检查，这种病变和典型的急性炎症反应不同的是，浸润细胞主要是 单核细胞，即巨噬细胞和淋巴细胞，虽然反应初期也出现短暂的嗜中性白细胞的积聚。 注射后24-72小时反应程度最强，以后逐渐消退。非常严重的反应，在注射局部可发生 坏死。 2.器材与试剂 酒精棉、卡尺、1-2.5ml注射器、针头、牛型提纯结核菌素。 3.操作 3.1注射部位及术前处理:在颈侧中部上1/3处剪毛(或提前一天剃毛)，三个月以内的 犊牛，也可在肩胛部进行，直径约10cm，用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。 如术部有变化时，应另选部位或在对侧进行。(图-1) 图片 1位置 3.2注射剂量:不论大小牛只，一律皮内注射1万国际单位。即将牛型提纯结核菌素稀释成每毫升含10万国际单位后，皮内注射0.1ml。如用2.5ml注射器，应再加等量注射用水皮内 注射0.2ml。冻干菌素稀释后应当天用完。 3.3注射方法:先以75%酒精消毒术部，然后皮内注入定量的牛型提纯结核菌素，注射后局 部应出现小泡，如注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重作。 3.4注射次数和观察反应:皮内注射后经72小时判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性 反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好记录。对疑似反应牛应即在另一侧以同一批菌素同一剂量进行第二回皮内注射，再经72小时后观察反应。如有可能，对阴性和疑似反应牛，于注 射后96和120小时再分别观察一次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。 图片-2 用微标卡尺测量检测部位厚度 3.5结果判定: 3.5.1阳性反应:局部有明显的炎性反应。皮厚差等于或大于4mm以上者，其记录符号为(+)。 对进出口牛的检疫，凡皮厚差大于2mm者，均判为阳性。 3.5.2疑似反应:局部炎性反应不明显，皮厚差在2.1-3.9mm间，其记录符号为(?)。 3.5.3阴性反应:无炎性反应。皮厚差在2mm以下，其记录符号为(-)。 3.6凡判为疑似反应的牛只，于第一次检疫30天后进行复检，其结果仍为可疑反应时，经 30-45天后再复检，如仍为疑似，应判为阳性。 附:感染禽型结核菌或副结核菌牛群的诊断方法 如果牛群有感染禽型结核、副结核菌病可疑、或免疫过副结核苗时，可以应用牛、禽两型提纯结核菌素的比较试验进行诊断(副结核分枝杆菌与禽结核分枝杆菌有共同抗原)。其方法 和判定如下: 1.注射部位及术前处理:将牛只编号后在同一颈侧的中部选两个注射点，一点在上1/3处，一点在下1/3处。剪毛(或提前一天剃毛)直径约10cm，用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。两个注射点之间的距离不得少于10cm，注射点距离颈项顶端和颈静脉沟也不得 少于10cm。如术部皮肤有变化时，选对侧颈部进行。 2.注射剂量:在上1/3处皮内注射禽提纯结核菌素0.1ml(每毫升含25000国际单位)，在下1/3处皮内注射牛型提纯结核菌素0.1ml(每毫升含10万国际单位)。不论大小牛只，注射剂量相同。如用2.5ml注射器注射剂量(0.1ml)不易掌握，应加等量生理盐水或注射用水 稀释后皮内注射0.2ml，冻干菌素稀释后应当天用完。 3.注射方法:以75%酒精消毒术部，然后皮内注射定量的牛、禽两种提纯结核菌素，注射后 局部应出现小包，如注射有疑问时，可另选15cm以外的部位或对侧颈部重作。 4.观察反应:注射后经72小时判定(可于48和96小时各进行一次判定)。详细观察和比较两种菌素炎性反应的程度。并用卡尺测量其皮厚，分别计算出牛、禽两种菌素皮内变态反应的皮厚差，然后比较二者之间的皮差(如果增加了48和96小时的判定时间，即可比较出两 种菌素反应消失的快慢)。 5.判定结果: 5.1牛型提纯结核菌素反应大于禽型提纯结核菌素反应，两者皮差在2mm以上，判为牛型提纯结核菌素皮内变态反应阳性牛。记录符号为(M+)。对已经定性的结核牛群。少数牛即使牛、禽两型之间的皮差在2mm以下，或牛型提纯结核菌素反应略小于禽型提纯菌素的反应(不超过2mm)，也应判定牛结核菌素反应牛(但牛型提纯结核菌素本身反应的皮厚差应 在2mm以上)。 5.2禽型提纯结核菌素反应大于牛型提纯结核菌素的反应，两者的皮差在2mm以上，判为禽型提纯结核菌素皮内变态反应阳性牛。其记录符号为(A+)。对已经定性的副结核菌或禽结核菌感染的牛群，即使禽、牛两型提纯结核菌素之间的反应皮差小于2mm或禽型提纯结核菌素反应略小于牛型提纯结核菌的反应(不超过2mm)，也应判为禽结核菌素反应牛(但 禽型提纯结核菌素本身反应的皮差应在2mm以上)。 6.对进出口牛的检疫，任何一种菌素(牛、禽、副)皮差超过2mm以上(或局部有一定炎 性反应)，均认为是不合格。